本发明应用于中药制剂
技术领域：
：，具体涉及香连产物或其与抗生素联合在抗幽门螺杆菌药物中的应用。
背景技术：
：：黄连始载于《神农本草经》，列为上品。黄连味苦，性寒，有泻火、解毒、清热、燥湿的功能。用于烦热神昏、心烦失眠、湿热痞满、呕吐、腹痛泻痢、目赤肿毒、口舌生疮、湿疹、烫伤、吐血、衄血等。大量的研究结果表明，黄连具有极强的抗幽门螺旋杆菌(hp)作用(徐艺等.中草药单味与复方对幽门螺杆菌抑菌作用研究，中国中西医结合脾胃杂志，8(5)：292.2000)。以黄连为主要原料的著名经方有香连丸和左金丸等。香连丸出自《政和本草》卷七引《李绛兵部手集方》，由4份萸黄连和1份木香组成，具有清热化湿、行气止痛的功能，用于大肠湿热所致的痢疾，症见大便脓血、里急后重、发热腹痛，肠炎、细菌性痢疾见上述症候者。幽门螺杆菌(hp)是引发各种胃部疾病包括胃癌的第一致病因子，在我国的感染率高达50％左右(chenw,etal.disparitiesbyprovince,age,andsexinsite-specificcancerburdenattributableto23potentiallymodifiableriskfactorsinchina:acomparativeriskassessment.lancetglobalhealth,2019,7(2):e257-69)。目前，临床上清除hp的方法主要是“三联疗法”和“四联疗法”。随着抗生素的广泛使用甚至是滥用，造成细菌产生了不同程度的耐药性，对人类或动物的健康构成严重威胁；目前治疗hp的抗生素主要有6个(克拉霉素、阿莫西林、呋喃唑酮、左氧氟沙星、甲硝唑、四环素)，他们都有一定的耐药性，有的因为耐药性很严重，实际上无法使用。寻找新的抗hp药物是未来治疗hp的研究重点。在现有技术中，有利于香连丸与三联疗法(奥美拉唑20mg、克拉霉素500mg、阿莫西林胶囊1000mg)联用，可以提高三联疗法清除hp的效果(张霖，香连丸联合三联方案治疗幽门螺杆菌相关消化性溃疡的临床研究，陕西中医，2015,36(3)：296。)。但由于三联疗法本身就是大剂量使用多种抗生素，再增加大剂量的“香连丸”或者香连片联合使用，口服剂量更大，更加困难，临床依从性很差；同时，大剂量使用抗生素和大剂量使用中药，安全性也差。因此，研发一种抗幽门螺杆菌的药物组合，使用小剂量的药物即可保证抗幽门螺杆菌的治疗效果，药物安全性提高。根据医学杂志《柳叶刀》的调查显示，截止2017年，中国的肥胖人口位居世界首位，拥有4320万肥胖男性和4640万肥胖女性，分别占全球的16.3％和12.4％。肥胖将引发脂肪肝等疾病，有医学专家保守估计，目前我国脂肪肝患者高达2亿之多，并且有逐年上升趋势。长期的脂肪肝将会引发肝纤维化，进而引起冠心病和动脉硬化疾病的发作，拖延时间过长会引起肝纤维化甚至肝硬化和肝癌。目前，临床上并没有治疗肝纤维化的理想药物，也没有治疗和预防脂肪肝引发的肝硬化的药物。寻找新的预防脂肪肝引发的肝纤维化和肝硬化药物，进而预防肝癌等重大疾病的药物是未来的研究重点。然而现有技术中治疗或预防脂肪肝、肝纤维化、肝硬化和肝癌没有发现采用香连产物治疗的先例，且多安全性较差。技术实现要素：本发明针对现有技术中存在的上述问题，提供香连产物或其与抗生素联合在抗幽门螺杆菌药物中的应用。本发明解决其技术问题是采用以下技术方案实现的：一种超浓缩香连产物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：1)萸黄连提取物的制备：称取萸黄连，渗漉提取后中和到ph＝2.0-7.0之间，过滤；滤液减压浓缩到0.5-2g萸黄连/ml；滤液中添加卤化盐，沉淀过滤，得到提取物ⅰ；过滤后的母液添加卤化盐及高价卤化盐，沉淀过滤，得到提取物ⅱ；合并提取物ⅰ和提取物ⅱ沉淀，得到萸黄连提取物；2)木香提取物的制备：称取木香，回流提取挥发油；提取后的水溶液过滤，将过滤后的残渣重复回流提取过滤1-2次，合并过滤后的水溶液得到提取物ⅲ；提取液ⅲ减压浓缩到1-2g木香/ml；添加乙醇过滤，得到醇溶液；回收乙醇，烘干，得到木香水提醇沉提取物；合并所述挥发油和木香水提醇沉提取物，得到木香提取物；3)将所述萸黄连提取物与木香提取物混合后，添加辅料、制粒后得到所述超浓缩香连产物。一种超浓缩香连产物的制备方法，包括以下步骤：1)萸黄连提取物的制备：称取萸黄连，用0.1％-2％的硫酸溶液渗漉提取，渗漉液用石灰或者氢氧化钙中和到ph＝2.0-7.0之间，过滤；滤液减压浓缩到0.5-2g萸黄连/ml，冷却，过滤；滤液中添加1-20％的卤化盐，0-25℃下静止1-96小时，沉淀过滤，得到提取物ⅰ；过滤后的母液中再添加1-20％的卤化盐，以及0.1-2％的高价卤化盐，0-25℃下静止1-96小时，沉淀过滤，得到提取物ⅱ；合并提取物ⅰ和提取物ⅱ沉淀，得到萸黄连提取物；2)木香提取物的制备：称取木香，用5倍水回流提取1-3小时，收取挥发油；提取后的水溶液过滤，将过滤后的残渣重复回流提取过滤1-2次，合并过滤后的水溶液得到提取物ⅲ；提取液ⅲ减压浓缩到1-2g木香/ml；添加1-3倍乙醇，静止1-24小时，过滤，得到醇溶液；回收乙醇，烘干，得到木香水提醇沉提取物；合并所述挥发油和木香水提醇沉提取物，得到木香提取物；3)将所述萸黄连提取物与木香提取物混合后，添加辅料、制粒后得到所述超浓缩香连产物。进一步的，所述步骤1)中渗漉提取至渗漉液中黄连总生物碱的含量为萸黄连总量的95％以上。进一步的，所述步骤1)中的卤化盐是指卤素的一价盐，优选为氯化钠、氯化钾、溴化钠、溴化钾、碘化钠、碘化钾、氟化钠或氟化钾。所述高价卤化盐是指二价以上的卤素的金属盐，优选为氯化铁、氯化锰或氯化锌。进一步的，所述步骤3)制粒后分别制成丸剂、片剂或胶囊剂。进一步的，所述超浓缩香连产物中黄连总生物碱的含量为50～90％。一种香连产物在预防和治疗脂肪肝、肝纤维化、肝硬化和肝癌药物中的应用，所述香连产物为以萸黄连和木香为主要成分的中药组合物，所述香连产物包括所述超浓缩香连产物。优选的，所述香连产物包括香连丸、香连片、香连胶囊、浓缩香连丸、超浓缩香连产物中的至少一种。优选的，香连胶囊、浓缩香连丸或超浓缩香连产物在预防和治疗脂肪肝、肝纤维化、肝硬化和肝癌药物中的应用。一种香连产物在预防和/或治疗幽门螺杆菌药物中的应用，所述香连产物为以萸黄连和木香为主要成分的中药组合物，所述香连产物包括所述超浓缩香连产物。优选的，所述香连产物包括香连丸、香连片、香连胶囊、浓缩香连丸、超浓缩香连产物中的至少一种。在本发明中，所述香连丸、香连片、香连胶囊、浓缩香连丸为市售或按已知方法制备而成的中药产品。在本发明中，超浓缩香连产物为上述制备方法制得的所述超浓缩香连产物。一种香连产物与一种或两种抗生素联合在预防和/或治疗幽门螺杆菌药物中的应用，所述香连产物为以萸黄连和木香为主要成分的中药组合物，所述香连产物包括所述超浓缩香连产物。优选的，所述香连产物包括香连丸、香连片、香连胶囊、浓缩香连丸、超浓缩香连产物中的至少一种。进一步的，所述抗生素为克拉霉素、阿莫西林、呋喃唑酮、左氧氟沙星、甲硝唑、四环素、奥美拉唑、其他ppi中的一种或两种。优选的，所述两种抗生素为奥美拉唑与克拉霉素、奥美拉唑与阿莫西林、奥美拉唑与甲硝唑、奥美拉唑与左氧氟沙星、奥美拉唑与呋喃唑酮中的一种。进一步的，香连胶囊或超浓缩香连产物与一种抗生素联合在预防和/或治疗幽门螺杆菌药物中的应用。进一步的，所述一种抗生素为克拉霉素、阿莫西林、呋喃唑酮、左氧氟沙星、甲硝唑中的一种。进一步的，香连胶囊或超浓缩香连产物与两种抗生素联合在预防和/或治疗幽门螺杆菌药物中的应用。优选的，超浓缩香连产物为上述制备方法制得的所述超浓缩香连产物。进一步的，所述两种抗生素为奥美拉唑与克拉霉素、奥美拉唑与阿莫西林、奥美拉唑与甲硝唑、奥美拉唑与左氧氟沙星、奥美拉唑与呋喃唑酮中的一种。本发明中所指的黄连总生物碱是指黄连中小檗碱、巴马汀、黄连碱、表小檗碱、药根碱等生物碱之和。本发明中香连产物在预防和治疗脂肪肝、肝纤维化、肝硬化和肝癌药物以及预防和/或治疗幽门螺杆菌药物中的有效使用量为目前香连产物应用领域中的常用量。与现有技术相比，本发明的有益效果在于：(1)本发明香连产物具有较好的抗hp作用，与一种抗生素联用，抗hp效果较单独使用香连产物显著提升；与两种抗生素联用，其抗hp的效果与常用三联法联用一致，都具有非常理想的抗hp效果。(2)本发明采用中药组合物与抗生素联用，显著提高了抗生素的抗菌活性，并明显的抑制了抗生素的耐药性，与常规的三联疗法相比，减小甚至消除了抗生素的耐药性以及三联疗法的毒副作用，提高了药物的安全性。(3)本发明选用超浓缩香连产物，黄连生物碱含量高，中药制剂体积小，只有原配方生药量的15％左右，口服更容易；杂质更少，安全性更高。(4)本发明选用超浓缩香连产物，超浓缩香连产物的制备工艺简单，制成的中药制剂体积小，便于加工成为胶囊剂、片剂(包衣)和丸剂(包衣)等，可有效提高制剂的口感，显著提高了临床依从性；黄连生物碱的利用率高，总生物碱的转移率95％以上，溶液中总生物碱的沉淀率在95％以上。(5)本发明香连产物具有较好的预防和治疗脂肪肝、肝纤维化和肝硬化等作用。附图说明图1为本发明香连产物或其与抗生素联合在抗幽门螺杆菌药物中的应用中肝纤维化masson染色结果。图2为本发明香连产物或其与抗生素联合在抗幽门螺杆菌药物中的应用中肝硬化he染色及masson染色结果。具体实施方式以下结合具体实施例对本发明技术方案作进一步详细说明。应当理解，下列实施例仅为示例性地说明和解释本发明，而不应被解释为对本发明保护范围的限制。凡基于本发明上述内容所实现的技术均涵盖在本发明旨在保护的范围内。另外，除非另有特别说明，本发明中用到的各种原材料、试剂、仪器和设备均可通过市场购买获得或现有方法制备得到。实施例1：称取萸黄连80g，用0.5％的硫酸溶液渗漉提取，直到渗漉液颜色很浅(hplc分析提取原料中总生物碱95％以上)；渗漉液用氢氧化钙中和到ph＝3.0，过滤；滤液减压浓缩到1g萸黄连/ml，冷却，过滤；滤液中添加10％的氯化钠，5℃下静止24小时，沉淀过滤，得到提取物ⅰ；过滤后的母液中再添加10％的氯化钠，以及0.5％的氯化锌，5℃下静止5小时，沉淀过滤，得到提取物ⅱ；合并提取物ⅰ和提取物ⅱ沉淀，得到萸黄连提取物。称取木香20g，用5倍水回流提取1小时，收取挥发油；提取后的水溶液过滤，过滤后的残渣再用适量水回流提取1次，过滤后合并过滤后的水溶液得到提取物ⅲ；提取液ⅲ减压浓缩到1g木香/ml；添加2倍乙醇，静止5小时，过滤，得到醇溶液；回收乙醇，烘干，得到木香水提醇沉提取物；合并挥发油和木香水提醇沉提取物，得到木香提取物。萸黄连提取物和木香提取物混合后，添加适量糊精，制粒，装胶囊，得到超浓缩香连产物。hplc分析超浓缩香连产物中总生物碱含量为61％(小檗碱30％、黄连碱12％、巴马汀9％、表小檗碱8％、药根碱2％)。本产品体积仅有香连丸的15％，具有抗幽门螺旋杆菌(hp)的作用，与抗生素联用，抗hp的效果更好。实施例2：称取萸黄连80g，用2％的硫酸溶液渗漉提取，直到渗漉液颜色很浅(hplc分析提取原料中总生物碱95％以上)；渗漉液用氢氧化钙中和到ph＝7.0，过滤；滤液减压浓缩到2g萸黄连/ml，冷却，过滤；滤液中添加1％的溴化钾，25℃下静止96小时，沉淀过滤，得到提取物ⅰ；过滤后的母液中再添加20％的溴化钾，以及0.1％的溴化铁，25℃下静止1小时，沉淀过滤，得到提取物ⅱ；合并提取物ⅰ和提取物ⅱ沉淀，得到萸黄连提取物。称取木香20g，用5倍水回流提取1小时，收取挥发油；提取后的水溶液过滤，过滤后的残渣再用适量水回流提取1次，过滤后合并过滤后的水溶液得到提取物ⅲ；提取液ⅲ减压浓缩到0.5g木香/ml；添加3倍乙醇，静止24小时，过滤，得到醇溶液；回收乙醇，烘干，得到木香水提醇沉提取物；合并挥发油和木香水提醇沉提取物，得到木香提取物。萸黄连提取物和木香提取物混合后，添加适量微晶纤维素，制粒，装胶囊，得到超浓缩香连产物。hplc分析超浓缩香连产物中总生物碱含量为50％(小檗碱25％、黄连碱10％、巴马汀9％、表小檗碱5％、药根碱1％)。本产品体积仅有香连丸的16％，具有抗幽门螺旋杆菌(hp)的作用，与抗生素联用，抗hp的效果更好。实施例3：称取萸黄连80g，用1％的硫酸溶液渗漉提取，直到渗漉液颜色很浅(hplc分析提取原料中总生物碱95％以上)；渗漉液用氢氧化钙中和到ph＝5.0，过滤；滤液减压浓缩到1g萸黄连/ml，冷却，过滤；滤液中添加10％的碘化钠，10℃下静止48小时，沉淀过滤，得到提取物ⅰ；过滤后的母液中再添加10％的碘化钠，以及0.5％的碘化镁，10℃下静止10小时，沉淀过滤，得到提取物ⅱ；合并提取物ⅰ和提取物ⅱ沉淀，得到萸黄连提取物。称取木香20g，用5倍水回流提取1小时，收取挥发油；提取后的水溶液过滤，过滤后的残渣再用适量水回流提取1次，过滤后合并过滤后的水溶液得到提取物ⅲ；提取液ⅲ减压浓缩到1g木香/ml；添加2倍乙醇，静止12小时，过滤，得到醇溶液；回收乙醇，烘干，得到木香水提醇沉提取物；合并挥发油和木香水提醇沉提取物，得到木香提取物。萸黄连提取物和木香提取物混合后，添加适量糊精，制粒，装胶囊，得到超浓缩香连产物。hplc分析超浓缩香连产物中总生物碱含量为70％(小檗碱35％、黄连碱15％、巴马汀12％、表小檗碱7％、药根碱1％)。本产品体积仅有香连丸的14％，具有抗幽门螺旋杆菌(hp)的作用，与抗生素联用，抗hp的效果更好。实施例4：称取萸黄连80g，用0.1％的硫酸溶液渗漉提取，直到渗漉液颜色很浅(hplc分析提取原料中总生物碱95％以上)；渗漉液用石灰中和到ph＝2.0，过滤；滤液减压浓缩到0.5g萸黄连/ml，冷却，过滤；滤液中添加20％的氟化钾，0℃下静止1小时，沉淀过滤，得到提取物ⅰ；过滤后的母液中再添加1％的氟化钾，以及2％的氟化锰，0℃下静止96小时，沉淀过滤，得到提取物ⅱ；合并提取物ⅰ和提取物ⅱ沉淀，得到萸黄连提取物。称取木香20g，用5倍水回流提取3小时，收取挥发油；提取后的水溶液过滤，过滤后的残渣再用适量水回流提取2次，过滤后合并过滤后的水溶液得到提取物ⅲ；提取液ⅲ减压浓缩到2g木香/ml；添加1倍乙醇，静止1小时，过滤，得到醇溶液；回收乙醇，烘干，得到木香水提醇沉提取物；合并挥发油和木香水提醇沉提取物，得到木香提取物。萸黄连提取物和木香提取物合并，添加适量淀粉，制粒，装胶囊，得到超浓缩香连产物。hplc分析超浓缩香连产物中总生物碱含量为90％(小檗碱50％、黄连碱16％、巴马汀14％、表小檗碱8％、药根碱2％)。本产品体积仅有香连丸的15％，具有抗幽门螺旋杆菌(hp)的作用，与抗生素联用，抗hp的效果更好。对实施例1-实施例4制得的超浓缩香连产物用于具有预防和治疗脂肪肝、肝纤维化和肝硬化，具有很好的效果。对比例1：黄连产物中总生物碱提取技术比较本对比例就本发明实施例与传统盐析法、专利技术1(zl200810069671.8)、专利技术2(zl201310357973.6)的总生物碱提取技术进行比较(在对比技术中的总生物碱相当于本申请中的萸黄连提取物)，相关的沉淀效率及产品纯度对比如下：传统的盐析法：将黄连饮片100g，用稀硫酸(1％)浸泡24小时，提取3次，得到提取液1号(0.2g黄连片/ml)。提取液1号500ml，预浓缩5倍(1g黄连片/ml)，然后用20％的氯化钠沉淀24小时；得到总生物碱(以小檗碱、黄连碱、巴马汀、表小檗碱、药根碱计算)14.11g，含量为48％，收率为70.5％。专利技术1(zl200810069671.8)：将黄连饮片100g，用稀硫酸(1％)浸泡24小时，提取3次，得到提取液1号(0.2g黄连片/ml)。提取液1号500ml，预浓缩5倍(1g黄连片/ml)，然后加入浓缩液0.5％的活性炭搅拌脱色；脱色以后的溶液，用20％的氯化钠(同时加入0.5％的氯化锌)沉淀24小时；得到总生物碱(以小檗碱、黄连碱、巴马汀、表小檗碱、药根碱计算)18.11g，含量为50％，收率为94.2％。专利技术2(zl201310357973.6)：提取液1号500ml(0.2g黄连片/ml)，用石灰中和到溶液的ph＝5.0，过滤；中和后的滤液减压浓缩5倍(1g黄连片/ml)；浓缩液用盐酸调节溶液的ph＝2；然后，加入20％的氯化钠沉淀24小时，得到黄连总生物碱。沉淀总生物碱后的母液及洗液合并得到溶液150ml，用100ml大孔树脂吸附后，用5倍水洗涤树脂；然后60％的乙醇洗脱，回收乙醇后，得到黄连总生物碱。合并两种总生物碱(以小檗碱、黄连碱、巴马汀、表小檗碱、药根碱计算)，得到高纯度的黄连总生物碱13.71g，含量为65％，收率为92.8％。本发明技术：称取萸黄连后用0.1％的硫酸溶液渗漉提取，直到渗漉液颜色很浅(hplc分析提取原料中总生物碱95％以上)后，量取两份渗漉液各500ml，对量取的两份渗漉液分别按照本发明实施例3、实施例4的方法得到萸黄连提取物，即为上述所提到的总生物碱，对得到的黄连总生物碱进行分析，得出实施例3中的总生物碱13.75g，含量为69％，收率为98.2％；实施例4中的总生物碱13.12g，含量为72％，收率为98.4％。表1总生物碱提取效果对比从表中可以看到，传统的盐析法工艺简单，安全，但是收率低，产品的纯度也低。与传统的提取方法相比，专利技术1(zl200810069671.8)的收率有明显的提高，但是产品的含量并未提高，只有50％左右。与传统的提取方法相比，专利技术2(zl201310357973.6)收率大幅度提升，产品的纯度也显著提升，但是，专利技术2需要用大孔树脂和乙醇，工艺步骤复杂，生产成本大幅度提升，尤其是乙醇的使用，存在明显的安全隐患，生产上投资大幅度增加。与传统的提取方法和已有的专利技术相比，本发明萸黄连提取物提取工艺简单，产品收率高，总生物碱的收率超过98％，产品纯度也高，完全满足制剂生产的实际需求，且本发明工艺所用原料均为容易获得的原料，生产过程安全性高，不存在危害身体健康及操作风险。实验例1：体外杀灭幽门螺杆菌(hp)效果对照药物：对照药物1：奥美拉唑。对照药物2：克拉霉素。对照药物3：阿莫西林。对照药物4：甲硝唑。对照药物5：左氧氟沙星。对照药物6：呋喃唑酮。对照药物7：四环素。对照药物8(香连丸)：萸黄连80g，木香20g。粉碎，制成丸剂，黄连总生物碱含量为10.0％(小檗碱5.6％、黄连碱1.6％、巴马汀1.5％、表小檗碱0.9％、药根碱0.4％)。对照药物9(浓缩香连丸)：萸黄连80g，木香20g。按照《中国药典》2015版制作工艺，制成丸剂，黄连总生物碱含量为25.0％(小檗碱14.0％、黄连碱4.0％、巴马汀3.7％、表小檗碱2.3％、药根碱1.0％)。对照药物10(香连胶囊(片))：萸黄连80g，木香20g。按照《中国药典》2015版制作工艺，制成香连胶囊(片)，黄连总生物碱含量为33.3％(小檗碱18.7％、黄连碱5.3％、巴马汀5.0％、表小檗碱3.0％、药根碱1.3％)。对照药物11(超浓缩香连胶囊(片))：萸黄连80g，木香20g。按本发明实施例1的工艺制成香连胶囊(片)，黄连总生物碱含量为60.0％(小檗碱30.0％、黄连碱12.0％、巴马汀9.0％、表小檗碱8.0％、药根碱2.0％)。对照药物12(三联疗法)：奥美拉唑20mg、克拉霉素500mg、阿莫西林胶囊1000mg。对照药物13：香连丸+三联疗法(奥美拉唑20mg、克拉霉素500mg、阿莫西林胶囊1000mg)。按照《陕西中医》，2015,36(3)：296工艺。对照药物14：香连片+三联疗法(奥美拉唑20mg、克拉霉素500mg、阿莫西林胶囊1000mg)。按照《现代生物医学进展》，2009，9(3)：505。协同作用药物：协同药物1：对照药物10+对照药物12。协同药物2：对照药物11(实施例1)+对照药物12。协同药物3：对照药物10+对照药物1。协同药物4：对照药物10+对照药物2。协同药物5：对照药物10+对照药物3。协同药物6：对照药物10+对照药物4。协同药物7：对照药物10+对照药物5。协同药物8：对照药物10+对照药物6。协同药物9：对照药物10+对照药物7。协同药物10：对照药物10+对照药物1+对照药物2。协同药物11：对照药物10+对照药物1+对照药物3协同药物12：对照药物10+对照药物1+对照药物4协同药物13：对照药物10+对照药物1+对照药物5协同药物14：对照药物10+对照药物1+对照药物6协同药物15：对照药物10+对照药物1+对照药物7协同药物16：对照药物11+对照药物1+对照药物2。协同药物17：对照药物11+对照药物1+对照药物3协同药物18：对照药物11+对照药物1+对照药物4协同药物19：对照药物11+对照药物1+对照药物5协同药物20：对照药物11+对照药物1+对照药物6协同药物21：对照药物11+对照药物1+对照药物7实验方法：对hp的抗菌实验，参照“天然药物(中药)新药研究指导原则”进行；药物的浓度用重量百分比浓度表示(mg/l)；复核抗生素，用总浓度表示；实验菌株为nctc11637；按照倍半稀释法测定(中国中医基础医学杂志,2017,23(03):405-407+422)有关药物的mic(最低抑菌浓度，minimuminhibitoryconcentration)，具体数据见表2。表2药物对hp(nctc11637)的mbc从表2中可以看到，参见对照药物8、9、10、11，随着香连产物的不断浓缩，黄连总生物碱的浓度提高，抗hp的活性不断增加，其抗hp的活性增加的倍数与黄连总生物碱浓度提高的比例基本一致，抗hp活性随药物纯度的增加有增加的趋势；总体上看，香连产物(照药物8-11)抗hp活性比抗生素(对照药物1-7)弱一些。将香连产物(在本实验例中取香连胶囊或超浓缩香连胶囊)分别与克拉霉素、阿莫西林、甲硝唑、左氧氟沙星、呋喃唑酮等复配以后，均有协同作用(协同药物4、5、6、7、8)；香连产物(在本实验例中取香连胶囊或超浓缩香连胶囊)与奥美拉唑、四环素复配以后，却没有协同作用(协同药物3、9)。将香连产物(在本实验例中取香连胶囊或超浓缩香连胶囊)与奥美拉唑复配，然后，同时加入克拉霉素、阿莫西林、甲硝唑、左氧氟沙星、呋喃唑酮等，协同作用非常明显(协同药物10、11、12、13、14、16、17、18、19、20)；香连产物(在本实验例中取香连胶囊或超浓缩香连胶囊)与奥美拉唑复配以后，加入四环素，有一定的协同作用，但是不明显(协同药物15、21)。将香连产物(在本实验例中取香连胶囊或超浓缩香连胶囊)与三联料复配(协同药物1、2)，其协同作用与香连产物(香连丸或香连片)与三联疗法复配(对照药物13、14)相比，协同作用优于对照药物13、14，可见黄连总生物碱浓度提高，其与三联疗法的协同作用提高，抗hp的活性增加。香连产物(取香连胶囊或超浓缩香连胶囊)与三联料复配(协同药物1、2)其协同作用与香连产物加奥美拉唑和克拉霉素(协同药物10、16)、香连产物加奥美拉唑和阿莫西林(协同药物11、17)、香连产物加奥美拉唑和甲硝唑(协同药物12、18)、香连产物加奥美拉唑和左氧氟沙星(协同药物13、19)、香连产物加奥美拉唑和呋喃唑酮(协同药物14、20)一样，并不会进一步增加其协同作用。可见，香连产物与单个抗生素联用，对hp具有一定的灭杀作用，香连产物与二联抗生素联用(奥美拉唑与克拉霉素或阿莫西林或甲硝唑或左氧氟沙星或呋喃唑酮)，对hp有较好的灭杀作用，其灭杀效果与香连产物与三联抗生素联用效果一致，均具有较好的协同作用。但是采用香连产物与“二联抗生素”联用与香连产物和“三联疗法”抗生素联用相比大大减少了抗生素的使用量。实验例2：预防和治疗脂肪肝和以及肝纤维化动物实验对照药物15(小檗碱)：称取小檗碱单体1kg，加入淀粉，制备成胶囊剂，控制小檗碱含量为56％。对照药物16(黄连总生物碱)：称取黄连总生物碱，加入淀粉制备成胶囊剂，控制黄连总生物碱为56％(小檗碱33.0％，巴马汀8.8％，黄连碱9.4％，表小檗碱4.7％)。对照药物17：木香，粉碎以后，直接灌胃。对照药物18(奥利司他)：购买的市场上的产品，按照说明书使用。小鼠剂量为45mg/kg。对照药物8(香连丸)：萸黄连80g，木香20g。粉碎，制成丸剂，黄连总生物碱含量为10.0％(小檗碱5.6％、黄连碱1.6％、巴马汀1.5％、表小檗碱0.9％、药根碱0.4％)。对照药物9(浓缩香连丸)：萸黄连80g，木香20g。按照《中国药典》2015版制作工艺，制成丸剂，黄连总生物碱含量为25.0％(小檗碱14.0％、黄连碱4.0％、巴马汀3.7％、表小檗碱2.3％、药根碱1.0％)。对照药物10(香连胶囊(片))：萸黄连80g，木香20g。按照《中国药典》2015版制作工艺，制成香连胶囊(片)，黄连总生物碱含量为33.3％(小檗碱18.7％、黄连碱5.3％、巴马汀5.0％、表小檗碱3.0％、药根碱1.3％)。对照药物11(超浓缩香连胶囊(片))：萸黄连80g，木香20g。按本发明实施例1的工艺制成香连胶囊(片)，黄连总生物碱含量为60.0％(小檗碱30.0％、黄连碱12.0％、巴马汀9.0％、表小檗碱8.0％、药根碱2.0％)。减肥实验方法参照“天然药物(中药)新药研究指导原则”进行：将c57小鼠分为11组，空白组(10只)给予正常饲料，高脂组(100只)给予高脂饲料；20周后检测体重，体重超过40g，即为造模成功；将高脂组造模成功的c57小鼠分为10组(每组10只)；各高脂组继续给与高脂饲料；小檗碱组(对照药物15)剂量为100mg/kg，其余药物组控制总生物碱(小檗碱、巴马汀、黄连碱、表小檗碱之和)剂量为100mg/kg，木香组(对照药物17)剂量为1329mg/kg；奥利他组(对照药物18)剂量为45mg/kg；造模成功的高脂组继续给予高脂饲料，但不使用任何药物作为模型组，正常组(空白组)和模型组分别给予同体积的生理盐水；连续灌喂16周。然后检测体重；取肝脏检测脂肪含量；肝脏切片检测检测肝纤维化和肝硬化情况。具体结果见表3。表3减肥和预防肝纤维化效果比较注：与正常组相比:#p<0.05，##p<0.01；与模型组相比:*p<0.05，**p<0.01；与奥利司他组相比：δp<0.05。从表3中可以看到，与正常组相比，模型组的体重、肝脏脂肪含量、肝纤维化程度、肝硬化等指标明显升高，表明造模成功(#p<0.05)。与模型组相比，除木香(对照药物17)没有作用以外，其他各组均有作用。药物之间的比较可以看到，小檗碱(对照药物15)有减肥、预防脂肪肝、预防肝纤维化和肝硬化的作用(p<0.05)，但是其各项作用均弱于黄连总生物碱(对照药物16)；小檗碱(对照药物15)与奥利司(对照药物18)他相比，小檗碱的减肥作用、预防脂肪肝的作用稍差，但预防肝硬化和肝纤维化的作用较好；总生物碱的减肥、预防脂肪肝、预防肝纤维化和预防肝硬化的作用均优于奥利司他。香连丸(对照药物8)与奥利司他(对照药物18)相比，减肥效果和预防脂肪肝效果相差不大，但是预防肝纤维化和肝硬化的作用明显优于奥利司他；浓缩香连丸(对照药物9)和香连胶囊(片)(对照药物10)的减肥、预防脂肪肝、预防肝纤维化和预防肝硬化的作用均优于奥利司他(对照药物18)，且达到显著或极显著水平。尽管木香没有减肥等作用，但，木香(对照药物17)与黄连总生物碱(对照药物16)复配以后(对照药物8-11)，复合物的减肥、预防脂肪肝、预防肝纤维化和预防肝硬化等较单个黄连总生物碱均有明显提高，表明黄连与木香形成的复合物具有减肥、预防脂肪肝、预防肝纤维化和预防肝硬化的协同作用。综合来看，超浓缩香连胶囊(片)(对照药物11)在减肥、预防脂肪肝、预防肝纤维化和预防肝硬化方面的作用是最优的，尤其是在预防肝纤维化和预防肝硬化方面，效果明显优于其他几组。参见附图1，本发明还对空白组、模型组及香连胶囊(片)(对照药物10)分别切片，采用he染色、masson染色法观察脂肪肝、肝纤维化及肝硬化形态。可以看出，空白组没有脂肪肝(空泡)，模型组脂肪肝严重(空泡非常多)，对照药物10组明显减少；空白组几乎没有肝纤维化，肝组织结构完整，清晰，模型组有纤维化和严重的纤维增生(肝硬化)，对照药物10组较模型组在肝纤维化、肝硬化方面有明显的改善，有少量的纤维增生，预防肝纤维化和肝硬化效果明显。实验例3：药物安全性实验对本发明实验例1中的对照药物、协同药物进行各种中药制剂对药物安全性进行实验。实验方法为：将230只4周龄km小鼠，屏障隔离系统平衡3～5天，无菌饲料和水充足。将小鼠随机分为23组，每组10只；将本发明各对照药物组分别配制为20％的溶液，除阴性对照组外，各对照药物实验组分别灌胃1ml，8小时灌胃一次，连续灌胃三次(总剂量18g/kg)。然后，让小鼠自由采食，3天以后检测体重，15天以后，观察小鼠的体重变化并统计每组死亡率，结果见表4。表4安全性评价实验结果注：与正常组相比:*p<0.05。从表4中可以看到，给小鼠口服香连产物或香连产物与单个抗生素联合或二联抗生素联合的药物组均未引发小鼠的死亡，且对小鼠的体重也没有明显的影响，而所有添加了三联疗法抗生素的药物组均引发了小鼠的死亡。可见香连产物对小鼠的安全性很高。随着香连产物的纯度增加(参见对照药物8、9、10、11)，小鼠的体重越接近于阴性对照组小鼠的体重，可见随着香连产物纯度的增加安全性还有增加的趋势。给小鼠单喂高剂量的小檗碱和奥利司他，对小鼠的安全性有很大的影响，甚至引发小鼠的死亡；给小鼠单喂高剂量的黄连总生物碱也会引发小鼠一定程度的死亡。香连产物与1个抗生素复配，对小鼠的体重和死亡率均没有任何影响，表明是安全的。香连产物与2个抗生素复配，尽管不会引发小鼠的死亡，但是，小鼠的体重有所下降，表明安全性有一定的影响，只是不明显(协同药物3-16)。香连产物与三个抗生素复配以后，小鼠体重下降明显，达到显著水平，而且还会引发小鼠的死亡，表明是药物的安全性低(对照药物13和14、协同药物2)。本发明香连产物具有较好的抗hp作用，与一种抗生素联用，抗hp效果较单独使用香连产物显著提升；与两种抗生素联用，其抗hp的效果非常理想；与三个抗生素联用，抗hp效果较有一定的增加，与两种抗生素联用相比效果不明显，但是药物的安全性降低明显。本发明香连产物通用具有较好的减肥、预防脂肪肝、预防肝纤维化和预防肝硬化作用，而单独的黄连总生物碱或木香在减肥、预防脂肪肝、预防肝纤维化和预防肝硬化方面的作用没有或较差，且联合使用药物的安全性高。以上所述仅是本发明的优选实施方式，本发明的保护范围并不仅局限于上述实施例。对于本
技术领域：
：的技术人员来说，在不脱离本发明技术构思前提下所作任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。当前第1页12当前第1页12