专利名称：中药神农精骨灵的制作方法
技术领域：
本发明系使用真菌冬虫夏草菌丝体，液体发酵转化、富集九牛躁单方复方及微量元素，成为一类新的中药菌类药材。本发明所涉及的是中医药学，微量元素科学，真菌学领域。
九牛躁(Pimpinella diversfolia DC)别名苦爹菜，骚羊古，洋芹菜等，已被列入贵州地方药材，产于西南三省，要部入药，其性味功用为性平、味甘、补肾、镇痛、熄风、化瘀、解毒，西南原住居民尤看重此药。贵州威宁方剂治阳萎虚弱，50g，炖肉吃；威宁金沙方剂是治跌打损伤，母猪疯，50g，白酒饮用；贵阳方剂是阴寒腹痛，5g，研末开水或酒吞服；习水方剂是治毒蛇咬伤，50g加萝卜菜5g，捣烂敷伤口，并按100g泡酒500g服。以上流传久远，药效独道的方剂证明九牛躁性平不燥，阴阳两治，补肾壮阳，药源珍稀，本发明复方故以本品为君。
本发明复方臣、佐、使、用以下六味中药构成冬虫夏草本品为麦角菌科真菌冬虫夏草Cordvceps sinensis(Berk。)Sacc寄生在蝙蝠蛾科昆虫上的子座及幼虫尸体的复合体。性味甘，平。归肺、肾经。补肺益肾，止血化痰。用于久咳虚喘，劳嗽咯血，阳萎遗精，腰膝酸痛。
仙茅；仙茅科植物仙茅Curculgo Orchioides Geectn的干燥地下根茎，性味辛、热、有毒。归肾、脾、肝经。补肾壮阳，强筋骨，祛寒湿。用于阳萎精冷，筋骨痿软，腰膝冷痹，阴虚冷泻。
淫羊藿小镍科植物箭叶淫羊藿，Epiraedium Sagittam(Coetz)Maxim的干燥茎叶。性味辛、温。归肝、肾经。补肾壮阳，强筋健骨，祛寒湿，止咳平喘，用于阳萎早泄，腰膝无力，慢性腰腿痛。
补骨脂豆科植物补骨脂Psoralea CorylifoliaL的干燥成熟种子。性味辛、苦、大温。归肾、脾经。补肾壮阳，固精温脾。用于阳萎泄精，尿频，腰膝冷痛等。
巴戟天茜草科巴戟天Morindon Offcinalis How的干燥根部。性味辛、苦、温。归肾经。温肾壮阳，散寒祛风。用于肾虚阳萎、皮肤湿疹，阴道滴虫，驱蛔等。
蜂蜜密蜂科昆虫中华密蜂Apis Cerana。性味甘、平。归肺、脾、大肠经。补中润燥、止痛、解毒。用于脘腹虚痛、肺燥干咳，肠燥便秘。
上述复方，以九牛躁为君，冬虫夏草为臣，仙茅、淫羊藿、补骨脂、巴戟天为佐，蜂密为使。其特征是多药相伍，寒温配套，有攻有补、含补寓攻。
肾为人体“先天之本”、“精血之海”、肾气的盛衰与补肾壮阳中药所含生命必需微量元素密切相关。如核酸代谢所必要的DNA聚合酶，DNA-NRA聚合酶，延介因子与氨酰tRNA合成酶都是含锌酶；能清除引起衰老的活性氧自由基的超氧化物歧化酶，主要是Cu-Zn-SOD和Mn-SOD。Zn,Cu,Mn均对SOD的活性和稳定性具有重要意义。人体内在肾及相关部位其积量较大的生命元素主要是Zn、Mn、Cu、Fe、Cr、Ni、Ag等，从而揭示出这些生命元素是中医“肾”的物质基础之一。
中药中微量元素的作用依赖于其所处的环境和存在的状态，单纯量的富含并不与药物的生物效应一致。不同的功效，微量元素在药物中就有不同的特殊的存在状态和生物活性。它包括着无机成份与有机成分形成各种盐类，络合物等而发挥作用。疗效的实现是这样一个整体，而不是组成这个整体的任何一方。
骨质疏松及骨质疏松症，是严重威胁人类健康的一种疾病，属世界多发疾病。全世界有半数以上的老年人和二亿以上的妇女患有不同程度的骨质疏松症。贵州中药仙灵骨葆，依据中医内经“肾为先天之本，主生髓养骨”之学说。通过淫羊藿等中药补肾而培养先天达到强身健骨的目的。该药主含黔岭淫羊藿，川续断，补骨脂等。经临床验证，对防治中老年骨质疏松，骨质疏松症，提高人体免疫力，增强性功能有确切的疗效。
约用真菌对人体所具有的免疫功能及对肿瘤细胞的杀伤作用正在被现代科学研究所证实。南京药学院[中药学(中册)1976.13]记载人工培养物中分离所得冬虫夏草菌素(cordycepin.3-deoxyadenosihe)以每日15-200mg/kg注射于艾比腹水癌小鼠腹腔，连续7天，能延长小鼠存活时间，对人鼻咽癌细胞(KB)的生长有抑制作用。
在公知的技术中，专利96115802.6复合蛋白锌，95105605.0微量元素的生物转化及酶化提取方法，92111199.1一种以锌金属硫蛋白为有效成份的保健品，92111469.1核酸中药抗癌剂，及99108733.X多元灵芝硒的生产方法等，均说明了真菌菌丝通过固体，液体可对多种微量元素进行富集转化，单方或复方中药与微量元素的添加具有相应的药效等。但还未有真菌菌丝体对中药单方复方，微量元素锌、钙、铜、锰、硒等综合转化，富集而防治性功能低下，骨质疏松，骨质疏松症，癌症等中老年疾病这一特殊功效药物的技术。
本发明的目的是通过冬虫夏草菌丝体液体发酵的工艺途径，以九牛躁的单方或复方中药作为新型培养基，添加定量的锌、钙、锰、铁、硒等人体必需微量元素，利用虫草菌丝体转化，富集单方复方中药有效成份及微量元素，使之成为防治性功能低下、骨质疏松、骨质疏松症、癌症等中老年疾病的一类中药菌类药材。
实现本发明的技术方案是1、冬虫夏草菌株；中科院微生物所菌种室引种。
2、种子培养液配方玉米粉、蛋白胨、九牛躁提取液、骨粉、蜂蜜、磷酸二氢钾、葡萄糖锌、PH5.5。
3、发酵培养液配方九牛躁单方或复方提取液、玉米粉、蛋白胨、骨粉、蜂蜜、磷酸二氢钾、葡萄糖锌、硫酸锰、硫酸亚铁、硫酸铜、亚硒酸钠，PH5.5。
主要发酵设备三角瓶、旋转式摇床、种子罐、发酵罐、空气过滤机、空压机、离心机、中药提取罐。
4、发酵工艺流程三角瓶种子液培养，进入一级种子罐发酵，再进入二级种子罐发酵，再进行发酵罐发酵。合格发酵液离心分离，清洗、得纯菌丝本。冷冻、干燥、保藏。
本发明同现有的技术相比其优点是1、西南地区地方药材九牛躁列为单方和复方之君药，充分发掘和利用了九牛躁壮阳补肾而性平味甘、阴阳两治、药效独道之优势。
2、在神农精骨灵复方中，保证了其防治性功能低下，骨质疏松，骨质疏松症，肿瘤等中老年疾病之疗效的同时，特别注重寒温配套，有补有攻，阴阳协调。
3、利用冬虫夏草菌丝体将微量元素锌、钙、铜、锰、铁、硒，西南九牛躁单方复方进行转化富集。即通过生物技术在中药，微量元素医药领域内成为新发现的新药材及制剂。
4、为中药微量元素科学提供了一个中药与微量元素的平衡，富集，络合，转化等成功的范例。
实施例1神农精骨灵单方液体发酵制备工艺1、冬虫夏草母种中科院微生物所菌种室引进。
2、液体种子培养3、1种子培养液配方玉米粉，蛋白胨、九牛躁单方提取液、骨粉、蜂蜜、磷酸二氢钾、葡萄糖锌、PH自然。
2.2接瓶培养2.21装瓶三角瓶装量100毫升。
2.22灭菌压力1.2/kg/cm2，时间60分钟。
2.23接种、培养无菌接种。静止培养，24℃～26℃，时间48小时。震荡培养，温度26℃左右，摇床偏心距4cm，频率150～220转/分，时间72小时。
2.24合格种子液标准清澈透明、菌丝小球1-2毫米，菌丝体干重10克/升。
2.3-、二级种子培养2.31定容一级种子罐容积50升，定容3 5升，二级种子罐容积500升，定容350升。
2.32空消温度135℃～140℃，压力2.5～2.8kg/cm2，时间60分钟。
2.33实消1.2kg/cm2,60分钟，恒温8分钟。
2.34降温降至27℃，降压至0.5kg/cm2。
2.35接种按定容量的10％接入种子液，无菌操作。
2.36培养26℃左右，PH5.5，通风1∶0.5(体积/体积/分)，发酵液温度升高时加大至1∶1，罐压20-40kpa，搅拌速度110-140r/mim，时间48小时。
2.37质监标准0时查杂菌、OD值(光密度)初糖12、24、36、48小时OD、残糖、PH；48小时正常标准PH5.0、OD值净长值0.5，耗糖一个单位。
3．发酵罐发酵3.1发酵液配方九牛躁单方提取液、玉米粉、蛋白胨、骨粉、蜂蜜、磷酸二氢钾、葡萄糖锌、硫酸锰、硫酸锌、硫酸亚铁、亚硒酸钠、PH值5.5。
3.2定容发酵罐3000升，定容2250升。
3.3空消140℃、2.8kg/cm2、60分钟。
3.4实消50-60分钟，保温8分钟，1.2kg/cm23.5降温0.5kg/cmm2,25℃。
3.6接种二级种子、定容量的10％。
3.7培养26℃左右，PH5.5，通风量1∶05(体积/体积/分)，发酵液温度升高时加大对1∶1，罐压10-30Kpa，搅拌速度150-180/min。
3.8质监标准72小时后，每隔12小时取样查糖、氮、PH、无菌度。
3.9放罐标准PH5.0，残糖2.5，氨态氮＜毫克/毫升，菌球浓度1000-1500个/毫升。
4．发酵产品制取4.1离心分离所分离的必须是检验后的合格发酵液、离心速度2000-3000rpm。
4.2菌丝体清洗添加无菌水，比例1∶8，清洗之后，120目过滤，得纯菌丝体。
4.3菌丝体干燥冷冻干燥，无菌分装，低温贮藏。
实施例2神农精骨灵复方液体发酵制备工艺1．冬虫夏草母种同实施例12．液体种子培养；3．1种子培养液配方玉米粉、蛋白胨、九牛躁复方提取液、骨粉、蜂蜜、磷酸二氢钾、葡萄糖锌、PH自然。
2-2,2-3各项与实施例1相同。
3．发酵灌发酵；3.1发酵液配方；九牛躁复方提取液、玉米粉、蛋白胨、骨粉、蜂蜜、磷酸二氢钾、葡萄糖锌、硫酸锰、硫酸锌、硫酸亚铁、亚硒酸钠、PH值5.5。
3.2以下各项工艺与实例1相同。
4．发酵产品制取；以下各项工艺与实例1相同。
权利要求
1.一种中药神农精骨灵，其特征是以西南地方药材九牛躁为中药单方和复方君药，构成一种新型的培养基，添加定量的锌、钙及铜，铁、锰、硒，利用冬虫夏草菌丝体，进行液体发酵，转化、富集中药单方或复方有效成份及微量元素，成为治疗性功能低下，骨质疏松、骨质疏松症、癌症等中老年疾病的一类中药菌类药材。
2.如权利要求1所述中药神农精骨灵其特征是在中药西南九牛躁复方中，九牛躁为郡，冬虫夏草为臣，仙茅、淫羊藿、补骨脂、巴戟天为佐，蜂蜜为使。
3.如权利要求1所述中药神农精骨灵其特征是种子培养液配方玉米粉、蛋白胨、九牛躁单方提取液、骨粉、蜂蜜、磷酸二氢钾、葡萄糖锌、PH5.5。
4.如权利要求1所述中药神农精骨灵其特征是发酵液配方九牛躁单方或复方提取液、玉米粉、蛋白胨、骨粉、蜂蜜、磷酸二氢钾、葡萄糖锌、硫酸锰、硫酸锌、硫酸亚铁、亚硒酸钠、PH值5.5。
5.如权利要求1所述中药神农精骨灵的工艺途径是真菌(冬虫夏草)菌丝体以九牛躁单方或复方为发酵液主要成份的液体发酵工艺途径。
6.如权利要求1所述中药神农精骨灵其特征是西南九牛躁的主要功能是防治性功能低下、骨质疏松、骨质疏松症、癌症等中老年疾病。
全文摘要
中药西南神农精骨灵中药学,微量元素科学及真菌学领域。该发明系西南地方药材九牛躁的单方或复方中药作为一种新型培养基、添加葡萄糖锌、钙及锰、铁、铜、硒等微量元素,利用冬虫夏草菌丝体通过液体发酵工艺途径,转化、富集中药单方复方有效成份及微量元素,成为一种防治性功能低下、骨质疏松、骨质疏松症、癌症等中老年疾病的一类中药菌类药材。
文档编号A61P15/00GK1299678SQ9912683
公开日2001年6月20日 申请日期1999年12月15日 优先权日1999年12月15日
发明者李全才 申请人:李全才