具有治疗活性的环亚甲基-1，2-二羧酸酰胺，制备它们的方法和含它们的药物组合物的制作方法

专利名称：具有治疗活性的环亚甲基-1，2-二羧酸酰胺，制备它们的方法和含它们的药物组合物的制作方法
专利说明具有治疗活性的环亚甲基-1，2-二羧酸 酰胺，制备它们的方法和含它们的药物组合物 本发明涉及一系列具有抗高血压活性且带有氨基-异羟肟酸的环亚甲基-1，2-二羧酸酰胺，及其制备的方法和含有它们的药物组合物。
本发明化合物可由下面通式代表
其中 A代表
R1代表

R2代表-H，CH3，-CH2-CH3，-CH(CH3)2，-CH2-CH2-CH3，-CH2-CH(CH3)2 -CH2-CH2-CH2-CH3，-CH2-C6H5，-C6-H5；R3代表-H，-CH3，-C2H5，

R5代表-H，-CH3，-C2H5，-CH2-C6H5，


R4＝R5，
m为0或1，n为0-3间的整数，更具体讲，本发明化合物是由具有顺式或反式构型的环亚甲基-1，2-二羧酸酰胺键合到氨基异羟肟地伯或仲氨基上组成的。
体外实验表明，本发明化合物对ACE(该酶可将血管紧张肽I转变成具有强有力的内源性压迫主动肌作用的血管紧张肽II)有抑制作用并具有抗高血压活性，人们认为这与前者的抑制作用有关，它可用来揭示一些化合物用于自发高血压鼠，尤其是用于由高血压(由血管紧张肽I引起)影响而处于苏醒或麻醉状态下的动物。
用于治疗几种动脉高血压的ACE抑制药物是已知的并已广泛使用，它们也可用来治疗心脏供血机能障碍。
ACE抑制药首选是1-(3-巯基-2-甲基-丙酰)-1-吡咯烷-2-羧酸，它具有下式并以非化学名称(DCI)Captopril而已知

目前除Captopril外，在世界范围用于药物领域的ACE抑制剂有enalapril和lysinopril。人们确信这些化合物的治疗作用主要是通过抑制血浆和测定的组织系统中的血管紧张肽I的转换酶并伴随着具有强有力的内源性压迫拮抗肌作用的血管紧张素II的含量降低而起作用的。
另一方面，归于这种事实，即ACE抑制作用也造成了缓激肽代谢的降低，从而血管舒张和利尿药含量的增加可部分解释为本标题药物的抗高血压作用。
在血管紧张肽II含量低的高血压情况中，ACE抑制剂的作用可归于对神径原狭窄管干扰(由交感神径传递更容易)的间接作用。
本发明的化合物与上述化合物和文献中披露的其它ACE抑制剂有区别，因为它们的羧酸尾都(可与ACE酶的确定的活性中心相互作用)是由环亚甲基-1，2-二羧酸酰胺(式IIIa)组成，而在所有已知ACE抑制剂中，该部分是由环或链氨基酸的酰胺(式IIIb和c)组成。
本发明的所有化合物都有共同的化学特征，这些化合物除新颖性外，与已知化合物相比都具有明显的结构(独特)特征，这些化合物所具有的独特性质也可认为是其药物治疗性质。
从药理观点看，前述的本发明化合物具有ACE抑制作用，该作用已在体外实验即功能活性实验中得到评价，从而发现本发明化合物的抗高血压作用起效快，持续时间长。
本发明的另一个目的是通式为(I)的化合物的制备方法。
按照本发明的方法，第一种方法是环亚甲基-1，2-二羧酸(具体为它的酸部分)与含由异羟肟基取代的烷基或苄基的氨基衍生物缩合。如取代基是苄基的话，接着将缩合产物进行催化加氢以除去苄基，由此得到R3和R4为氢的通式(I)化合物。在该方法中，缩合可按两种方法进行， 方法a)将所述氨基衍生物与环亚甲基-1，2-二羧酸的酸酐反应， 方法b)在缩合剂存在下，将所说的氨基衍生物与二羧酸反应。后者是已知类型的反应并优先选用乙基-N′-[3-二甲基-氨基-丙基]碳化二亚胺(WSC)或二环己基碳化二亚胺(DCC)。
根据本发明，第二种方法缩合是由第一种方法得到的氨基酯起始进行，由此制备相应的酰氨基衍生物，然后通过与羟胺或N-烷基羟胺反应将其转变为相应的异羟肟衍生物，其中烷基代表甲基和乙基。
在该情况中，也包括前述的两种(a)和(b)缩合方法。
根据本发明，用于制备本发明通式(I)化合物(其中m＝1)的第三种方法是将二羧酸的酸酐或环亚甲基-1，2-二羧酸直接与氨基-异羟肟酸缩合。
根据本发明，第四种方法是将环亚甲基-1，2-二羧酸的烷基单酯与含由苄基保护的异羰肟基的氨基衍生物缩合。
得到的酰氨基酯可如下转换 c)催化加氢以除去苄基，生成R5＝甲基，乙基的通式(I)化合物； d)进行碱性水解，然后催化加氢，得到R3＝R4＝R5＝H的通式(I)化合物。
由上述方法得到的异羟肟酸接着可用作起始化合物用来制备通式(I)的其它衍生物，如通过下式的酸酐

反应(Z如上所述)生成R3和/或R4代表

的通式(I)化合物相反，如将未除去保护基苄基的酰氨基中间体与酰氧一甲基卤代物反应，然后将得到的中间体进行催化加氢以除去苄基，则生成R5

的通式(I)衍生物，其中Y和Z如上定义。
最后，如R5＝CH3，C2H5，C6H5-CH2的通式(I)化合物与酰氧一甲基络合物反应，则从得到的中间体化合物中除去在起始酯化的羧酸官能团上的保护基，由此得到

的通式(I)化合物，下面的路线介绍了上述方法的合成路线。

路线2

路线3

路线4

路线5


路线7

其中 m，n，R1，R2，R3，R4，R5如上定义和R6＝-CH2-C6H5，-CH3，-C2H5 R7＝H，-CH3，-C2H5 在第一种方法中，缩合步骤可如下进行溶剂选自水，脂肪醇，如甲醇，乙醇，丁醇，和氯代脂肪溶剂，如二氯甲烷，氯仿和二氯乙烷，温度于-5℃至60℃之间，当溶剂为水或水混合物时，反应在低温(-5℃至室温)进行。
随后的催化加氢步骤应在标准催化剂钯碳存在下，于常温常压，在脂肪醇中，如甲醇或乙醇，加氢进行。
在第二种方法中，缩合在与前述相同的条件下进行，然而在下一步与羟胺的反应中应注意用醇代替水作溶剂，反应在室温进行。
第三种方法中的缩合是于不高于40℃的温度(通常为室温)在碱性水溶液中进行。
在路线4中，第一步是在与已述的第一种方法(路线I)中方法(b)的相同条件下进行。
催化加氢按同样方法进行，然而对于包括碱性水解的转换，其条件必须是温和的(室温，时间二小时，水作溶剂)。路线5，6，7涉及从由方法1至4产物或中间体起始来制备通式(I)衍生物，取代基定义如上所述。
更具体讲，在路线5中是制备异羟肟基上的O酰化的通式(I)衍生物；在这种情况中，与酸酐的反应是在催化量的4-N，N′-二甲氨基吡啶存在下，于低温(低于20℃)(至少在开始)进行。
在路线6和7中，与酰氧甲基卤代物的反应是在氮气下，无水环境中，于低温低于20℃)(至少在开始)进行。
下面的实施例介绍了本发明的一些化合物的制备；但它不意味本发明限于这些实施例。
熔点是在kofler熔点仪上测的并且未校正。
所有化合物都有与它们的结构相一致的I.R和1H-NMR谱，及除注明外，元素分析值与理论值相差+0.4％。
一些溶剂和反应试剂用常用的缩写表示THF＝四氢呋喃，DCC＝二环己基碳化二亚胺，ACOEt＝乙酸乙酯，WSC＝乙基-N′-/3-二甲基氨基丙基/碳化二乙胺。
实施例1 顺-2[[N-/2-(羟氨基)-2-氧代乙基]氨基]羰基-环己烷羧酸 将1.0ml 4N NaOH加到30ml水中1.2g(4.07mmol)O-苄基-氨基乙酰氧肟酸三氟乙酸酯溶液中，得到沉淀的结晶产物。
在室温搅拌下，向该悬浮液中分批加入0.628g(4.07mmol)1，2-环己烷二羧酸酸酐和1.02ml 4N NaOH，费时1个多小时，以便反应混合物在整个添加过程中PH维持在1.0。乳色的反应混合物在室温下持续搅拌2小时，然后过滤，再在冰冷却下用10％HCl将澄清的溶液调到PH＝1的酸性，由此得到0.9克象牙状结晶的O-苄基酰氨基衍生物的沉淀，产率66％，熔点141-143℃。
将0.7g(2.09毫摩尔)该苄基中间体溶于45ml乙醇，然后在10％钯碳存在下于常压常温下氢化。约4小时所吸收的氢气量为51ml。将催化剂滤出后，将乙醇溶液蒸发至干，由吸湿结晶组成的残余物通过丙酮结晶来提纯，生成所要的酰氨基衍生物，0.27g，产率53％，熔点133-135℃(分解)。
实施例2 反式-2-[[N-[2-(羟氨基)-2-氧代乙基]-N-乙氨基]羰基]-环己烷羧酸 在5℃搅拌下，向130ml二氯甲烷的6g(45.7毫摩尔)氨基乙酸乙酯溶液中加入7.05g(45.7mmol)反式-1，2-环己烷二羧酸酸酐，得到的溶液在室温保持20小时。
用40ml 5％HCl和两份40ml饱和氯化钠水溶液洗涤后，反应溶液用无水硫酸钠脱水，然后真空蒸发至干得到13g(产率99％)色谱纯的白色固体残渣，它是由反式-2[[N-[2-(羟氨基)-2-氧代乙基]-N-乙氨基]羰基]-环己烷羧酸，甲基-N-乙基-氨基甲酰基-1-环己烷羧酸组成。
在5℃搅拌下向30ml甲醇的6g(21.03mmol)该酸溶液加入30m1甲醇的2.77g(69.4毫摩尔)NaOH，然后再加入1.6g(23.1毫摩尔)盐酸羟胺。
得到的悬浮液在15℃巨烈搅拌下反应4小时，然后在室温真空将该反应混合物蒸发至干得到9.8g无色树脂状残余物。将该残余物通过搅拌溶于10ml水中，然后用6N HCl将澄清的溶液酸化到PH＝2，然后用氯化钠盐化到饱和，最后用乙酸乙酯提取20次，每次10ml。
合并有机提取液，用MgSO4脱水，然后真空蒸发至干得5.59g无色结晶残余物。该产物溶于50ml氯仿，真空过滤得到的悬浮液，然后该残余物用90ml 1，2-二氯乙烷处理得到悬浮液，该悬浮液在室温静置。
真空过滤，得4.58g(产率80％)呈无色结晶的所要产物，熔点137-139℃(Kofler)。
实施例3 顺式-2-[[2-苄基-3-(羟氨基)-3-氧代丙基]氨基]羰基-环己烷羧酸 在20-25℃搅拌下，用1个多小时，向70ml水的4g(20.0mmol)2-苄基-3-氨基-丙酸基-异羟肟酸(由2-苄基-3-氨基-丙烯酸甲酯与羟胺反应制备)溶液和6ml 4N NaOH中加入3.1g(20.0毫摩尔)1.2-环己烷二羧酸酸酐和4ml 4N NaOH，在整个添加时间保持化合物的PH＝11。
在20～25℃搅拌2小时后，该混合物用10％HCl将酸性调到PH＝1，然后用CHCl3提取。蒸除CHCl3，将象牙色的残余物用丙酮结晶得到1.48g呈白色结晶的所要化合物，产率26.6％，熔点171～175℃。
实施例4 顺式-2[[N-[2-(羟氨基)-2-氧代乙基]-N-甲氨基]羰基]--环己烷羧酸 在氮气下伴随搅拌，向二氯甲烷(20ml)的顺式-环己烷二羧酸酸酐(1.60g，10.4mmol)溶液中加入溶于二氯甲烷(30ml)中的O-苄基肌氨酸基异羟肟酸三氟乙酸酯(3.08g，10.0mmol)和三乙胺(3.0ml，21.5mmol)，然后用冷的5％HCl(10ml×2)洗涤该混合物，再用10％NaHCO3中和。最后用MgSO4干燥。减压蒸除溶剂，残余物用丙酮/乙醚结晶得到呈白色结晶的“O-苄基酰胺”中间体(3.40g，95％)，熔点，130℃。该化合物(2.35g，6.75mmol)在甲醇(30ml)中10％Pd/C存在下氢化2小时。于5℃减压蒸除溶剂，该产物溶于二氯甲烷得到呈白色结晶的标题化合物(1.25g，71％)，熔点131～133℃。
实施例5 顺式-2-[[N-[2-(羟氨基)-2-氧代乙基]-N-苯氨基]羰基]-环己烷羧酸 在10℃搅拌下，将3.19g(10mmol)顺式-2-[[N-[2-甲氧基-2-氧代乙基]-N-苯氨基]羰基]-环己烷羧酸(按实例2介绍的方法由顺-1，2-环己烷二羧酸的酸酐和N-苯基-氨基乙酸甲酯制备)加到32ml甲醇中的1.32g(33mmol)NaOH溶液中，然后再加入0.764g(11mmol)盐酸羟胺。得到的悬浮液在搅拌下保持6小时，然后静置过夜。减压蒸发至干后，残余物溶于55ml水中，悬浮液用“亚硝酸盐”处理，过滤，最后用冷的10％HCl将酸性调到PH＝3。用60ml二氯甲烷分两次提取树脂状沉淀，合并的有机提取液用氯化钠饱和水溶液洗涤，用无水硫酸钠干燥，减压蒸发得2.7g(产率84％)无色树脂状固体。后者通过溶于27ml丙酮来提纯，然后将从中得到的沉淀再于0℃通过静置得到呈无色结晶的所要化合物，熔点，160-161℃。
实施例6 反式-2-[[N-[2-羟氨基)-2-氧代乙基]-N-甲氨基]羰基]--环戊烷羧酸 将1.16g(7.3mmol)反式-1，2-环戊烷二羧酸溶于HO/叔丁醇溶液中。向该溶液加入1.42g(7.34mmol)O-苄基-N-甲基-氨基乙酰异羟肟酸，然后用1N NaOH将PH调到4.5。分批加入1.30g(7.34mmol)WSC以保持PH＝4.5。在室温搅拌22小时后，反应溶液用CHCl提取3次，蒸除氯仿，得到呈白色结晶的O-苄基酰氨基衍生物1.15g(产率47％)。然后得到的产物溶于10ml甲醇，再在10％Pd/C存在下，于室温20℃进行催化加氢，由此得到呈白色结晶的所要化合物，熔点107～111℃，0.7g，产率83％。
后面列出的化合物可按前述实施例制备，但为了不重复描述它们起见，仅列出相同化合物的化学参数。
在下面的其它实施例中，实施例7，8，9，10，11，12和13，由适宜的反应物起始，按实施例4的步骤进行。
实施例14，15和16分别按实施例1，5和2中步骤进行。
实施例7 反式-(1R，2R)-2[[N-[2-(羟氨基)-2-氧代乙基]N-乙氨基]羰基]-环己烷羧酸 在5℃搅拌下，将2.38g(11.6mmol)DCC加入溶于60mlTHF的2.0g(11.6mmol)(1R，2R)-1，2-环己烷二羧酸和1.52g(11.6mmol)N-乙氨基乙酸乙酯中。该溶液下5℃搅拌2小时，再于室温放置过夜。滤出沉淀的二环己脲，蒸除溶剂。残余油溶于CH2Cl2，先用水(10ml)洗涤，然后用15ml 5％NaHCO3水溶液洗涤。
水提取液用CH2Cl2(10ml)洗涤，用6N HCl酸化。然后用20ml CH2Cl2提取，提取液用无水Na2SO干燥，蒸发得到“酰氨基一酯”中间体1.9g，产率58％，油状结晶。
该中间体按实施例2中所述步骤用盐酸羟胺处理，得到1.38g(87％)呈白色固体的纯标题化合物[α]D10°＝10.7(C1.5乙醇)。
实施例8 顺式-2-[[N-(2-苯乙基)-2-(羟氨基)-2-氧代乙基]-N-甲氨基]羰基]-环己烷羧酸 在室温搅拌下，向溶于50ml CH2Cl2中的1.24g(8.0mmol)顺式-环己烷二羧酸酐溶液中缓慢加入含2.24g(8.0mmol)O-苄基-2-甲氨基-4-苯基-丁烷异羟肟酸和0.81g(8.0mmol)三乙胺的100ml CH2Cl2溶液。然后反应混合物在室温搅拌5小时。减压蒸除CH2Cl2，残余物溶于5％NaOH水溶液；用浓盐酸酸化该溶液得到2.5g(68％)“O-苄基酸胺”中间体，该中间体在20ml甲醇中，于常温常压，用0.24g 10％(Pd/C)氢化2小时。
过滤催化剂后，真空蒸除溶剂，残余物溶于10ml热丙酮中，将该丙酮溶液冷却，然后滤出首先析出的沉淀(0.1g)。
该溶液于0℃放置4天，第二批结晶开始析出；过滤收集固体(0.27g)，然后在搅拌下用热丙酮(20ml)处理半小时。过滤热悬浮液，得到白色固体(熔点165～169℃)，它对应于由标题化合物定义的两个镜像化合物中的一个。
蒸发丙酮滤液，残余物用CHCl3重结晶，得到白色固体(熔点137～139℃)，它对应于由标题化合物定义的另一个镜像化合物。
实施例9 顺-(1S，2R)-2-[[N-[2-羟氨基)-2-氧代乙基]-N-甲氨基]-羰基]-环己烷羧酸 按下列文献制备2-甲氧羰基-(1R，2S)-环己烷羧酸(P.Mohr等，Helv.Chim.Acta，1983，66，2501)。[α]57820＝+4.23°(C＝5.5，乙醇)；o.p.＝63.1％。将半酯试样(2.7g，14.5mmol)溶解在THF(10ml)中并在0℃下冷却。依次加入O-苄基肌氨酸异羟肟酸三氟乙酸酯(4.47g，14.5mmol)和三乙胺(2ml，14.5mmol)在CHCl3(10ml)中的溶液，1-羟-苯并噻唑(16-20％水，2.45g，14.5mmol)在THF(20ml)中的溶液和二环己基碳化二亚胺(3.29g，14.65mmol)在THF(15ml)中的溶液。过滤除去二环己脲并蒸发除去溶剂以后，将残余物溶解在AcOEt中。过滤除去残余的二环己脲以后，溶液分别用水(2×20ml)，10％柠檬酸(3×20ml)，水(20ml)，5％NaHCO3(3×20ml)和水(20ml)洗涤。有机层在MgSO4中干燥并在真空中蒸发。油状物用闪式柱层分离法提纯(AcOEt/石油醚＝80/20)。油状产物(2.55g，45％)的[α]57820＝+14.89°(C＝6.2，乙醇)。将油状物(2.27g，6.27mmol)溶解在1M的NaOH水溶液(50ml)中，混合液在室温下搅拌2小时。在0℃下用10％HCl酸化该溶液并用CHCl3(3×30ml)萃取。用5％NaHCO3(3×20ml)萃取有机层，在0℃下用10％HCl酸化碱溶液并用CHCl3(3×20ml)萃取。用MgSO4干燥有机层并在真空中蒸发。残余物在丙酮中重结晶得到白色固体(1.42g，65％)，熔点110-113℃；[α]57820＝+12.7°(C＝5.0，乙醇)。用在甲醇(40mg)中的10％钯炭(100mg)氢化上述化合物(0.82g，2.36mmol)，过滤以后，真空蒸发溶剂。残余物在甲醇/乙醚中重结晶得到白色固体(300mg，50％)熔点127-128℃，[α]＝26.1°(C＝1.5，乙醇)。
实施例10 顺-2-[[N-[1-苄基-2-甲氧氨基)-2-氧代乙基]-N-甲氨基]羰基]-环己烷羧酸 在搅拌下，向由1.28g(8.32mmol)顺-环己烷二羧酸酐和50ml CH2Cl2组成的悬浮液中滴加含有2g(8.3mmol)N-甲基-O-甲基-苯丙氨酰基-异羟肟酸(甲酸盐)和0.84g(8.32mmol)三乙胺的120ml CH2Cl2溶液，混合物在室温下搅拌5小时。反应混合物用5％HCl和水洗涤两次，然后用10％NaHCO3水溶液萃取。冷却萃取液并用浓HCl酸化萃取液，得到的固体在甲醇中重结晶得到标题化合物，白色晶体，熔点168-171℃。
实施例11 反-2-[[N-[2-(N′-羟-N′-甲氨基)-2-氧代乙基]-N-乙氨基]羰基]-环己烷羧酸 在5℃，搅拌下，向4.28g(15mmol)反-2-[[N-[2-乙氧基-2-氧代乙基]-N-乙氨基]羰基]-环己烷羧酸(如实施例2中所述的“氨酯”中间体)在20ml的甲醇溶液中加入溶解在21ml甲醇中的2.0g(49.5mmol)NaOH和1.38g(16.5mmol)N-甲基-盐酸羟胺。混合物在10℃下搅拌4小时后，在真空中除去溶剂，残余物溶解在10ml水和10ml乙酸乙酯中。搅拌下用5％HCl缓慢酸化化合物，分离有机层，再用10ml乙酸乙酯萃取水层。干燥(Na2SO)萃取液，减压下蒸除溶剂，所得残余物在乙醚中重结晶得到3.4g(79％)标题化合物，白色固体，熔点132℃。
实施例12 顺-2-[[N-[2-(羟氨基)-2-氧代乙基]-N-甲氨基]羰基]-环己烷羧酸甲酯 将2-甲氧羰基-环己烷羧酸(1.5g，8.06mmol)溶解在CH2Cl2(10ml)中，并加入O-苄基-肌氨酸-异羟肟酸-三氟乙酸酯(2.48g，8.06mmol)和三乙胺(1.1ml，8.06mmol)在CH2Cl2(10ml)的溶液。溶液在0℃下冷却，在快速搅拌下加入二环己基碳化二亚胺(1.66g，8.06mmol)在CH2Cl2(20ml)的溶液。在0℃下搅拌半小时后，在室温下搅拌混合物3小时，并通过过滤除去生成的二环己脲(DCU)。蒸发溶剂以后，将残余物溶解在AcoEt中，过滤除去残余的DCU以后，依次用水(30ml)，10％柠檬酸(30×20ml)，水(30ml)，5％NaHCO3(3×20ml)和水(30ml)洗涤。有机层在MgSO4中干燥在真空中蒸发，得到油状产物(1.85g，62％)。用在甲醇(50ml)中的10％钯炭(0.15g)氢化上述化合物(1.57g，4.34mmol)。过滤除去催化剂以后，在真空中蒸发溶液，油状物在丙酮/乙醚中结晶得到白色固体(0.71g，60％)，熔点101-102℃。
实施例13 反-2-[[N-[2-(乙酰氧氨基)-2-氧代乙基]-N-乙氨基]羰基]-环己烷羧酸 在5℃，搅拌下，向由2.0g(7.3mmol)反-2-[[N-[2-(羟氨基)-2-氧代乙基]-N-乙氨基]羰基]-环己烷羧酸(实施例2)和20ml CH2Cl2组成的悬浮液中加入2.1g(21.2mmol)乙酐，然后滴加1.40g(14.7mmol)三乙胺。向所得溶液加入0.04g(0.36mmol)4-N，N′-二甲氨基-吡啶并在室温下搅拌3小时。用2×10ml 5％HCl溶液，然后用饱和NaCl水溶液(10ml)洗涤反应混合物，干燥(CaCl2)，蒸发溶剂。用乙醚洗涤残余油状物，在乙醚-CH2Cl2(2∶1)中重结晶，得到标题化合物，白色晶体，熔点140-141℃。
实施例14 顺-2-[[N-[1-甲基-2-(N′-乙酰氧基-N′-乙酰氨基)-2-氧代乙基]-N-甲基-氨基]羰基]-环己烷羧酸 在0℃，氮气下搅拌的条件下，向由实施例4化合物(330mg，1.28mmol)，三乙胺(0.55ml，3.95mmol)，N，N-二甲氨基吡啶(10mg量)和二氯甲烷(10ml)组成的溶液中加入乙酐(270mg，2.65mmol)。混合物在室温下加热，用三氯化铁检验等分试样以确定异羟肟酸部分是否酰化完全。然后混合物用10％HCl(2×10ml)，5％NaHCO3(2×10ml)，水洗涤，并用MgSO4干燥。在室温下减压除去溶剂，粗产品在乙醚中结晶得到白色固体(306mg，70％)熔点108-109℃。
实施例15 顺-2-[[N-[1-甲基-2-(羟氨基-2-氧代乙基]-N-甲基氨基]羰基]-环己烷羧酸乙酰氧甲酯 在-5℃，氮气下，将由实施例4的″O-苄基酰胺中间体(4.5g，13mmol)，三乙胺(1.8ml，13mmol)和无水THF(30ml)组成的混合物滴加到乙酸碘甲酯(3.0g，15mmol)在无水THF(20ml)中的溶液中。搅拌混合物30分钟，并在室温下加热。过滤掉沉淀的白色固体，滤液在真空中浓缩。将残余物溶解在AcoEt(20ml)中，用5％NaHCO3(2×20ml)和水洗涤并干燥(MgSO4)。减压除去溶剂得到“O-苄基乙酰氧甲基”，黄色粘稠油状物，用在THF(30ml)中的10％Pd/c氢化(6小时)，得到标题化合物(定量)，白色玻璃状。
实施例16 顺-2-[[N-[1-甲基-2-(乙酰氧甲氧基)氨基-2-氧代乙基]--N-甲氨基]羰基]-环己烷羧酸甲酯 在氮气氛，搅拌下，向由实施例12化合物(1g，3.6mmol)，三乙胺(0.52ml，3.7mmol)和无水THF(25ml)组成的混合物中加入乙酸碘甲酯(0.74g，3.6mmol)在THF溶剂(10ml)的溶液。混合物在室温下放置98小时。过滤除去沉淀的固体，减压下蒸发掉大部分溶剂。残余物在二氯甲烷和冷的5％HCl水溶液之间分层，有机层用5％HCl，10％NaHCO3和水洗涤，用MgSO4干燥。减压下蒸发溶剂得标题化合物(0.9g，79％)，浅黄色油状物。
在下述实施例中 使用适当的起始化合物，按实施例4方法制备实施例17，18，19，20，22，23，27，28，29，30，31，32，33和34化合物。
按实施例1方法制备化合物24。
按实施例2方法制备化合物25，26，36，37，38，39，40，和41； 按实施例10方法制备化合物42； 按实施例11方法制备化合物43，44和45； 按实施例8方法制备化合物35。
实施例17 顺-2-[[N-[3-羟氨基)-3-氧代丙基]氨基]羰基]-环己烷羧酸。
白色晶体，熔点145-148℃。
实施例18 顺-2-[[N-[1-苄基-2-羟氨基)-2-氧代乙基]氨基]羰基]--环己烷羧酸。
白色晶体，熔点115-118℃。
实施例19 顺-2-[[N-[1-(2-苯乙基)-2-(羟氨基)-2-氧代乙基]氨基]羰基]-环己烷羧酸。
白色晶体，熔点83-85℃。
实施例20 顺-2-[[N-[1-(3-苯丙基)-2-(羟氨基)-2-氧代乙基]氨基]羰基]-环己烷羧酸。
白色晶体，熔点148-150℃。
实施例21 反-2-[[N-[2-(羟氨基)-2-氧代乙基]-N-甲氨基]羰基]-环己烷羧酸。
白色晶体，熔点172-174℃。
实施例22 顺-2-[[N-[1-(2-苯乙基)-2-(羟氨基)-2-氧代乙基]氨基]羰基]环戊烷羧酸。
白色晶体，熔点147-148℃。
实施例23 顺-2-[[N-[1-(3-苯丙基)-2-(羟丙基)-2-氧代乙基]氨基]羰基]环戊烷羧酸。
白色晶体，熔点122-126℃。
实施例24 顺-2-[[N-[2-苄基-2-(羟氨基)-3-氧代丙基]氨基]羰基]环戊烷羧酸。
乳白色晶体，熔点143-146℃。
实施例25 反-2-[[N-[2-(羟氨基)-2-氧代乙基]-N-苯氨基]羰基]-环己烷羧酸。
白色晶体，熔点151-152℃。
实施例26 顺-2-[[N-[2-羟氨基)-2-氧代乙基]-N-甲氨基]羰基]-环己烷羧酸。
白色晶体，熔点172-174℃。
实施例27 顺-2-[[N-[1-甲基-2-(羟氨基)-2-氧代乙基]-N-甲氨基]羰基]-环己烷羧酸。
乳白色晶体，熔点83-84℃。
实施例28 反-2-[[N-[1-甲基-2-(羟氨基)-2-氧代乙基]-N-甲氨基]羰基]-环己烷羧酸。
白色晶体，熔点132-134℃。
实施例29 顺-2-[[N-[1-苄基-2-(羟氨基)-2-氧代乙基]-N-甲氨基]羰基]-环己烷羧酸。
粘性油状物 实施例30 反-2-[[N-[1-苄基-2-(羟氨基)-2-氧代乙基]-N-甲氨基]羰基]-环己烷羧酸。
乳白色晶体，熔点144-147℃。
实施例31 反-2-[[N-[1-(2-苯乙基)-2-(羟氨基)-2-氧代乙基]-N-甲氨基]羰基]-环己烷羧酸。
粘性油状物 实施例32 顺-2[[N-[1-(3-苯丙基)-2-(羟氨基)-2-氧代乙基]-N-甲氨基]羰基]-环己烷羧酸。
白色晶体，熔点192℃(分解)。
实施例33 反-2-[[N[1-(3-苯丙基)-2-(羟氨基)-2-氧代乙基]-N-甲氨基]羰基]-环己烷羧酸。
白色晶体，熔点150-155℃。
实施例34 顺-2-[[N-[1-(2-苯乙基)-2-(羟氨基)-2-氧代乙基]-N-甲氨基]羰基]-环己烷羧酸。
白色晶体，熔点150-151℃。
实施例35 反-2-[[N-[1-苄基-2-(羟氨基)-2-氧代乙基]-N-乙氨基]羰基]-环己烷羧酸。
无色晶体，熔点167-169℃。
乳白色晶体，熔点96℃(分解)。
实施例36 反-2-[[N-[2-苄基-3-(羟氨基)-3-氧代丙基]-N-乙氨基]羰基]-环己烷羧酸。
白色固体，熔点94℃。
实施例37 顺-2[[N-3-(羟氨基)-3-氧代丙基]-N-乙氨基]羰基]-环己烷羧酸。
无色晶体，熔点146-148℃。
实施例38 反-2-[[N-[3-羟氨基)-3-氧代丙基]-N-乙氨基]羰基]-环己烷羧酸。
无色固体，熔点148-150℃。
实施例39 顺-2-[[N-[2-(羟氨基)-2-氧代乙基]-N-丙氨基]羰基]-环己烷羧酸。
无色晶体，熔点84-86℃。
实施例40 反-2-[[N-[2-羟氨基)-2-氧代乙基]-N-丙氨基]羰基]-环己烷羧酸。
无色晶体，熔点130-133℃。
实施例41 反-2-[[N-[2-(羟氨基)-2-氧代乙基]-N-(2-丙基)氨基]羰基]-环己烷羧酸。
无色晶体，熔点131℃。
实施例42 反-2-[[N-[1-苄基-2-甲氧氨基)-2-氧代乙基]-N-甲氨基]羰基]-环己烷羧酸。
白色晶体，熔点100-102℃。
实施例43 顺-2-[[N-[2-(N′-羟-N′-甲氨基)-2-氧代乙基]-N-甲氨基]羰基]-环己烷羧酸。
白色晶体，熔点144℃。
实施例44 反-2-[[N-[2-(N′-羟-N′-甲氨基)-2-氧代乙基]-N-乙氨基]羰基]-环己烷羧酸。
无色晶体，熔点129℃。
实施例45 反-2-[[N-[3-(N′-甲基-N′-羟氨基)-3-氧代丙基]-N-乙氨基]羰基]-环己烷羧酸。
粘性油状物。
通过测定ACE(从鼠血清中获得)对ippurilglycil-glyeine人工基质水解的抑制作用来评价本发明化合物的ACE-抑制活性。通过log剂量/百分抑制曲线的直线部分进行回归分析计算IC50值。
下表计述了代表本发明化合物的一组化合物的IC50(nM)值和ED50i.v.值。
已麻醉的神经阻塞老鼠经静脉内给药以后，计算所选化合物剂量与抗高血压活性的相关性。测定了由于重复静脉内注射血管紧张肽所引起的抑制血压增大作用，表中的ED50值是在最大作用(对所有试验化合物1分钟)时刻计算的。
同时也计算和记录了抗高血压作用的半衰期(t1/2)。
ACE抑制作用 抗高血压活性 IC50(nm)ED50i.v. t1/2No.Es. mgkg 分1 16004 6 0.035159 3.5 0.01621200.06015184002930303019280008 623 35006 7302010000321352625(15)0.1132 8 0.038147 7.6 0.02214280 1.5Coptopril 1.2 0.0119 相反，作为ACE-抑制剂，化合物4对血管紧张肽II造成的血压增加没有影响，直到其剂量增加到1mgkg i.v.。
如果考虑到本发明化合物具有非常低的急性毒性，(在老鼠静脉内给药中LD50值大于1000mg/kg)，那么很明显，本发明化合物非常适于治疗用途，可预见其剂量与Captopril属同一数量级。
根据本发明的药用组合物，作为治疗用途，最好是以可以口服给药的形式(片剂，胶囊剂等)；其含有本发明式(I)所示化合物作有效成分，同时含有普通的载体和赋形剂。
按本领域标准技术制备药剂。
权利要求
1.具有下式结构的环亚甲基-1，2-二羧酸的酰胺式中A代表
R1代表-H，-CH3，-CH2-CH3，-CH(CH3)2，
R2代表-N，CH3，-CH2-CH3，-CH(CH3)2，-CH2-CH3，-CH2-CH(CH3)2-CH2-CH2-CH2-CH3，-CH2-C6H5，-C6-H5，R3代表-H，-CH3，-C2H5，
R5代表-H，-CH3，-C2H5，-CH2-C6H5，
m为0或1，n为在0～3之间的整数。
2.顺-2-[[N-[2-(羟氨基)-2-氧代乙基]氨基]羰基]环己烷羧酸
反-2-[[N-[2-羟氨基]-2-氧代乙基]-N-乙氨基]羰基]环己烷羧酸
顺-2-[[N-[2-(2-苄基)-3-(羟氨基)-3-氧代丙基]氨基]羰基]环己烷羧酸
顺-2-[[N-[2-(羟氨基)-2-氧代乙基]-N-甲氨基]羰基]--环己烷羧酸
顺-2-[[N-[2-(羟氨基)-2-氧代乙基]-N-苯氨基]羰基]环己烷羧酸
反-2-[[N-[2-羟氨基]-2-氧代乙基]-N-甲氨基]羰基]-环己烷羧酸
反-(1R，2R)-2-[[N-[2-羟氨基]-2-氧代乙基]-N-乙氨基]羰基]环己烷羧酸
顺-2-[[N-[1-(2-苯乙基)-2-羟氨基)-2-羟氨基)-2-氧代乙基]-N-甲基氨基]羰基]-环己烷羧酸
顺-(1S，2R)-2-[[N-[2-(羟氨基)-2-氧代乙基]-N-甲氨基]羰基]环己烷羧酸
顺-2-[[N-[1-苄基-2-(甲氧氨基)-2-氧代乙基]-N-甲基氨基]羰基]环己烷羧酸
反-2-[[N-[2-(N′-羟-N′-甲氨基)-2-氧代乙基]-N-乙氨基]羰基]-环己烷羧酸
顺-2-[[N-[2-(羟氨基)-2-氧代乙基]-N-甲氨基]羰基]环己烷羧酸甲酯
反-2-[[N-[2-(乙酰氧氨基)-2-氧代乙基]-N-乙氨基]羰基]-环己烷羧酸
顺-2-[[N-[1-甲基-2-[N′-乙酰氧基-N′-乙酰氨基)-2-氧代乙基]-N-甲氨基]羰基]环己烷羧酸
顺-2-[[N-[1-甲基-2-(羟氨基-2-氧代乙基]-N-甲基氨基]羰基环己烷羧酸乙酰氧甲酯
顺-2-[[N-[1-甲基-2-(乙酰氧甲氧基)氨基-2-氧代乙基]--N-甲基氨基]羰基]-环己烷羧酸甲酯
顺-2-[[N-[3-(羟氨基)-3-氧代丙基]氨基]羰基]-环己烷羧酸
顺-2-[[N-[1-苄基-2-(羟氨基)-2-氧代乙基]氨基]羰基]环己烷羧酸
顺-2-[[N-[1-(2-苯乙基)-2-(羟氨基)-2-氧代乙基]氨基]环己烷羧酸
顺-2-[[N-[1-(3-苯丙基)-2-(羟氨基)-2-(羟氨基)-2-氧代乙基]氨基]羰基]环己烷羧酸
反-2-[[N-[2-(羟氨基)-2-氧代乙基]-N-甲氨基]羰基]环己烷羧酸
顺-2-[[N-(1-(2-苯乙基)-2-羟氨基)-2-氧代乙基]氨基]羰基]环戊烷羧酸
顺-2-[[N-[1-(3-苯丙基)-2-(羟氨基)-2-氧代乙基]氨基]羰基]-环戊烷羧酸
顺-2-[[N-[2-苄基-3-(羟氨基)-3-氧代丙基]氨基]羰基]环戊烷羧酸
反-2-[[N-[2-(羟氨基)-2-氧代乙基]-N-苯氨基]羰基]环己烷羧酸
顺-2-[[N-[2-(羟氨基)-2-氧代乙基]-N-乙氨基]羰基]环己烷羧酸
顺-2-[[N-[1-甲基-2-(羟氨基)-2-氧代乙基]-N-甲氨基]羰基]环己烷羧酸
反-2-[[N-[1-甲基-2-(羟氨基)-2-氧代乙基]-N-甲氨基]羰基]环己烷羧酸
顺-2-[[N-[1-苄基-2-(羟氨基)-2-(羟氨基)-2-氧代乙基]--N-甲氨基]羰基]-环己烷羧酸
反-2-[[N-[1-苄基-2-羟氨基)-2-羟氨基)-2-氧代乙基]-N-甲氨基]羰基]环己烷羧酸
反-2-[[N-[1-(2-苯乙基)-2-(羟氨基)-2-氧代乙基]-N-甲氨基]羰基]-环己烷羧酸
顺-[[N-[1-(3-苯丙基)-2-(羟氨基)-2-氧代乙基]-N-甲氨基]羰基]-环己烷羧酸
反-2-[[N-[1-(3-苯基丙基)-2-(羟氨基)-2-氧代乙基]-N-甲氨基]羰基]-环己烷羧酸
顺-2-[[N-[1-(2-苯乙基)-2-(羟氨基)-2-氧代乙基]-N-甲氨基]羰基]-环戊烷羧酸
反-2-[[N-[1-苄基-2-(羟氨基)-2-氧代乙基]-N-乙氨基]羰基]环己烷羧酸
反-2[[N-[2-苄基-3-羟氨基)-3-氧代丙基]-N-乙氨基]羰基]-环己烷羧酸
顺-2[[[N-[3-(羟氨基)-3-氧代丙基]-N-乙氨基]羰基]--环己烷羧酸
反-2-[[N-[3-[羟氨基]-3-氧代丙基]-N-乙氨基]羰基]环己烷羧酸
顺-2-[[N-[2-(羟氨基)-2-氧代乙基]-N-丙氨基]羰基]--环己烷羧酸
反-2[[N-[2-(羟氨基)-2-氧代乙基]-N-丙氨基]羰基]环己烷羧酸
反-2-[[N-(2-(羟氨基)-2-氧代乙基]-N-(2-丙基)氨基]羰基]环己烷羧酸
反-2-[[N-[1-苄基-2-(甲氧氨基)-2-氧代乙基]-N-甲氨基]羰基]环己烷羧酸
顺-2-[[N-[2-(N′-羟-N′-甲氨基)-2-氧代乙基]-N-甲氨基]羰基]-环己烷羧酸
反-2-[[N-2-(N′-羟-N′-甲氨基)-2-氧代乙基]-N-乙氨基]羰基]环己烷羧酸
反-2-[[N-[3-(N′-甲基-N′-羟氨基)-3-氧丙基]-N-乙氨基]羰基]环己烷羧酸
3.权利要求1所述化合物的制备方法，其特征在于包括以下步骤
(i)含有下式异羟肟酸基团的氨衍生物与下式环亚甲基-1，2-羧酸或其衍生物进行缩合
式中R1，R2和m含义如权利要求1所述；R3代表H或一个保护基团；
式中n含义如权利要求1所述。
(ii)如果R3不是H，则消除由上述缩合反应生成的氨衍生物上的保护基团R3。
4.按权利要求3所述的方法，其特征在于所说的保护基团是苄基。
5.按权利要求3所述的方法，其特征在于缩合反应是在所需的环亚甲基-1，2-二羧酸酐中进行的。
6.按权利要求3所述的方法，其特征在于上述的与环亚甲基-1，2-二羧酸的缩合反应是在缩合剂存在下进行的。
7.按权利要求6所述的方法，其特征在于所述的缩合剂是乙基-N′-[3-二甲基氨基丙基]碳化亚二胺。
8.按权利要求3所述的方法，其特征在于通过催化加氢消除上述保护基团。
9.按权利要求3所述的方法，其特征在于，在-5℃～60℃温度范围内，在选自水，脂肪醇，和氯化的脂肪溶剂中进行缩合反应。
10.按权利要求9所述的方法，其特征在于，在以水作溶剂情况下，反应温度在-5℃和室温之间。
11.按权利要求9所述的方法，其特征在于，上述的氯化脂肪溶剂选自二氯甲烷，氯仿和二氯乙烷。
12.按权利要求8所述的方法，其特征在于，上述催化加氢反应是在脂肪醇中，在室温常压下，在标准加氢催化剂存在下用氢进行的。
13.按权利要求3所述的方法，其特征在于，在R3＝H情况下，上述缩合反应在碱水介质中，在温度不大于40℃，最好是在室温下进行的。
14.权利要求1所述化合物的制备方法，其特征在于包括以下步骤
(i)下式氨酯与下式环亚甲基-1，2-二羧酸或其衍生物进行缩合
式中R1，R2和m含义同上；
式中n含义同上。
(ii)生成的氨衍生物与羟基胺反应得到所需化合物(I)。
15.按权利要求13所述的方法，其特征在于，缩合反应是在按权利要求5，6，7，9，10，11每一个条件下进行的。
16.按权利要求13所述的方法.其特征在于，与羟胺的反应是在室温下，在选自水，醇和其混合物中进行的。
17.制备m＝1的通式(I)化合物的方法，其特征在于环亚甲基-1，2-二羧酸或其酸酐与氨基异羟肟酸在不高于40℃碱性水溶液中进行缩合。
18.根据权利要求17的方法，其特征在于缩合反应是在室温进行。
19.制备权利要求1中的通式(I)化合物的方法，其包括以下步骤
(i)将具有下面通式的环亚甲基-1，2-二羧酸的烷基单酯(其
中R7为CH3，C2H5，n为0-3的整数)与具有下式的氨基异羟肟酸衍生物(其中R1，R2和m如上
定义)进行缩合，和
(ii)处理得到的酰氨酯
(a)当需要通式(I)化合物中R5为甲基，乙基时，通过催化加氢除去苄基
(b)当需要通式(I)化合物中R3＝R4＝R5＝H-时，先进行碱性水解，随后再进行催化加氢。
20.根据权利要求19的方法，其特征在于缩合步骤(i)是按权利要求4，6，7，9，10和11进行的。
21.根据权利要求19的方法，其特征在于催化加氢步骤(ii)是按权利要求12进行的。
22.根据权利要求19的方法，其中碱性水解是在温和条件下进行，包括室温和水作溶剂。
23.制备权利要求1中的通式(I)化合物(其中R3和/或R4代表
的方法，其特征在于将下式的氨基异羟肟酸(其中R1，R2，m和n如上定义)
与下式的酸酐(其中Z如上定义)，反应在催化
量的4-N，N′-二甲氨基吡啶存在下，在低于20℃的温度下进行。
24.制备权利要求1中的通式I化合物方法，其中
Z和Y如上定义，其特征在于下式的酰氨酯与酰氧甲基卤代物
反应，得到的化合物催化加氢。
25.制备权利要求1中的通式(I)化合物方法，其中
Y和Z如上定义，其特征在于将R1，R2m，n和R6如上定义的下式化合物
与酰氧甲基卤代物反应，将所得中间体的异羟肟基上的O酰化，除去保护基。
26.根据权利要求24和25的方法，其特征在于与酰氧甲基卤代物的反应是在氮气下，无水环境中，低于20℃温度下(至少在开始)进行的。
全文摘要
具有下式(I)的环亚甲基-1，2-二羧酸酰胺具有抑制ACE活性。因此在临床上可用作抗高血压药物，制备它们的方法和含它们的药物组合物，式中各基团定义详见说明书。
文档编号A61K31/165GK1037344SQ8910221
公开日1989年11月22日 申请日期1989年4月12日 优先权日1988年4月12日
发明者卢里·特贝特, 哥德·塞巴, 玛克·克斯里 申请人:罗拉特里·哥德特公司