专利名称：抗病毒粉末、抗病毒提取物和含有该粉末和/或该提取物的制剂的制作方法
技术领域：
本发明涉及由具有抗病毒作用的药用植物中获得的抗病毒粉末，由该粉中获得的抗病毒提取物以及包括该粉末和/或该提取物的制剂。
背景技术：
自古以来，历史上人类遭受了各种细菌和病毒的感染，抗菌素的发现和抗病毒疫苗的出现使本世纪的医疗有了巨大的进展。然而，许多慢性传染性疾病仍然是一个严重的社会问题。
更具体来说，当今摆在我们面前的最重大的问题包括对由病毒引起的感染的预防，如导致成人T细胞性白血病(缩写HALT)的人类免疫缺陷病毒(缩写为HIV；Barre-Sinoussi等，1983；Gallo等，1984)和引起获得性免疫不全综合征(缩写为AIDS)的人类T细胞性亲淋巴性病毒(缩写为HTLV；Yoshida等，1984)，以及这些疾病的治疗。
目前，人们已经相信一些草药和构成这些草药的生药具有抗病毒作用。近年来，人们做了许多具有抗病毒作用生药的研究和报告。已经证实了大约一半生药自身的抗病毒活性，但是还有许多生药的活性仍不清楚。现在抗病毒作用的机制，正在详细研究中。已经通过一种免疫调节活性系统做出了一些有关抗病毒作用的报道。
另一方面，有可能通过分子生物学的中心法则的途径来开发抗病毒剂，即，脱氧核糖核酸(缩写为DNA)→信使核糖核酸(缩写为RNA)→蛋白质的流回。
更为特别的是，自然界中出现与上述方向相对的相反方向，其转录是从核糖核酸(缩写为RNA)到脱氧核糖核酸的相反方向上进行的。1970年Temin和Baltimore(Baltimore，1970；Teminand Mizutani，1970)已发现的一种逆转录酶(缩写为RTV)就支持了这一点。
顾名思义，逆转录病毒(包含逆转录酶的瘤病毒)是那些具有逆转录酶的病毒。由于在二十世纪八十年代人们已认识到逆转录病毒能引起人T细胞性白血病和AIDS，这些疾病的传播已引起人们的不安，因此这种病毒已引起特别的关注。
从此以后便开始了对逆转录病毒的更深入的研究。目前已报道了基因水平的详细资料并且现已弄清了该病毒的生存周期(Meek等，1990a)。
一般认为开发抗病毒剂的目标在于寻找一种抑制病毒同细胞的结合和抑制从病毒的核糖核酸到脱氧核糖核酸的逆转录活性的方法。所报道的具有抑止逆转录活性的典型化合物包括核苷酸、抗菌素和天然物质等等。
其中，最大量的当数核苷酸衍生物，并且为了竞争性抑制逆转录酶底物的作用，已合成了一些核苷酸衍生物(Mitsuya andBroder，1987)。
叠氮胸苷、2′，3′-双脱氧胞苷和2′，3′-双脱氧肌苷是这些逆转录酶抑制剂的典型代表，并且已有一些药物被允许作为AIDS的治疗剂。
发明内容
的公开本发明的一个目的就是提供一种能够抑制逆转录酶的酶活性且源自药用植物的抗病毒粉末，和由此粉末中提取的抑制性成分的一种抗病毒提取物。
本发明的另一个目的是提供一种抗病毒粉末，它对作为AIDS的病原体的HIV-I逆转录酶以及源于小鼠白血病病毒的一种逆转录酶均有抑制作用。
本发明还有一个目的是提供一种包含上述粉末和/或提取物的抗病毒制剂。
来源于药用植物的本发明抗病毒粉末是按下列步骤而得到的。一经收集了具有抗病毒作用的一种药用植物的原材料之后，在能充分使此原材料的酶活性失活的情况下迅速将此原材料加热，然后在-5℃至+10℃的低温下将快速加热后的植物干燥，以使含水量不超过10％为度，来获得该药用植物的一种粉末。为得到一种粉末，当快速加热后或低温干燥后，把这种药用植物研碎或磨为粉末。
为得到一种抗病毒提取物，应用热水或低级醇对这种药用植物粉末进行提取。如需要的话，可适当地浓缩该提取物。
在实施本发明中，还提供了一种包含该粉末和/或提取物作为有效成分的制剂。可把这种制剂配制成一种乳剂、油剂、可湿性粉剂、粉剂或诸如此类。较优选的是使用一种粉剂。
本发明详述如下。
用于得到本发明的抗病毒粉末或提取物且具有抗病毒作用的起始药用植物可从具有抗病毒活性的任何药用植物中选择使用。含有抗病毒成分的药用植物的任何部位或部分都可以利用，包括叶、茎、根、花等等。特别是，使用叶子优选日本漆树(Japaneselacquer)(漆树(Rhus vernicitilua))的嫩叶和优选春榆(Ulmusdavidiana var.japonica)的花部分，它们具有显著的逆转录酶抑制作用。值得注意的是这儿所述的“嫩叶”一词意思是柔软且一般地叶龄不超过8周，优选的不超过4周。上述有关嫩叶的定义不应局限地解释，因为这种漆树根据生长区域的不同其生长速度也大为不同。
为了得到抗病毒粉末，收集药用植物的特定部分。一经收集后，就把这些部分快速加热。术语“一经收集后”一词是指在收集后3-约30分钟左右把那些收集好的部分快速加热。立刻快速加热在一定程度上会防止有效成分被酶所分解。术语“在能充分使酶活性失活的情况下快速加热”一词意思是，当使用例如一种压力鼓加热器时将原材料在80℃-140℃的温度范围内进行2分钟以内的热处理，优选为近1分钟，更好的优选为40-50秒。作为替代选择，也可以使用如微波炉这样的加热器。在这种情况下，当输出功率为600w时，加热20-50秒就能使有活性的酶失活，尽管时间还取决于原材料的数量。在使原材料中的溶解酶或其他酶失活而药用植物中的其他组分不被分解的情况下进行这种快速加热。由于使溶解酶失活或破坏，便可阻止溶解酶对其他组分的分解，这样就抑制了有效成分数量的下降。
随后把这种经如此快速加热的原材料进行低温干燥。低温干燥是在-5℃-+10℃的范围内进行的。低温干燥阻止在干燥过程中药用植物的成分包括有效成分或其他成分的分解。把低温干燥持续到初始物质的含水量不超过10wt％，优选为2-5wt％为止。
对于低温干燥，可以使用热气或空气干燥机和冰冻温度干燥机中的一种或两种在上述的温度范围内干燥原料。
冰冻温度干燥机可以买到，如Nippon Ligt Metal Co.，Ltd.，有售，规格如下。
温度范围-5℃～+10℃。
湿度范围50～80％(温度为0℃～-5℃)空气流速1～8m/s。
此干燥机的冰冻温度干燥室的大小是96cm×53cm×59cm，冷冻器的容量为2.2kw，并带有一种冷却介质如FlonQ22。
热空气干燥机包括一种远红外线干燥机。如果使用这种远红外线干燥机，在完成远红外线处理后起始原料还须在冰冻温度下干燥。
用一种常用的研磨装置例如，胶体研磨机研磨这样干燥后的原料，形成大小为50～100筛目μm。作为替换选择，原料也可以极细地切磨成粉末。
在完成低温干燥后不一定必需进行研磨和切磨，但完成快速加热后进行是有效的。研磨这一步可以根据需要适当改变。
这样得到的抗病毒粉末直接使用或可以用热水或低级醇提取有效成分来使用。在后一种情况下，不需要低温干燥，即提取物在快速加热后便可进行提取。至于提取，可使用一种常用的提取器如Soxhlet提取器，其中回流热水或低级醇。低级醇包括30～50％的甲醇或乙醇的水溶液。在回流时提取一般持续30～60分钟。可把最终的提取物浓缩到大约0.1wt％的标准。
这种浓缩的提取物是一种软化的提取物，本身难以处理，最好是使用稀释后的制剂。
更具体地，可按前面所述的不同的制剂形式使用本发明的粉末或提取物，优选使用粉剂或可湿性粉剂。当以粉剂或可湿性粉剂形式使用抗病毒粉末或提取物时，可用淀粉、乳糖和糊精等作为一种佐剂。在这种情况下，以有效量含有抗病毒粉末和/或提取物。优选的含量不得少于1wt％，更优选的为不少于10wt％。这种含量也适用于其他类型的制剂。
正如本文后面实施例所述，人们已经研究本发明中的抗病毒粉末和/或提取物的抑制作用根据前面所述的步骤对不同类型的药用植物进行处理，再用一种来源于禽成髓细胞瘤病毒(通常缩写为AMV)的逆转录酶对它们进行筛选，然后，分析对AIDS的病原体即HIV-1逆转录酶和一逆转录酶的抑制成分。而且，比较对来源于鼠白血病病毒(缩写为MULV)的逆转录酶的抑制作用。结果发现叶龄不超过8周，更优选的为4～5周的日本漆树的嫩叶部分和春榆的花部分具有较好的抑制功效。
本发明通过实施例和制剂例进行更具体的描述。<实施例1>
检测漆树科植物的抑制逆转录酶的作用。分别收集漆树、Rhus trichocarpa、Rhus ambigna、盐肤木和木蜡树的嫩叶。立即将这些叶子在600w的微波炉中快速地加热50秒。然后将叶子在10℃的温度下干燥并研磨得到各个原材料的粉末。用10ml热水对以这种方法得到的各个粉末10mg提取1小时。根据下面的步骤分别检测各个热水提取物对逆转录酶的抑制作用。更好地，离心分离各提取物得到上清液，调节样本使其在反应体系中的最终浓度为50.5μg/ml，然后测定对RT(逆转录酶)的抑制作用。结果如表1所示。该表显示了各样本的叶子部分对RT抑制作用，其中数值越少表明抑制作用越好。
表1漆树科的植物对逆转录酶的抑制作用(热水提取物)热水提取物 乙醇提取物漆树(Rhus vernicitlua)4～5Rhus trichocarpa 50Rhus ambigna 40盐肤木(Rhus javanica) 20～40木蜡树(Rhus sylvestris) 20～40上述结果表明漆树叶的热水提取物具有较好的逆转录酶抑制作用。然而，属于漆树科的其他植物的热水提取物则没有显著的逆转录酶抑制作用。<实施例2>
分别按与实施例1相同的方法使用和处理漆树的嫩叶和老叶以及春榆的嫩叶、老叶和花，只是用热水和含30％乙醇的水溶液进行提取。结果如表2所示。
表2漆树和春榆对逆转录酶的抑制作用(热水提取物)热水提取物 乙醇提取物漆树嫩叶(注1) ≤4～5 ≤4～5漆树老叶 100100春榆嫩叶 50 50春榆老叶 100100春榆花 20 20(注1)在三月中旬左右在Ishikawa Prefecture的Wajima市采集长度为5～6cm的漆树嫩叶。
上面的结果表明漆树嫩叶快速加热后所得的粉末的热水提取物和低级醇提取物(30％乙醇)对逆转录酶的抑制作用已经清楚，但对漆树老叶的各个提取物的作用仍不清楚。
另一方面，春榆的花对转录酶具有并不很强的抑制作用。<实施例3>
在此实施例中，检测了漆树嫩叶与春榆花的混合物对逆转录酶的抑制作用。
更具体地说，将收集好的漆树嫩叶和春榆花立即在600w的微波炉中快速加热。嫩叶和花按1∶1(样本)、2∶1(样本2)和1∶2(样本3)的比例混合。每个样本在干燥装置中低温干燥，然后研磨。接着检测用热水和30％乙醇提取而得的样本提取物对逆转录酶的抑制作用。结果如表3所示。
表3漆树嫩叶和春榆花的混合提取物对逆转录酶的抑制作用(IC50/μg/mg)热水提取物乙醇提取物样本15 5样本22～3 2～3样本33～4 3～4从上述结果可以看出，通过混合物的协同作用，有可能提高漆树嫩叶和春榆花的混合提取物的抑制作用。因此，混合提取物是本发明的一种优选。<制剂例1>10％漆树嫩叶的干粉(1∶10稀释)漆树嫩叶的干粉 100g，0.1％兰色1号铝色淀乳糖 0.1g乳糖 平衡总量 1000g<制剂例2>10％的漆树嫩叶和春榆花的混合粉剂(1∶10稀释)漆树嫩叶提取物100g春榆花的提取物50g淀粉 平衡总量1000g本发明中的1∶10稀释的抗病毒粉末或从通过用30％醇对抗病毒粉末进行热提取再浓缩提取物而制成的粘稠提取物中得到的1∶100稀释的抗病毒提取物，并没有降低对逆转录酶的抑制作用，因此这一作用得到了证实。
权利要求
1.来源于药用植物的抗病毒粉末是通过下列步骤而得到的，收集具有抗病毒作用的药用植物原材料，在足以使原材料中的酶活性失活的条件下立即将收集的原材料快速加热，在-5℃～+10℃的低温下干燥这种快速加热后的原材料，使其达到含水量不超过10％，然后将快速加热后或低温干燥后的原材料进行研磨。
2.权利要求1所述的来源于药用植物的抗病毒粉末，其特征是上述原材料包括漆树的叶子部分。
3.权利要求1所述的来源于药用植物的抗病毒粉末，其特征是上述原材料包括春榆的花部分。
4.权利要求1所述的来源于药用植物的抗病毒粉末，其特征是收集了上述的原材料后，上述原材料须在30分钟以内快速加热。
5.权利要求1所述的来源于药用植物的抗病毒粉末，其特征是上述原材料在2分钟内快速加热可使其中的酶活性失活。
6.抗病毒制剂，包括有效量的权利要求1所述的粉末。
7.权利要求6所述的制剂，其特征在于有效量不少于1wt％。
8.来源于药用植物的抗病毒提取物是通过下列步骤而得到的，收集具有抗病毒作用的药用植物原材料，在足以使原材料中的酶活性失活的条件下立即将收集的原材料快速加热，在-5℃～+10℃的低温下干燥这种快速加热后的原材料，使其达到含水量不超过10％，然后将快速加热或低温干燥后的原材料进行研磨，再用热水或低级醇提取所得到的抗病毒粉末。
9.权利要求8所述的抗病毒提取物，是提取后进一步浓缩而得。
10.权利要求9所述的抗病毒提取物，其特征在于上述的原材料包括漆树的嫩叶、春榆的花或两者的混合物。
11.抗病毒制剂，包括有效量的权利要求8所述的提取物。
12.权利要求8所述的制剂，其特征在于有效量不少于1wt％。
全文摘要
来源于药用植物的抗病毒粉末是由下述步骤得到的，首先收集一种具有抗病毒作用的药用植物，立即快速加热这种植物以使其中的酶活性失活，低温干燥，并在快速加热或低温干燥后研磨。这种粉末可以用热水或低级醇提取而得到一种抗病毒提取物。可以制剂的形式特别是，包含有效量的粉剂使用这些粉末和提取物。经处理一种药用植物，漆树的嫩叶和春榆的花部分而得到的粉末和提取物也是可以使用的。
文档编号A61P31/12GK1122107SQ95190039
公开日1996年5月8日 申请日期1995年1月20日 优先权日1994年1月20日
发明者门野寿子, 关野由弘, 荻田善一 申请人:保芦将人