抗菌剂的制作方法

专利名称：抗菌剂的制作方法
技术领域：
本发明涉及将N-甲酰羟胺衍生物作为抗菌剂的用途，涉及这些化合物的新种类，涉及包含这些化合物的医药学或兽医学的组合物。
背景技术：
一般来说，细菌病原体被分成革兰氏阳性或革兰氏阴性。许多抗菌剂(包括抗生素)都是对一种或另一种革兰氏家族的病原体专一性的。同时对革兰氏阳性和革兰氏阴性的病原体有效的抗菌剂因而被认为有广谱活性。
为人所知的有许多类的抗菌剂，包括青霉素和头孢霉素，四环素，磺胺药，单酰胺菌素，氟喹诺酮和喹诺酮，氨基糖苷类，糖肽，大环内酯物，多粘菌素，林肯胺，甲氧苄胺嘧啶和氯霉素。这些抗菌类的作用的基本机制是不同的。
细菌对许多已知的抗菌物的抗性是一个增长的问题。因此，对发现替代抗菌剂的技术有着持续的需要，尤其是对那些和已知种类具有截然不同的作用机制的抗菌剂。
在革兰氏阳性病原体中，如葡萄球菌，链球菌，分枝细菌和肠球菌，抗性菌株已演化/产生，使得它们特别难被消除。这些菌种的例子有甲氧苯青霉素抗性的金黄色葡萄球菌(MRSA)，甲氧苯青霉素抗性的凝固酶阴性的葡萄球菌(MRCNS)，青霉素抗性的肺炎链球菌和多抗性的粪便肠球菌。
病原性的细菌常常对氨基糖苷类，β-内酰胺(青霉素和头孢霉素)，和氯霉素类的抗生素有抗性。这种抗性包括通过水解或形成非活性衍生物的抗生素酶催化失活。抗生素β-内酰胺(青霉素和头孢霉素)家族以具有β-内酰胺环结构为特征。在临床分离物中对这个抗生素家族的抗性通常是由于抗性细菌制造的“青霉素酶”(β-内酰胺酶)水解β-内酰胺环，从而消除了它的抗菌活性。
近来，出现了对万古霉素抗性菌种的肠球菌。(Woodford N.1998糖肽抗性的肠球菌经验十年。医学微生物杂志。47(10):849-62)。万古霉素抗性的肠球菌特别危险，它们是医院感染的常见原因，而且对大多数抗生素天然具有抗性。万古霉素通过连接到细胞壁肽聚糖前体的末端D-Ala-D-Ala残基起作用。对万古霉素的高水平抗性以VanA为人所知，由一定位于一转座子上的基因产生，该基因将末端残基变化成D-Ala-D-lac，从而降低了对万古霉素的亲和力。
由于多药物抗性细菌的迅速出现，对数量增长的抗性细菌有效的，特别是对万古霉素抗性的肠球菌和β-内酰胺抗生素抗性的细菌，例如甲氧苯青霉素抗性的金黄色葡萄球菌有效的，具有新作用模式的抗菌剂的开发，是至关重要的。
发明简述本发明基于某些N-甲酰羟胺衍生物具有抗菌活性的发现，而使得一类新的抗菌剂变得可用。本发明人发现，本发明提到的化合物对一定范围的革兰氏阳性和革兰氏阴性有机体有抗菌性。另外，有证据表明，一些化合物对于常用抗生素例如万古霉素和β-内酰胺抗生素抗性的细菌有抗菌性，比如甲氧苯青霉素抗性的金黄色葡萄球菌。
尽管建立本发明提到的化合物的作用机制可能有用，但使它们有效的是它们抑制细菌生长的活性。然而，现在相信，它们的抗菌活性是由于，至少部分由于，抑制细胞内的细菌多肽脱甲酰基酶(PDF)。
细菌多肽脱甲酰基酶(PDF)(EC3.5.1.31)，是金属酶的一个保守家族，(综述Meinnel T,Lazennec C,Villoing S,Blanquet S,1997，分子生物学杂志267,749-761)对细菌的生存能力至关重要，它们的功能在于从真核细菌的核糖体合成的蛋白质的N-末端甲硫氨酸残基上除去甲酰基团。Mazel等.(EMBOJ.13(4):914-923,1994)最近克隆并表征了一种大肠杆菌PDF。由于PDF对细菌的生长至关重要，而没有PDF的真核对应物，Mazel等(ibid),Rajagopalan等.(J.Am.Chem.Soc.119:12418-12419,1997)和Becker等，(J.BiolChem.273(19):11413-11416,1998)都分别设想PDF是一卓越的抗菌目标。
一些N-甲酰羟胺衍生物以前在下列专利公告中提到过，虽然这些化合物中的极少的例子被专门制造并描述过EP-B-0236872(Roche)WO92/09563(Glycomed)WO92/04735(Syntex)
WO95/19965 (Glycomed)WO95/22966 (SanofiWinthrop)WO95/33709 (Roche)WO96/23791 (Syntex)WO96/16027 (Syntex/Agouron)WO97/03783 (BritishBiotech)WO97/18207 (DuPontMerck)WO98/38179 (GlaxoWellcome)WO98/47863 (LabsJaquesLogeais)在那些公告中归功于N-甲酰羟胺衍生物的药物利用性是抑制基质金属蛋白酶(MMPs)的能力，和在一些例子中，释放肿瘤坏死因子(TNF)，因而对这些酶引起的疾病和情况，例如癌症和风湿性关节炎进行治疗。该先前的技术未公开或意味N-甲酰羟胺衍生物有抗菌活性。
此外，US-A-4,738,803(Roques等)也公开了N-甲酰羟胺衍生物。然而，这些化合物被作为脑啡肽酶抑制剂来公开，被设想用作抗抑郁剂和降血压剂。同样的，WO97/38705(Bristol-Myers Squibb)公开了一些N-甲酰羟胺衍生物，作为脑啡肽酶和血管紧缩素转换酶抑制剂。该先前的技术也未公开或意味N-甲酰羟胺衍生物有抗菌活性。
发明详述根据本发明的第一个方面，提供了在制备抗菌组合物时，式(Ⅰ)化合物或它的医药学或兽医学可接受的盐的用途 其中R1代表氢，或C1-C6烷基，被一个或多个卤素原子取代的C1-C6烷基；R2代表R10-(X)n-(ALK)m-基团，其中R10代表氢，或C1-C6烷基，C2-C6链烯基，C2-C6炔基，环烷基，芳基，或杂环基团，其中的任意一个可以是非取代的或被(C1-C6)烷基，(C1-C6)烷氧基，羟基，巯基，(C1-C6)烷硫基，氨基，卤素(包括氟、氯、溴和碘)，三氟甲基，氰基，硝基，-COOH,-CONH2,-COORA,-NHCORA,-CONHRA,-NHRA,-NRARB，或-CONRARB取代，其中RA和RB分别独立为(C1-C6)烷基，而ALK代表直链或支链二价C1-C6亚烷基，C2-C6亚烯基，C2-C6亚炔基，而且可插入一个或多个非相邻的-NH-，-O-或-S-键，而X代表-NH-，-O-或-S-，而m和n分别独立的代表0或1；而A代表(ⅰ)式(ⅠA),(ⅠB),(ⅠC)或(ⅠD)的一个基团 其中R3代表氢，而R4代表天然或非天然的α氨基酸的侧链，或者，当与它们分别连接的氮和碳原子结合在一起时，R3和R4形成一个5到8个原子的任选取代的饱和杂环，该杂环任选地与碳环或第二个杂环相稠合，R5和R6，独立代表氢，或任选取代的C1-C8烷基，环烷基，芳基，芳基(C1-C6烷基)，杂环，或杂环(C1-C6烷基)，或者，当与它们连接的氮原子结合在一起时，R5和R6形成一个3到8个原子的任选取代的饱和杂环，该杂环任选地与碳环或第二个杂环相稠合，而R7代表氢，C1-C6烷基，或酰基基团。
在另一方面，本发明提供了一种对在人或非人哺乳动物体内的细菌感染的治疗方法。其包括对患有此类感染的对象投以含有上文定义的式(Ⅰ)的化合物的抗菌有效的药量。
在本发明的另一个方面，提供了处理细菌污染的方法，其通过在污染位置上投以含有上文定义的式(Ⅰ)的化合物的抗菌有效的药量。
如上所定义的式(Ⅰ)的化合物可被用作抗菌的清洁和消毒材料成分。
根据本发明的优选例，本发明的不同方面可被用于万古霉素-，喹喏酮-，以及“β-内酰胺”-抗性的细菌以及它们引起的感染。
根据化合物(Ⅰ)通过抑制细胞内PDF起作用的假设，使用能充分穿透细胞壁的化合物可以得到最强的抗菌效果。因此，在体外有高度PDF抑制剂活性，并可穿过细菌细胞壁的的化合物，根据本发明适宜被选用。预计，在体外是PDF酶的强力抑制剂，但缺少穿过细胞能力的那些化合物的抗菌效力，可以通过以前体药物的形式使用来提高效力。比如，结构修饰了的类似物，其在穿过细菌细胞壁后，比如通过酶的作用，能转化成式(Ⅰ)的母分子。
本发明也提供了如上式(Ⅰ)的新化合物，或它们的医药学或兽医学可接受的盐，其中R1代表氢，C1-C6烷基，或被一个或多个卤素原子取代的C1-C6烷基；R2代表R10-(ALK)m-基团，其中R10代表氢，或C1-C6烷基，C2-C6链烯基，C2-C6炔基，环烷基，芳基，或杂环基团，其中的任意一个可以是非取代的或被(C1-C6)烷基，(C1-C6)烷氧基，羟基，巯基，(C1-C6)烷硫基，氨基，卤素(包括氟、氯、溴和碘)，三氟甲基，硝基，-COOH,-CONH2,-COORA,-NHCORA,-CONHRA,-NHRA,-NRARB，或-CONRARB取代，其中RA和RB分别独立为(C1-C6)烷基，ALK代表直链或支链二价C1-C6亚烷基，C2-C6亚烯基，C2-C6亚炔基，而且可插入一个或多个非相邻的-NH-,-O-或-S-键，而m代表0或1；A代表如上式(ⅠA),(ⅠB),(ⅠC)或(ⅠD)的一个基团其中R3代表氢，而R4代表天然或非天然的α氨基酸的侧链，或者，当与它们分别连接的氮和碳原子结合在一起时，R3和R4形成一个5到8个原子的任选取代的饱和杂环，该杂环任选地与碳环或第二个杂环相稠合，R5和R6，独立代表氢，或任选取代的C1-C8烷基，环烷基，芳基(C1-C6烷基)，非芳族的杂环，或杂环(C1-C6烷基)，或者，当与它们连接的氮原子结合在一起时，R5和R6形成一个3到8个原子的任选取代的饱和杂环，该杂环任选地与碳环或第二个杂环相稠合，而R7代表氢，C1-C6烷基，或酰基基团。
条件是(ⅰ)当A是式(ⅠA)或(ⅠB)基团，并且R2是C2-C5烷基时，则R4不是天然α氨基酸的侧链，或任一功能性取代基被保护，任一氨基基团被酰基化，任一羧基基团被酯化的天然α氨基酸的侧链；(ⅱ)当A是式(ⅠA)或(ⅠB)的基团时，则R4不是双环芳甲基基团；而(ⅲ)当A是式(ⅠA)基团，并且R2是环丙基甲基、环丁基甲基，或环戊基甲基，而且R5和R6之一是氢时，则R4不是叔丁基。
本文使用的术语“(C1-C6)烷基”代表具有1至6个碳原子的直链或支链的烷基部分，包括例如甲基，乙基，正丙基，异丙基，正丁基，异丁基，仲-丁基，叔丁基，正戊基和正己基。
本文使用的术语＂二价(C1-C6)亚烷基＂代表具1至6个碳原子的饱和烃链，以及两个未满足的价键。
本文使用的术语“(C2-C6)链烯基”指直链或支链的烯基团，其具有2至6个碳原子，至少有一个可选的E或Z立体化学的双键。本术语可包括，例如，乙烯基，烯丙基，1-和2-丁烯基和2-甲基-2-丙烯基。
本文使用的术语＂二价(C2-C6)亚烯基＂代表具2至6个碳原子的烃链，至少一个双键，两个未满足的价键。
本文使用的术语“(C2-C6)炔基”代表直链或支链的具有2至6个碳原子和一个三价键的碳氢基团。该术语包括，例如乙炔基，1-丙炔基，1-和2-丁炔基，2-甲基-2-丙炔基，2-戊炔基，3-戊炔基，4-戊炔基，2-己炔基，3-己炔基，4-己炔基和5-己炔基。
本文使用的术语“二价(C2-C6)亚炔基(alkynylene radical)”代表具有2至6个碳原子，至少一个三键，和两个未满足的价键。
本文使用的术语“环烷基”指饱和的脂环部分，其具有3-8个碳原子，包括，例如环丙基，环丁基，环戊基，环己基，环庚基，和环辛基。
本文使用的术语“环烯基”，指不饱和的脂环，其具有3-8个碳原子，包括例子环丙烯基，环丁烯基，环戊烯基，环己烯基，环庚烯基和环辛烯基。在5-8个碳原子的环烯基环的例子中，该环可包括多于一个的双键。
本文使用的术语＂芳基＂指单-，双-，或三-环的碳环芳基团，也指包含有两个共价连接的单环的碳环芳基团。这些基团的例子有苯基，联苯基和萘基。
本文使用的术语＂杂芳基＂指5-或6-芳环，其包含一个或多个杂原子，且任选和苯基环或吡啶基环稠合；指包含两个共价连接的5-或6-元芳环，每个都包含一个或多个杂原子的基团；指包括与-5-或6-元，含有一个或多个杂原子的芳环共价相连的单环碳环芳基的基团。这些基团的例子有噻吩基，呋喃基，吡咯基，咪唑基，苯并咪唑基，噻唑基，吡唑基，异噁唑基，异噻唑基，三唑基，噻二唑基，噁二唑基，吡啶基，哒嗪基，嘧啶基，吡嗪基，三嗪基，4-([1,2,3]-噻二唑基-4-基)苯基和5-异噁唑-3-基噻吩基。
本文使用的非限定的术语“杂环基”或“杂环的”包括上文定义的“杂芳基”，而特别代表包含一或多个选自S，N和O的杂原子的5-7元芳族或非芳族的杂环，而且任选地和一苯环稠合，包括例如吡咯基，呋喃基，噻吩基，哌啶基，咪唑基，噁唑基，噻唑基，噻二唑基，吡唑基，吡啶基，吡咯烷基，嘧啶基，吗啉基，哌嗪基，吲哚基，苯并咪唑基，马来酰亚氨基，琥珀酰亚氨基，苯二甲酰亚氨基，和1,3-二氧-1,3-二氢-异吲哚-2-基基团。
本文使用的术语＂酰基＂代表R20C(O)-基团，其中R20是(C1-C6)烷基，(C2-C6)链烯基，(C3-C7)环烷基，苯基，杂环基，苯基(C1-C6)烷基，杂环基(C1-C6)烷基，(C3-C7)环烷基(C1-C6)烷基，苯基(C2-C6)链烯基，杂环基(C2-C6)链烯基，(C3-C7)环烷基(C2-C6)链烯基，其中任一R20基团可被取代。
本文使用的术语＂双环芳基甲基＂指(ⅰ)被一个单环芳基或杂芳基基团取代的甲基，其中芳基和杂芳基又可被单环芳基或杂芳基取代。或(ⅱ)被一个单环芳基或杂芳基取代的甲基，其中单环芳基和杂芳基和第二个单环芳基或杂芳基基团稠合；还包含非取代的或取代的双环芳基甲基。这些双环芳基甲基的例子有萘基，吲哚基，喹啉基和异喹啉基。
除非在出现的上下文中有特别注明，在此的任何部分出现的术语“取代的”代表被最多到4个取代基取代，每个独立为(C1-C6)烷基，苄基，(C1-C6)烷氧基，苯氧基，羟基，巯基，(C1-C6)烷硫基，氨基，卤素(包括氟、氯、溴和碘)，三氟甲基，硝基，-COOH,-CONH2,-CORA,-COORA,-NHCORA,-CONHRA,-NHRA,-NRARB，或-CONRARB。其中RA和RB分别独立为(C1-C6)烷基。在“取代的”指苄基时，其苯环本身可能被除了苄基的任一前述的基团取代。
本文使用的术语“天然α-氨基酸的侧链”和“非天然α-氨基酸的侧链”指Rx基团，其分别为具有式NH2-CH(Rx)-COOH的天然或非天然的氨基酸。
天然氨基酸的侧链的例子有，包括丙氨酸，精氨酸，天门冬酰胺，天门冬氨酸，半胱氨酸，胱氨酸，谷氨酸，组氨酸，5-羟赖氨酸，4-羟脯氨酸，异亮氨酸，亮氨酸，赖氨酸，甲硫氨酸，苯丙氨酸，脯氨酸，丝氨酸，苏氨酸，色氨酸，酪氨酸，缬氨酸，α-氨基己二酸，α-氨基-正丁酸，3,4-二羟基苯丙氨酸，高丝氨酸，α-甲丝氨酸，鸟氨酸，哌可酸和甲状腺氨酸的侧链。
在包含有功能性取代基的天然α-氨基酸侧链中，例如，有氨基，羧基，羟基，巯基，胍基，咪唑基，或吲哚基团取代的精氨酸，赖氨酸，谷氨酸，天冬氨酸，色氨酸，组氨酸，丝氨酸，苏氨酸，酪氨酸和半胱氨酸中，这些功能性取代基可被任选保护。
同样的，在含有功能性取代基的非天然氨基酸α-氨基酸侧链中，例如氨基，羧基，羟基，巯基，胍基咪唑基或吲哚基团，这些功能性取代基可被任选保护。
术语“被保护”当在和天然或非天然α-氨基酸侧链的功能性基团联系使用的时候，指的是这样的基本上无功能性的取代基的衍生物。广泛使用的T.W.Greene和P.G.Wuts的手册＂有机合成中的保护基团＂，第二版，Wiley，纽约，1991综述了该主题。例如，羧基基团可被酯化(例如作为C1-C6烷基酯)，氨基基团可被转化为酰胺(例如作为-NHCOC1-C6烷基酰胺)或氨基甲酸酯(例如，作为-NHC(=O)OC1-C6烷基或NHC(=O)OCH2Ph氨基甲酸酯)，羟基基团可转化为醚(例如-OC1-C6烷基或O(C1-C6烷基)苯基醚)或酯(例如-OC(=O)C1-C6烷基酯)，而巯基可被转化为硫醚(例如叔丁基或苄基硫醚)，或硫酯(例如SC(=O)C1-C6烷基硫酯)。
根据本发明，由于不对称碳原子的存在，在化合物中有几个实际或潜在手性中心。几个不对称碳原子的存在，产生在手性中心具有R或S立体化学的许多非对映异构体。本发明包括所有这些非对映异构体和它们的混合物。现在，较佳的带有R2基团的碳原子的立体构型是R；而带有R4基团(当不对称时)的碳原子的构型是S；而带有R1基团(当不对称时)的碳原子的构型是R。
在用于本发明的上文所定义的式(Ⅰ)的化合物中，以及上文定义的式(Ⅱ)的本发明的新化合物中(但隶属于其中的限制性条款)R1可能为，例如，氢，甲基，或三氟甲基。氢现为较佳。
R2可能为，例如任选取代的C1-C8烷基，C3-C6链烯基，C3-C6炔基或环烷基；苯基(C1-C6烷基)-，苯基(C3-C6链烯基)-或苯基(C3-C6炔基)-任选在苯环内取代；环烷基(C1-C6烷基)-，环烷基(C3-C6链烯基)-或环烷基(C3-C6炔基)-，在环烷基环内任选地取代。
杂环基(C1-C6烷基)-，杂环基(C3-C6链烯基)-或杂环基(C3-C6炔基)-任选在杂环基环内取代；CH3(CH2)pO(CH2)q-或CH3(CH2)pS(CH2)q-，其中p是0,1,2或3，而q是1,2或3。
R2基团的特别例子包括甲基，乙基，正和异-丙基，正和异丁基，正戊基，异戊基，3-甲基-丁基-1-基，正己基，正庚基，n-乙酰基，正辛基，甲硫基乙基(methylsulfanylethyl)，乙硫基甲基(ethylsulfanylmethyl)，2-甲氧基乙基，2-乙氧基乙基，2-乙氧基甲基，3-羟基丙基，烯丙基，3-苯丙-3-烯-1-基，丙-2-炔-1-基，3-苯基丙-2-炔-1-基，3-(2-氯苯基)丙-2-炔-1-基，丁-2-炔-1-基，环戊基，环己基，环戊基甲基，环戊基乙基，环戊基丙基，环己基甲基，环己基乙基，环己基丙基，呋喃-2-基甲基，呋喃-3-甲基，四氢呋喃-2-基甲基，四氢呋喃-2-基甲基，哌啶基甲基，苯基丙基，4-氯苯基丙基，4-甲基苯基丙基，4-甲氧基苯基丙基，苄基，4-氯苄基，4-甲基苄基，和4-甲氧基苄基。
目前，R2的较佳基团是正丙基，正丁基，正苯基，苄基和环戊基甲基。
在R3处，氢是现在较佳的。
R4可能是，例如天然α氨基酸的特征基团，例如苄基，或4-甲氧基苯基甲基，其中任一功能团可能被保护，任一氨基基团可能被酰化，而任一羧基基团可能被酰胺化；或-[Alk]nR9基团，其中Alk是被一个或多个-O-，或-S-原子，或-N(R12)-基团[其中R12是氢或(C1-C6)烷基基团]任选插入的(C1-C6)亚烷基或(C2-C6)亚烷基，n是0或1，而R9是氢或任选取代的苯基，芳基，杂环基，环烷基或环烯基团或(仅当n是1时)R9还可能是羟基，巯基，(C1-C6)烷硫基，氨基，卤素，三氟甲基，硝基，-COOH,-CONH2,-COORA,-NHCORA,-CONHRA,-NHRA,-NRARB，或-CONRARB，其中RA和RB分别独立为(C1-C6)烷基，或在苯环内由式为-OCH2COR8的基团取代的苄基，其中R8是羟基，氨基，(C1-C6)烷氧基，苯基(C1-C6)烷氧基，(C1-C6)烷基氨基，二((C1-C6)烷基)氨基，苯基(C1-C6)烷基氨基，或杂环基(C1-C6)烷基基团，在杂环内非取代或用卤素，硝基，羧基，(C1-C6)烷氧基，氰基，(C1-C6)烷酰基，三氟甲基(C1-C6)烷基，羟基，甲酰基，氨基，(C1-C6)烷基氨基，双-(C1-C6)烷基氨基，巯基，(C1-C6)烷硫基，羟基(C1-C6)烷基，巯基(C1-C6)烷基或(C1-C6)烷基苯甲基，或-CRaRbRc基团，其中每个Ra,Rb和Rc分别独立是氢，(C1-C6)烷基，(C2-C6)链烯基，(C2-C6)炔基，苯基(C1-C6)烷基，(C3-C8)环烷基，或Rc是氢，而Ra和Rb分别独立为苯基或杂芳基，例如吡啶基，或Rc是氢，(C1-C6)烷基，(C2-C6)链烯基，(C2-C6)炔基，苯基(C1-C6)烷基，或(C3-C8)环烷基，而Ra和Rb和它们相连的碳原子一起形成3到8元的环烷基或-5-到6-元的杂环，或Ra,Rb和Rc和它们相连的碳原子一起形成一个三环核(例如，金刚烷基)；或Ra和Rb分别独立为(C1-C6)烷基，(C2-C6)链烯基，(C2-C6)炔基，苯基(C1-C6)烷基，或如下除氢以外，为Rc定义的基团，或Ra和Rb和它们相连的碳原子一起形成环烷基或杂环环，而Rc为氢，-OH,-SH，卤素，-CN,-CO2H,(C1-C4)全氟烷基，-CH2OH,-CO2(C1-C6)烷基，-O(C1-C6)烷基，-O(C2-C6)链烯基，-S(C1-C6)烷基，-SO(C1-C6)烷基，-SO2(C1-C6)烷基，-S(C2-C6)链烯基，-SO(C2-C6)链烯基，-SO2(C2-C6)链烯基，或-Q-W基团，其中Q代表一个化学键或-O-，-S-，-SO-或-SO2-而W代表苯基，苯基烷基，(C3-C8)环烷基，(C3-C8)环烷基烷基，(C4-C8)环烯基，(C4-C8)环烯基烷基，杂芳基或杂芳基烷基基团，其中W可被独立选自下列的一个或多个取代基任选取代羟基，卤素，-CN,-CO2H,-CO2(C1-C6)烷基，-CONH2,-CONH(C1-C6)烷基，-CONH(C1-C6烷基)2,-CHO,-CH2OH,(C1-C4)全氟烷基，-O(C1-C6)烷基，-S(C1-C6)烷基，-SO(C1-C6)烷基，-SO2(C1-C6)烷基，-NO2,-NH2,-NH(C1-C6)烷基，-N((C1-C6)烷基)2,-NHCO(C1-C6)烷基，(C1-C6)烷基，(C2-C6)链烯基，(C2-C6)炔基，(C3-C8)环烷基，(C4-C8)环烯基，苯基或苄基。
特别为R4基团的例子包括甲基，乙基，苄基，4-氯苄基，4-羟基苄基，苯基，环己基，环己基甲基，吡啶-3-基甲基，叔丁氧基甲基，萘基甲基，异丁基，仲丁基，叔丁基，1-苄硫基-1-甲基乙基，1-甲硫基-1-甲基乙基，1-巯基-1-甲基乙基，1-甲氧基-1-甲基乙基，1-羟基-1-甲基乙基，1-氟-1-甲基乙基，羟甲基，2-羟乙基，2-羧基乙基，2-甲基氨基甲酰基乙基，2-氨基甲酰基乙基，和4-氨基丁基。现在，R4的较佳基团包括叔丁基，异丁基，苄基和甲基。
当R3和R4与它们分别相连的氮和碳原子结合在一起时可能会形成5到8个原子的任选取代的饱和杂环。例如，R3和R4可能在和它们相连的氮原子和碳原子之间形成桥，所述的桥用二价基-(CH2)3-6-，或-(CH2)r-O-(CH2)s-，或-(CH2)r-S-(CH2)s-表示，其中r和s分别独立是1,2或3，附加条件是r+s=2,3,4，或5。
R5和R6可分别独立为，例如，氢，甲基，乙基，叔丁基，环戊基，环己基，1,1,3,3-四甲基丁基，苄基，或2-羟基乙基；或R5和R6和与它们相连的氮原子结合在一起时，可形成一饱和的5-到8-元单环的通过N原子连接的N-杂环，它任选地含有-N(R11)-，其中R11是氢或C1-C6烷基，苄基，酰基，或氨基保护基团，O,S,SO或SO2作为环上成员，和/或在一个或多个碳原子上被羟基，C1-C6烷基，羟基(C1-C6烷基)-，C1-C6烷氧基，氧，缩酮化的氧，氨基，单(C1-C6烷基)氨基，二(C1-C6烷基)氨基，羧基，C1-C6烷氧基羰基，羟甲基，C1-C6烷氧基甲基，氨基甲酰基，单(C1-C6烷基)氨基甲酰基，二(C1-C6烷基)氨基甲酰基，或羟亚胺基任选取代。
这些环的例子是取代或非取代的1-吡咯烷基，哌啶-1-基，1-哌嗪基，六氢-1-哒嗪基，吗啉-4-基，四氢-1,4-噻嗪-4-基，四氢-1,4-噻嗪-4-基1-氧，四氢-1,4-噻嗪-4-基1,1-二氧，六氢吖庚因基，或八氢吖辛因基。前述被取代的例子是2-(甲基氨基甲酰基)-1-吡咯烷基，2-(羟基甲基)-1-吡咯烷基，4-羟基哌啶基，2-(甲基氨基甲酰基)哌啶基，4-羟基亚氨基哌啶基，4-甲氧基哌啶基，4-甲基哌啶-1基，4-苄基哌啶-1-基，4-乙酰基哌啶-1-基，4-甲基-1-哌嗪基，4-苯基-1-哌嗪基，1,4-二氧杂-8-氮杂螺[4,5]癸-8-基，六氢-3-(甲基氨基甲酰基)-2-哒嗪基，和六氢-1-(苄氧基羰基)-2-哒嗪基，十氢异喹啉-2-基，和1,2,3,4-四氢异喹啉-2-基。
当A是式(ⅠA)时，现在较佳的R5是甲基或氢，而R6是甲基。
R7可能是，例如，氢，或R20C(O)-基团，其中R20是一(C1-C6)烷基，例如甲基或乙基。
根据本发明作为抗菌剂有效的化合物的特别例子包括本文的特定实施例的化合物。较佳的本发明的新颖化合物包括2R(或S)-[(甲酰基-羟基-氨基)-甲基]-己酸(1S-二甲基氨基甲酰基-乙基)-酰胺和2R(或S)-[(甲酰基-羟基-氨基)-甲基]-3-环戊基-丙酸(1S-二甲基氨基甲酰基-2,2-二甲基丙基)-酰胺以及它们医药学和兽医学可接受的盐。本发明提到的化合物可以通过对式(Ⅱ)的O-保护的N-甲酰-N-羟基氨基化合物去保护得到 其中R1,R2，和A如通式(Ⅰ)中定义的，R25是一羟基保护基团，可通过氢解或水解除去，留下羟基基团。对于通过氢解除去，苄基是较佳的R25基团，而叔丁基和四氢吡喃基是通过酸水解除去的较佳基团。式(Ⅱ)的化合物，其中A是式(ⅠA),(ⅠB),(ⅠC)或(ⅠD)的基团，可以通过使式(Ⅲ)的酸或它的活性衍生物和式(ⅣA),(ⅣB),(ⅣC)或(ⅣD)的胺分别反应来制备 其中R1R2,R3,R4,R5,R6和R7如通式(Ⅰ)定义的，除了在(ⅣB)中的-OH基团，以及在R1R2,R3,R4,R5,R6和R7中的任一在偶联反应有潜在活性的取代基可能自身被保护以免发生这种反应，而R25如在上面的式(Ⅱ)中定义的，以及任选地从在(ⅣB)的-OH基团和R1R2,R3,R4,R5,R6和R7除去的保护基团。
式(Ⅲ)的化合物可通过N-甲酰化式(Ⅴ)的化合物来制备，例如用乙酸酐和甲酸，或1-甲酰基苯并三唑。 其中R1,R2和R25如式(Ⅱ)有关的定义。而X是手性辅助基团或是OR26基团，其中R26是氢或羟基保护基团。在X是OR26基团或手性辅助基团的情况下，羟基保护基团和手性辅助基团在甲酰化步骤后被除去，以提供式(Ⅴ)的化合物。合适的手性辅助基团包括取代的噁唑烷酮，它可在碱存在的情况下通过水解除去。
在另一个过程中，通式(Ⅱ)的化合物可通过N-甲酰化式(Ⅵ)的化合物制备，例如用乙酸酐和甲酸，或1-甲酰基苯并三唑。 其中R1,R2和R25以及A如式(Ⅱ)有关的定义。式(Ⅵ)的化合物，其中A是式(ⅠA),(ⅠB),(ⅠC)，或(ⅠD)的一个基团，可通过使通式(Ⅶ)的酸或它的活化的衍生物 其中R1,R2和R25如式(Ⅱ)所定义，和式(ⅣA),(ⅣB),(ⅣC)或(ⅣD)的胺如上定义分别反应来制备。
式(Ⅵ)的另一些化合物可通过还原式(Ⅷ)的肟来制备。 还原剂包括一些金属氢化物(例如乙酸中的氰基氢硼化钠，三乙基硅烷或硼烷/吡啶)和有适宜催化剂存在下的氢。
在另一过程中，通式(Ⅱ)的化合物，其中R1和R2如通式(Ⅰ)中定义，R25是如上定义的羟基保护基团，而A是式(ⅠA)的基团，其中R3,R4,R5如通式(ⅠA)所定义，而R6是氢。该化合物可通过如上定义的通式(Ⅲ)的羧酸，式(Ⅸ)的胺，式(Ⅹ)的醛和式(Ⅺ)的异腈的4-组分Ugi反应来制备。R3-NH2(Ⅸ)R4-CHO(Ⅹ)R5-NC (Ⅺ)其中R3,R4和R5如上定义。
通式(Ⅴ)的化合物可通过通式(Ⅺ)的肟的还原反应来制备。 其中R1,R2，和R25如上定义，而X是如上定义的OR26基团或是手性辅助基团。还原剂包括一些金属氢化物(例如溶于乙酸中的氰基氢硼化钠，三乙基硅烷或硼烷/吡啶)和有适宜催化剂存在下的氢。在还原反应之后，当基团X是手性辅助基团时，它可以任选地被转换为OR26基团。
通式(Ⅺ)的化合物可通过通式(Ⅻ)的β-酮基羰基类化合物 其中R1,R2，和X如上定义，和O-保护的羟胺反应制备。
β-酮基羰基类化合物(Ⅻ)可通过用通式(XⅣ)的化合物在碱存在下，甲酰化或酰化通式(XⅢ)的羰基化合物(其中R2和X如上定义)，来制备其外消旋形式， 其中R1如上所定义，而Z是例如卤素或烷氧基的离去基团。
另一种制备通式(Ⅴ)的化合物的方法是通过Michael加成反应将羟胺衍生物加到通式(ⅩⅤ)的α，β-不饱和羰基化合物上， 其中R1,R2，和X如上定义。在Michael加成反应后，当X基团是手性辅助基团时，可以任选地转化为OR26基团。α,β-不饱和的羰基化合物(ⅩⅤ)可通过标准方法制备。
本发明化合物的盐包括生理学上可接受的酸加成盐，例如盐酸盐，氢溴酸盐，硫酸盐，甲基磺酸盐，对甲苯磺酸盐，磷酸盐，乙酸盐，柠檬酸盐，琥珀酸盐，乳酸盐，酒石酸盐，延胡索酸盐和马来酸盐。盐还可通过用碱形成，例如，钠，钾，镁和钙盐。
本发明的组合物可以通过任何与活性成分的药物动力学特征一致的途径来制造，并用于投药。
可口服的组合物可采用片剂，胶囊，粉末，颗粒，锭剂，液体或凝胶制备剂，例如口服，外用，或无菌胃肠外溶液或悬浮液的形式。口服的片剂和胶囊可以是单位剂量的存在形式，还可以包含常规的诸如粘合剂的赋形剂，例如糖浆，阿拉伯树胶，明胶，山梨醇，黄芪胶，或聚乙烯基吡咯烷酮；填充剂，例如乳糖，蔗糖，玉米淀粉，磷酸钙，山梨醇或甘氨酸；片剂润滑剂，例如硬脂酸镁，滑石粉，聚乙二醇或二氧化硅；分解剂例如土豆淀粉，或可接受的湿润剂例如月桂醇硫酸钠。片剂可以根据在现有的药物生产中广为人知的方法来进行包覆。口服液体制备剂可以采用以下形式，例如水性的或油性的悬浮液，溶液，乳液，糖浆或酏剂，或可以在使用前用水或其它合适的载体重组的干制品形式存在。这样的液体制品可包含有常规的添加剂，像悬浮剂，例如，山梨醇，糖浆，甲基纤维素，葡萄糖浆，明胶，氢化的食用脂肪；乳化剂，例如卵磷脂，缩水山梨醇一油酸酯，或阿拉伯树胶；非水载体(可能包含食用脂肪)，例如杏仁油，分馏椰子油，油酯，例如甘油，丙二醇或乙醇；防腐剂，例如甲基或丙基对羟基安息香酸酯或山梨酸，和如需要的常规调味剂或色素。
为皮肤上的外用，活性成分可以被制成乳膏，洗液或油膏。药用的乳膏或油膏配方在该领域中广为人知，例如在标准的药学教科书中如英国药典中描述的。
活性成分亦可通过在无菌媒介中不经胃肠投药。根据所用的载体和浓度，药物可以悬浮或溶解在载体中。有利的是，辅助剂例如局部麻醉剂，防腐剂和缓冲剂可以溶于载体。静脉输液是根据本发明使用的药物的另一途径。
对不同种类的病人和对不同疾病状态的安全和有效的剂量根据该领域所要求的，在临床实验中决定。可以理解的是，对任一特别的病人，特异的剂量水平是由多种因子决定的，包括该特定化合物的活性，年龄，体重，一般健康状况，性别，饮食，投药的时间，投药途径，排泄率，药物配伍和治疗中的疾病的严重程度。
具有PDF抑制作用的化合物能抑制或防止细菌生长的发现，打开了一条通过在体外筛选实验化合物作为PDF抑制子的活性，然后用细菌生长抑制研究来肯定它们的抗菌活性的方法，来鉴别新的抗菌剂的新途径。本发现也使(ⅰ)用具有PDF抑制活性的化合物作为抗菌剂，以及(ⅱ)通过敷以或投以抑制细菌PDF活性的化合物来治疗细菌感染或污染的方法成为可能。
根据本发明的另一个方面，提供了一种鉴别抗菌化合物的方法，包括在体外对测试化合物抑制PDF的活性进行筛选，选择那些显示所述的活性的化合物，并测试它们抑制细菌生长的活性。抑制细菌生长的活性可通过用经典的平板法或肉汤培养基细菌生长抑制研究来进行，例如本文生物学实施例中所进行的。
合适的体外PDF抑制筛选包括将PDF,PDF底物，较好的是，用可见标记物标记，和测试化合物混合，在合适的时间长度后检测是否测试化合物的存在抑制了PDF使底物脱甲酰化的活性。
在一优选例中，分解的底物用荧光标记物，例如荧光胺进行检测。当从PDF底物的N-末端甲硫氨酸上除去甲酰基团时，游离的氨基基团与与荧光胺反应产生荧光产物。
另一筛选涉及检测由表达内生的(或重组表达的)PDF的细菌表达的蛋白质，当在有测试化合物存在的情况下生长的时候，是否产生适当的供N-末端测序的底物，或比在没有测试化合物的情况下生长的同一细菌表达的蛋白质产生较少的底物。这种方法可用本文使用的生物实施例为基础。
在该领域熟练的研究人员可以开发，但不具有创造性加入，可选择的筛选测试化合物抑制细菌PDF的活性的方法。
天然的抗生素放线酰胺素(见例子J.C.SPerkinl,1975,819)是结构式(A)的异羟肟酸衍生物 除了放线酰胺素，多种放线酰胺素的结构类似物也可见到有抗菌活性。(见例子Broughton等(Devlin等，化学学会杂志.佩金学报1(9):830-841,1975；Broughton等，化学学会杂志佩金学报1(9):857-860,1975)然而，至今放线酰胺素的抗菌活性的机制仍未知。本发明者发现放线酰胺素抑制细菌PDF的活性。
matlystatin族化合物和放线酰胺素有许多结构上的相似。两者都是有功能性异羟肟酸金属结合基团的肽键分子。(Ogita等，抗生素杂志45(11):1723-1732；Tanzawa等，抗生素杂志45(11):1733-1737；Haruyama等，抗生素杂志47(12):1473-1480；Tamaki等，抗生素杂志47(12):1481-1492)。matlystatins和它们结构接近的类似物在分子中有具二价哌嗪-1,6-二基基团存在的特征。例如 由于它们的与放线酰胺素极为相似的结构，放线酰胺素抑制PDF的观察意味着matlystatin化合物也能抑制PDF。
根据本发明的另一个方面，提供了在制备抗菌组合物或药剂时，抑制细菌PDF的化合物的用处，条件是(ⅰ)该化合物不是式(Ⅺ)RCO-CH(W)-NH-CO-CH(Y)-CH2-CO-NH-OH(Ⅺ)其中，(a)R是环氨基(cyclic amino)基团，W是氢，甲基，异丙基，异丁基或苄基，而Y是氢，C1-C6烷基，苯基，苄基，4-氯苄基，4-硝基苄基，或4-氨基苄基；或(b)R是2-吡啶基氨基或2-噻唑基氨基，W是异丙基而Y是正戊基；或(c)R是二乙基氨基，W是甲基或异丙基，而Y是正戊基；或(ⅱ)该化合物不是一个包含二价哌嗪-1,6-二基的基团，例如，式(Ⅻ)的基团 本发明的另一个方面，提供了治疗细菌感染或污染的方法，通过对患有此类感染或污染的病人投以，或对这些感染或污染的区域敷以，能抑制细菌PDF酶活性的化合物的抗菌有效的药量。条件是该化合物不是在下一段的限制性条款中提供的化合物。
这些限制性条款排除了放线酰胺素和它的抗菌活性的类似物，如在Devlin等，化学学会杂志，佩金学报1(9):830-841,1975和Broughton等，化学学会杂志，佩金学报1(9):857-860,1975，中公开的，和matlystatin化合物如在Ogita等，抗生素杂志.45(11):1723-1732；Tanzawa等，抗生素杂志.45(11):1733-1737；Haruyama等，抗生素杂志47(12):1473-1480和Tamaki等，抗生素杂志47(12):1481-1492中公开的。
下面的实施例阐明了本发明的优选例。
L-叔-亮氨酸-N-甲基酰胺和L-叔-亮氨酸N,N-二甲基酰胺以及其它的氨基酸衍生物根据确定的文献方法制备。
下列缩写被全文使用DMF N,N-二甲基甲酰胺EDC N-乙基-N’-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐HOAt1-羟基-7-氮杂-苯并三唑HOBt1-羟基苯并三唑HPLC高效液相色谱LRMS低分辨质谱TLC 薄层色谱1H和13C核磁共振谱用BrukerAC250E分光计分别在250.1和62.9MHz记录。用一PerkinElmerSciexAPl165分光计同时在正和负离子模式下获得质谱。红外光谱用PerkinElmerPE1600FTIR分光计记录。
实施例12R(或S)-[(甲酰基-羟基-氨基)-甲基]-己酸-(2,2-二甲基-1S-甲基-氨基甲酰基-丙基)-酰胺 该标题化合物根据在流程1中描述的途径制备并如下详述
流程1 试剂和反应条件A.哌啶，HCHO,EtOH,80℃,o/n；B.H2NOBzl,80℃ o/n；C.HCOOH,Ac2O；D.五氟苯酚，EDC,CH2Cl2；E.H-叔-LeuNHMe,DMF,35℃；F.H2,10％Pd/C,EtOAc/EtOH.
步骤A:2-丁基-丙烯酸将丁基丙二酸(25g,156mmol)溶于乙醇(250ml)，加入37％甲醛溶液(15.45ml,156mmol)，再加入哌啶(47ml,624mmol)。混合物在80℃在回流冷凝器中搅拌过夜。减压除去溶剂，剩余物用1M盐酸稀释，然后用二氯甲烷(3×30ml)抽提。合并的有机抽提物用盐水洗涤，用无水硫酸镁干燥，过滤，蒸发，得到黄色油状的目的产物(25g，有残余溶剂)。1H-NMR:δ(CDCl3),10.04(1H,brs),6.22(1H,s),5.57(1H,d,J=1.3Hz),2.30(2H,t,J=6.9Hz),1.38(4H,m),和0.91(3H,t,J=7.2Hz)。
步骤B:2RS-(苄氧基-氨基-甲基)-己酸将2-丁基丙烯酸(3.43g,27.1mmol)和O-苄基羟胺(5g,40.65mmol)的混合物80℃加热过夜。将混合物冷至室温，用乙酸乙酯(40ml)稀释，然后用1M盐酸(3×20ml)，饱和碳酸氢钠溶液(2×20ml)和盐水(2×20ml)洗涤，用无水硫酸镁干燥。过滤，蒸发后得到白色固体状的标题化合物(2.62g,39％)。1H-NMR:δ(CDCl3),8.05(1H,brs),7.35(5H,m),5.00(2H,m),3.28(2H,m),2.981H,m),1.31(6H,m)和0.88(3H,t,J=5.0Hz)。
步骤C:2RS-[(苄氧基-甲酰基氨基)-甲基]-己酸将2RS-(苄氧基氨基-甲基)-己酸(2.62g,10.51 mmol)溶于甲酸(4ml,105mmol)和乙酸酐(1.9ml,21.02mmol)，室温下搅拌过夜。溶液用乙酸乙酯(40ml)稀释，用水(2×20ml)，饱和碳酸氢钠溶液(20ml)和盐水(20ml)洗涤，无水硫酸镁干燥，过滤并蒸发，剩下黄色油状的目的产物(2.9g,99％)。1H-NMR:δ(CDCl3，旋转异构体)，1H-NMR:δ(CDCl3，旋转异构体)，8.21(0.5H,s),8.14(0.5H,s),7.37(5H,m),4.98(2H,m),3.86(1H,m),3.27(0.5H,dd,J=6.0,14.0Hz),2.93(0.5H,m),2.77(1H,m),1.50(2H,m),1.30(4H,m)和0.88(3H,m)。
步骤D:2RS-[(苄氧基-甲酰基氨基)-甲基]-己酸五氟苯酯将2RS-[(苄氧基-甲酰基氨基)-甲基]己酸(30.72g,110mmol)和五氟苯酚(26.31g,143mmol)溶于二氯甲烷(150ml)。加入EDC(25.3g,131mmol)时将溶液搅拌并在冰浴内冷却。将反应混合物温至室温，搅拌过夜。溶液用1M盐酸(2×50ml)，0.5M碳酸钠(2×50ml)和盐水(50ml)依次洗涤，用无水硫酸镁干燥并过滤。滤液减压蒸发，剩余物用快速色谱(硅胶，二氯甲烷)纯化，得到无色油状的标题化合物(15.0g,31％)。1H-NMR:δ(CDCl3，旋转异构体)，8.17(1H,brs),7.37(5H,m),4.95-4.70(2H,brm),4.10-3.75(2H,brm),3.10(1H,brs),1.88-1.55(2H,m),1.39(4H,m)和0.92(3H,t,J=7.0Hz)。
步骤E:2R(或S)-[(苄氧基-甲酰基氨基)-甲基]-己酸-(2,2-二甲基-1-甲基-氨基甲酰基-丙基)-酰胺将2RS-[(苄氧基-甲酰基氨基)-甲基]-己酸五氟苯酯(5g,11mmol)和叔-亮氨酸N-甲基酰胺(1.62g,11mmol)溶于DMF(60ml)，将混合物在35℃搅拌过夜。减压除去溶剂，剩余物在二氯甲烷中重溶解。溶液用0.5M碳酸钠，1.0M盐酸和盐水依次洗涤，用无水硫酸镁干燥，然后过滤。用快速色谱(硅胶，洗涤梯度是30％到0％的正己烷溶于乙酸乙酯)来分离两个非对映异构体的产物。非对映异构体A(高Rf)1H-NMR:δ(CDCl3，旋转异构体)，8.12,7.87(1H,2brs),7.27(5H,m),6.26(1H,d,J=8.7Hz),5.78(1H,brs),4.91-4.60(2H,brm),4.15(1H,d,J=9.2Hz),3.75(2H,brm),2.79(3H,d,J=4.8Hz),2.56(1H,m),1.60-1.35(2H,brm),1.24(4H,m),0.96(9H,s)和0.86(3H,t,J=6.7Hz)。非对映异构体B(低Rf):1H-NMR:δ(CDCl3，旋转异构体)，8.16,7.88(1H,2brs),7.27(5H,m),6.28(1H,d,J=8.9Hz),5.70-5.44(1H,brs),4.98-4.61(2H,brm),4.14(1H,d,J=9.2Hz),3.78-3.62(2H,brm),2.85-2.60(3H,brm),2.47(1H,m),1.72-1.25(6H,brm),0.98(9H,s)和0.88(3H,t,J=6.7Hz)。
步骤F:2R(或S)-[(甲酰基羟基氨基)-甲基]-己酸-(2,2-二甲基-1S-甲基氨基甲酰基-丙基)-酰胺将2-[(苄基-甲酰基氨基)-甲基]-己酸-(2,2-二甲基-1-甲基氨基甲酰基-丙基)-酰胺(非对映异构体A)(1.0g,2.5mmol)溶于乙酸乙酯(20ml)和乙醇(1ml)的混合物。溶液被置于氩气中。加入10％钯炭，将细氢气气流以气泡流过悬浮液。40分钟后的TLC分析显示所有的起始材料被消耗，留下一更加极性的，氯化高铁阳性的物质。系统用氩气冲洗，通过过滤除去催化剂。滤液蒸发至干，剩下白色泡沫状的标题化合物(810mg，包括残余溶剂)。1H-NMR:δ((CD3)2SO，旋转异构体)，9.81,9.41(1H,2brs),7.82-7.60(3H,m),4.04(1H,d,J=9.3Hz),3.50-3.02(2H,m),2.87-2.60(1H,m),2.41(3H,d,J=4.5Hz),1.39-0.936H,m),0.75(9H,s)和0.67(3H,t,J=5.7Hz).13C-NMR:δ((CD3)2SO),172.5,170.2,157.5,59.9,42.8,33.3,29.0,28.4,28.2,26.4,24.8,21.7和13.3.1R(KBr片),Vmax3309,2959,2873,1646和1540cm-1。
将2-[(苄氧基-甲酰基氨基)-甲基]-己酸-(2,2-二甲基-1-甲基氨基甲酰基-丙基)-酰胺(非对映异构体B)(1.0g,2.5mmol)(1.0g,2.5mmol)类似的去保护，得到标题化合物的非对映异构体B(740mg,97％)。1H-NMR:δ((CD3)2SO，旋转异构体)，9.75,9.30(1H,2brs),7.81-7.42(3H,m),4.04(1H,d,J=9.5Hz),3.53-3.02(2H,m),2.80-2.55(1H,m),2.41(3H,d,J=4.5Hz),1.33-0.82(6H,m),0.72(9H,s)和0.67(3H,t,J=6.7Hz).13C-NMR:6((CD3)2SO),172.6,170.4,161.7,157.0,59.8,34.0,29.4,28.6,26.7,25.2,22.1和14.1.IR(KBr片),vmax3312,2959,1640,1541,1369和1240cm-1。
实施例22R(或S)-[(甲酰基-羟基氨基)-甲基]-己酸-(2,2-二甲基-1S-叔丁基-氨基甲酰基-丙基)-酰胺 标题化合物用类似实施例1的方法制备，采用L-叔亮氨酸-N-叔丁基酰胺代替在步骤E中的L-叔亮氨酸-N-甲基酰胺。非对映异构体不能用快速色谱(硅胶，乙酸乙酯)分离，而是通过氢解转换成目的N-甲酰基羟胺衍生物的混合物。白色固体13C-NMR:δ((CD3)2SO),172.8,172.5,170.1,169.6,161.6,156.9,59.9,59.7,51.9,51.7,50.2,49.6,48.3,43.2,43.1,42.7,34.2,34.0,29.6,29.3,29.2,28.8,28.6,26.7,22.2,22.1,20.3和13.9.IR(KBr),Vmax3311,2964,1639,1548,1456,1394,1364和1226cm-1。
实施例32R(或S)-[(甲酰基羟基氨基)-甲基]-己酸(1S-甲基-2-吗啉-4-基-2-氧-乙基)-酰胺 将2RS-[(苄氧基甲酰基氨基)-甲基]-己酸五氟苯酯(实施例1，步骤D)(445mg,1mmol)溶于DMF(5ml)的溶液加到一蒸煮管中的L-丙氨酸-N-吗啉代酰胺(158mg,1mmol)中，然后35℃搅拌过夜。真空除去DMF，剩余物在二氯甲烷(2ml)中重新溶解，通过一纯化柱(Isolute-NH2)，用二氯甲烷(4ml)洗涤，来除去五氟苯酚。减压除去二氯甲烷，剩余物在甲酸(2ml)和乙酸乙酯(2ml)中重新溶解。溶液用10％钯炭(200mg)处理，室温下搅拌2小时。催化剂通过硅藻土滤过除去，用甲醇充分洗涤，真空除去溶剂。化合物用反相HPLC(洗脱梯度，10-90％乙氰/水).非对映异构体A:1H-NMR；δ(CD3OD),8.03(0.5H,s),7.84(0.5H,s),4.75(1H,m),3.65(8H,m),3.39(1H,m),3.24(1H,dd,J=4.0,13.2Hz),2.84(1H,m),1.57(2H,m),1.34(7H,m),和0.92(3H,m)。LRMS:-veion 328[M-H]。非对映异构体B:1H-NMR；δ(CD3OD),3.66(8H,m),3.41(1H,dd,J=9.98,13.1Hz),3.23(1H,m),2.90(0.5H,m),2.71(0.5H,m),1.62(2H,m),1.33(7H,m),和0.92(3H,t,J=6.7Hz)。LRMS:-ve ion 328[M-H]。
实施例4到12的化合物是通过和实施例3类似的方法制备的，用合适的胺组分取代了L-丙氨酸-N-吗啉代酰胺。在同时制备两种非对映异构体的情况下，非对映异构体A更快被洗提，且有更好的在体外抗PDF的能力。在一些例子中，仅有走的更快的非对映异构体被取出成为最终产物。
实施例42R(或S)-[(甲酰基-羟基氨基)-甲基]-己酸(1S-二甲基氨基甲酰基-乙基)-酰胺 非对映异构体A:δ(CD3OD),4.72(1H,m),3.53(1H,dd,J=8.9,13.0Hz),3.23(1H,m),3.14(3H,s),2.95(3H,s),2.83(0.5H,m),2.74(0.5H,m),1.57(2H,m),1.33(7H,m)和0.92(3H,m)。LRMS；+ve ion 288[M+H],-ve ion286[M-H]。
非对映异构体B:1H-NMR；δ(CD3OD),4.74(1H,m),3.41(1H,dd,J=9.9,13.0Hz),3.25(1H,dd,J=4.0,13.1Hz),3.15(3H,s),2.97(3H,s),2.89(0.5H,m),2.72(0.5H,m),1.53(2H,m),1.33(7H,m)和0.93(3H,t,J=6.7Hz)。LRMS:+ve ion 310[M+Na],-ve ion 286[M-H]。
实施例52R(或S)-[(甲酰基-羟基氨基)-甲基]-己酸(1S-羟甲基-3-甲基-丁基)-酰胺 非对映异构体A:1H-NMR；δ(CD3OD),4.07(1H,m),3.55(1H,m),3.45(2H,m),3.20(1H,m),2.85(0.5H,m),2.80(0.5H,m),1.60(3H,m),1.35(6H,m)和0.93(9H,m)。LRMS:+ve ion 289[M+H],-ve ion 287[M-H]。
非对映异构体B:1H-NMR；δ(CD3OD),4.07(1H,m),3.59(1H,m),3.45(2H,m),3.24(1H,m),2.70(1H,m),1.62(3H,m),1.35(6H,m)和0.93(9H,m)。LRMS:+ve ion 311[M+Na],289[M+H],-ve ion 287[M-H]。
实施例62R(或S)-[(甲酰基-羟基氨基)-甲基]-己酸(1S-羟甲基-2-苯基-乙基)-酰胺 非对映异构体A:1H-NMR；δ(CD3OD),7.24(5H,m),4.15(1H,m),3.54(2H,d,J=5.4Hz),3.38(1H,dd,J=7.8,13.1 Hz),3.14(1H,dd,J=4.7,13.2Hz),2.95(1H,dd,J=7.3,13.7Hz),2.68(2H,m),1.58(2H,m),1.32(4H,m),和0.91(3H,t,J=6.7Hz)。LRMS:+ve ion 345[M+Na],323[M+H],-ve ion 321[M-H]。
非对映异构体B:LRMS:+ve ion 345[M+Na],323[M+H],-ve ion 321[M-H]。
实施例72R(或S)-[(甲酰基-羟基氨基)-甲基]-己酸[2,2-二甲基-1S-吡啶-2-基-氨基甲酰基)-丙基]-酰胺 非对映异构体A无色油状。1H-NMR；δ(CD3OD),8.34(1H,m),8.06(1H,m),7.90(1H,m),7.33(1H,m),4.45(1H,s),3.55(1H,dd,J=8.3,13.2Hz),3.25(1H,m),3.05(1H,m),1.61(2H,m),1.32(4H,m),1.11(9H,s)和0.85(3H,m)。LRMS:+ve ion 379[M+H],-ve ion 377[M-H]。
非对映异构体B无色油状。1H-NMR；δ(CD3OD),8.33(1H,m),8.20(0.5H,m)7.93(1H,m),7.41(0.5H,m),7.28(1H,m),4.48(1H,s),3.52(1H,dd,J=8.8,13.1Hz),3.23(1H,dd,J=3.9,13.1Hz),3.05(0.5H,m),2.87(0.5H,m),1.62(2H,m),1.36(4H,m),1.11(9H,s)和0.93(3H,m)。LRMS:+ve ion 393[M+Na],379[M+H],-ve ion 377[M-H]。
实施例82R(或S)-[(甲酰基-羟基氨基)-甲基]-己酸(1S-二甲基氨基甲酰基-2-甲基-丙基)酰胺 非对映异构体A无色油状。LRMS:+ve ion 338[M+Na],-ve ion 319[M-H]。
实施例92R(或S)-[(甲酰基-羟基氨基)-甲基]-己酸(1S-二甲基氨甲酰基-2-苯基-乙基)酰胺 非对映异构体A无色油状。LRMS:+ve ion 386[M+Na],-ve ion 362[M-H]。
非对映异构体B无色油状。LRMS:+ve ion 386[M+Na],-ve ion 362[M-H]。实施例102R(或S)-[(甲酰基-羟基氨基)-甲基]-己酸(1S-二甲基氨基甲酰基-3-甲基-丁基)酰胺 非对映异构体A无色油状。LRMS:+ve ion 352[M+Na],-ve ion 328[M-H]。
实施例112R(或S)-[(甲酰基-羟基氨基)-甲基]-己酸[3-甲基-1/S-吡咯烷-1-羰基)-丁基]酰胺
非对映异构体A无色油状。LRMS:-ve ion 354[M-H].。
实施例121-{2R(或S)-[(甲酰基-羟基氨基)-甲基]-己酰基}-吡咯烷-2S-羧酸二甲基酰胺 非对映异构体A无色油状。LRMS:+ve ion 336[M+Na],-ve ion 312[M-H]。非对映异构体B无色油状。LRMS:+ve ion 336[M+Na],-ve ion 312[M-H]。
实施例132R(或S)-[(甲酰基-羟基氨基)-甲基]-己酸-(1S-二甲基氨基甲酰基-2,2-二甲基-丙基)-酰胺 方法1标题化合物的合成途径在流程2中略述，在下文详述。
流程2 A.HCOOEt,NaOEt；B.HCl,NHOBzl,NaOAc,aq.EtOH；C.NaOH,MeOH；D.H-TleMe2,EDC,HOAt,DMF；E.NaCNBH3,AcOH然后分离非对映异构体；F.HCOBt,THF；G.H2,Pd/C,MeOH.
步骤A:2RS-甲酰基-庚酸乙酯将金属钠(4.38g,0.191mmol)切成小片，放在一个炉火烘干的二颈圆底烧瓶中的一层氩气下。加入无水乙醚(100ml)，搅拌悬浮液，冷至0℃。烧瓶装置回流冷凝器，然后逐滴加入乙醇(1.03ml,17.3mmol)。通过滴液漏斗，在大约20分钟内，逐滴加入甲酸乙酯(15.41g,0.208mmol)和己酸乙酯(25g,0.173mmol)的混合物。得到的桔红悬浮液(金属钠依然可见)温至室温，搅拌过夜。得到的稠状桔红色悬浮液(无金属钠可见)冷至0℃，用冰水(100ml)稀释。混合物转移至另一分液漏斗，除去水相，用乙醚洗涤，冷至0℃，用1M盐酸(200ml)酸化。乳液用乙酸乙酯抽提，分离桔红色层，用盐水洗涤，用无水硫酸镁干燥并过滤。滤液减压浓缩，得到主要包含标题化合物的黄色油(11.09g)，不经进一步纯化在步骤B中使用。
步骤B:2RS-(苄氧基亚氨基)-庚酸乙酯将从步骤A得到的Claisen粗产物(11.0g,63.9mmol)溶于乙醇(100ml)和水(10ml)，在加入醋酸钠(6.2g,76.6mmol)和O-苄基羟基胺盐酸盐(12.23g,76.6mmol).时冷至0℃。混合物温至室温，搅拌过夜。得到的悬浮液经过滤，滤液减压浓缩。剩余的黄色膏状物在乙酸乙酯和水间分配。有机相用1M盐酸和盐水洗涤，用无水硫酸镁干燥，过滤，蒸发，成为一黄色油状物。目的产品用快速色谱(硅胶，洗脱梯度10％到25％正己烷中的乙酸乙酯)获得。产量9.19g(52％)。1H-NMR:δ(CDCl3，顺式和反式异构体的混合物)，7.46(0.6H,d,J=8.0Hz),7.38-7.28(5H,m),6.79(0.4H,d,J=7.1Hz),5.11(0.8H,s),5.08(1.2H,s),4.16(1.2H,q,J=7.0Hz),4.13(0.6H,q,J=7.0Hz),3.91(0.4H,q,J=7.2Hz),3.21(0.6H,td,J=8.0和6.1Hz),1.90-1.48(2H,m),1.37-1.20(7H,m),0.87(3H,t,J=7.0Hz)。
步骤C:2RS-(苄氧基亚氨基-甲基)-庚酸将2RS-(苄氧基亚氨基-甲基)-庚酸乙酯(7.0g,25.24mmol)溶于甲醇(125ml)，将溶液冷至0℃。用2分钟分部加入1M氢氧化钠(26ml,26mmol)，得到淡黄色乳液。加入额外的甲醇，直到得到澄清溶液。溶液在0℃搅拌90分钟，然后在室温下搅拌5小时，这时TLC分析显示所有的起始材料都被消耗。减压除去溶剂，剩余物在水和乙酸乙酯间分配。水层冷却到0℃，用1M盐酸酸化。形成的乳状液用乙酸乙酯提取。混合的有机抽提物用盐水洗涤，用无水硫酸镁干燥，并过滤。滤液减压浓缩，得到黄色油状的标题化合物(5.15g,82％)，不经进一步在步骤D中纯化使用。1H-NMR:δ(CDCl3，顺式和反式异构体的混合物)，8.00(1H,brs),7.46(0.6H,d,J=7.9Hz),7.36-7.24(5H,m),6.80(0.4H,d,J=7.0Hz),5.13(0.8H,s),5.09(1.2H,s),3.94(0.4H,q,J=7.1Hz),3.27(0.6H,td,J=6.4和8.0Hz),1.94-1.58(2H,m),1.48-1.24(4H,m)和0.94-0.84(3H,m)。
步骤D:2RS-(苄氧基亚氨基-甲基)-庚酸(1S-二甲基氨基甲酰基-2,2-二甲基-丙基)酰胺将2-(苄氧基亚氨基-甲基)-庚酸(5.16g,20.7mmol)，叔亮氨酸N,N-二甲基酰胺(3.60g,22.77mmol)和EDC(4.76g,24.84mmol)在DMF(75ml)中搅拌，冷至0℃。加入HOAt(250mg,cat.)，亮黄色混合物被温至室温，搅拌过夜。减压除去溶剂，剩余的油在乙酸乙酯和1M盐酸间分配。有机相用盐水洗涤，用无水硫酸镁干燥，过滤，减压浓缩至干。用快速色谱(硅胶，洗脱梯度用33％到66％的正己烷中的乙酸乙酯)得到的无色油状的标题化合物。产量6.84g(85％)。1H-NMR:δ(CDCl3，顺式和反式异构体的混合物)，7.45(0.6H,2d),7.40-7.26(5H,m),6.72(0.4H,2d),6.58(1H,m),5.20-4.69(3H,m),3.82(0.4H,m),3.16-3.10(3H,m),3.05(0.6H,m),2.99-2.92(3H,m),1.90-1.54(2H,m),1.39-1.17(4H,m),0.97(2.7H,s),0.96(1.8H,s),0.94(2.7H,s),0.92(1.8H,s)和0.92-0.82(3H,m)。
步骤E:2R(或S)-(苄氧基亚氨基-甲基)-庚酸(1S-二甲基氨基甲酰基-2,2-二甲基-丙基)酰胺在溶于乙酸(40ml)的2RS-(苄氧基亚氨基-甲基)-庚酸(1S-二甲基-氨基甲酰基-2,2-二甲基-丙基)酰胺(5.0g,12.84mmol)中一次加入氰基硼氢化钠(2.02g,32.0mmol)。在1小时的过程中，反应物缓慢溶解，伴有轻微气泡，形成一无色溶液，搅拌过夜。减压，与甲苯共沸，以除去溶剂。剩余油状物在乙醚和1M碳酸钠(注意！-产生一些气体)之间分配。有机层用盐水洗涤(70ml)，用盐水洗涤过后，用无水硫酸镁干燥，过滤并减压浓缩至干燥。标题化合物的两种非对映异构体用快速色谱纯化并分离(硅胶，洗脱梯度为50％to100％正己烷中的乙酸乙酯)。
非对映异构体A(快洗提)无色油状物(2.27g,45％)。1H-NMR:δ(CDCl3),7.43-7.28(5H,m),6.76(1H,brd,J=9.4Hz),5.69(1H,brs),4.93(1H,d,J=9.4Hz),4.72(2H,s),3.15(3H,s),3.18-3.00(2H,m),2.96(3H,s),2.49(1H,m),1.66-1.49(2H,m),1.46-1.19(4H,m),0.99(9H,s)和0.86(3H,t,J=6.8Hz。
非对映异构体B(慢洗提)无色油状物(1.44g,46％)。1H-NMR:δ(CDCl3),7.40-7.27(5H,m),6.70(1H,brd,J=9.0Hz),5.99(1H,brs),4.85(1H,d,J=9.0Hz),4.71(2H,d,J=1.6Hz),3.16(3H,s),3.06-2.97(2H,m),2.95(3H,s),2.57(1H,m),1.74-1.21(6H,m),1.00(9H,s)和0.88(3H,brt,J=6.7Hz)。
步骤F:2R(或S)-[(苄氧基-甲酰基氨基)-甲基]-庚酸(1S-二甲基氨基甲酰基-2,2-二甲基-丙基)酰胺将2-(苄氧基氨基-甲基)-庚酸(1S-二甲基氨基甲酰基-2,2-二甲基-丙基)酰胺(非对映异构体A)(2.02g,5.13mmol)溶于无水THF(50ml)，置于一层氩气之下。加入N-甲酰基苯并三唑(A.R.Katritzky等，合成1995,503)(0.83g,5.65mmol)，混合物在室温下搅拌4小时。减压蒸发溶剂，剩余油状物在二氯甲烷和1M氢氧化钠分配。有机层用更多的氢氧化钠和盐水洗涤，用无水硫酸镁干燥，过滤，减压浓缩至干。标题化合物用快速色谱以白色晶状固体的形式得到。(硅胶，用33％正己烷中的乙酸乙酯来洗脱)。产量为1.60g(74％).。1H-NMR:δ(CDCl3，旋转异构体)，8.00(1H,brm),7.47-7.29(5H,m),6.25(1H,brd,J=9.3Hz),5.08-4.74(2H,brm),4.87(1H,d,J=9.4Hz),3.89-3.52(2H,brm),3.13(3H,s),2.94(3H,s),2.54(1H,m),1.67-1.11(6H,m),0.95(9H,s)和0.85(3H,brt,J=6.9Hz)。
2-(苄氧基氨基-甲基)-庚酸(1S-二甲基氨基甲酰基-2,2-二甲基-丙基)酰胺(非对映异构体B)由步骤E中的慢洗提的非对映异构体类似制备。产量为0.38g(41％)。1H-NMR:δ(CDCl3，旋转异构体)，8.00(1H,brm),7.47-7.28(5H,brm),6.29(1H,brd,J=9.3Hz),5.01-4.63(2H,brm),4.88(1H,d,J=9.3Hz),3.82-3.51(1.5H,brm),3.20-2.78(6.5H,brm),2.50(1H,brm),1.76-1.17(6H,brm),0.97(9H,s)和0.85(3H,brt,J=6.7Hz)。
步骤G:2R(或S)-[(甲酰基-羟基氨基)-甲基]-己酸-(1S-二甲基氨基甲酰基-2,2-二甲基-丙基)酰胺将2-[(苄氧基-甲酰基氨基)-甲基]-庚酸(1S-二甲基氨基甲酰基-2,2-二甲基-丙基)酰胺(非对映异构体A)(1.43g,3.41mmol)溶于甲醇(50ml)，置于一层氩气之下。加入10％钯炭(100mg，大约)(悬浮在乙酸乙酯(2ml))中的悬浮液，剧烈搅拌混合物，同时在溶液中鼓入氢气气泡。10分钟后，将混合物置于氢气中，继续搅拌3小时。此时TLC分析显示所有的起始材料被消耗。体系用氩气净化，并过滤除去催化剂。滤液减压浓缩，得到标题化合物的无色吸湿性泡沫(1.11g,99％)。1H-NMR:δ(CDCl3，旋转异构体)，8.41(0.35H,s),7.83(0.65H,brs),6.80(0.35H,brd,J=8.9Hz),6.62(0.65H,brd,J=9.4Hz),4.91(0.65H,brd,J=9.4Hz),4.88(0.35H,brd,J=8.9Hz),4.04(1H,dd,J=14.7和7.4Hz),3.82(0.65,dd,J=14.0和9.7Hz),3.56(0.35H,dd,J=14.7和3.3Hz),3.48(0.65H,dd,J=14.0和4.0Hz),3.16(1.05H,s),3.15(1.95H,s),2.98(1.05H,s),2.96(1.95H,s),2.90-2.74(0.65H,brm),2.74-2.61(0.35H,brm)1.73-1.17(6H,brm),0.99(3.15H,s).0.95(5.85H,s)和0.87(3H,brt,J=6.7Hz).13C-NMR；δ(CDCl3),174.6,171.2,162.2,157.2,60.1,54.5,54.3,52.3,48.4,44.8,44.3,35.6,35.4,29.6,29.0,26.3,20.8,20.2,14.0和13.7。LRMS:+ve ion 352(M+Na),-ve ion 328(M-H)。
2-[(甲酰基-羟基氨基)-甲基]-己酸-(1S-二甲基氨基甲酰基-2,2-二甲基-丙基)酰胺(非对映异构体B)由步骤E中的非对映异构体B类似制备。1H-NMR；δ(CDCl3，旋转异构体)，9.37(0.5H,s),8.40(0.5H,s),7.75(0.5H,brs),6.62(0.5H,brs),6.41(0.5H,brd,J=7.1Hz),4.87(0.5H,brd,J=6.6Hz),4.66(0.5H,brd,J=7.6Hz),3.84-3.39(2H,m),3.21(1.5H,brs),3.14(1.5H,brs),2.98(3H,brs),2.91-2.54(1H,m),1.79-1.23(6H,m)和1.08-0.83(12H,m).13C-NMR；δ(CDCl3,旋转异构体),174.9,173.3,56.3,54.8,51.6,50.3,45.545.1,38.6,38.4,36.2,36.0,35.3,34.4,29.5,29.4,29.3,29.2,26.6,26.5,22.6,22.5和13.9。LRMS:+ve ion 352[M+Na],-ve ion 328[M-H]。
方法Ⅱ实施例13化合物的另一不对称的合成途径在流程3中略述，在下文详述。
流程3 试剂和反应条件A.哌啶，HCHO,EtOH,80℃,o/n；B.tBuCOCl,Et3N，然后3-锂-4-苄基-5,5-二甲基-噁唑烷-2-酮；C.H2NOBzl，室温，o/n，然后pTsOH,EtOAc；D.LiOH,aq.THF,0℃；E.H-TleNMe2,HOBt,EDC,DMF；F.HCOBt,THF；G.H2,Pd/C,EtOH.
步骤A:2-丁基丙烯酸在溶于乙醇(200ml)的正丁基丙二酸(17.2g,107mmol)中加入哌啶(12.76ml,129mmol)和37％水溶的甲醛(40.3ml,538mmol)。溶液被热至80℃，在此时间中，出现沉淀，而后在1小时后完全溶解。反应混合物在80℃搅拌过夜，然后冷至室温。减压除去溶剂，剩余物溶于乙酸乙酯(200ml)，依次用1M盐酸，盐水洗涤，用无水硫酸镁干燥，然后过滤。滤液经浓缩得到澄清油状的标题化合物(13.37g,97％)。1H-NMR；δ(CDCl3),6.29(1H,s),5.65(1H,s),2.34-2.28(2H,m),1.54-1.26(4H,m)和0.94(3H,t,J=7.1Hz)。
步骤B:4S-苄基-3-(2-丁基丙烯酰基)-5,5-二甲基噁唑烷-2-酮将2-丁基丙烯酸(21.5g,168mmol)溶于干THF(500ml)，在一层氩气下冷至-78℃。以使温度保持在-60℃以下的速率加入三乙胺(30ml,218mmol)和三甲基乙酰氯(21ml,168mmol)。-78℃搅拌混合物30分钟，温至室温保持2小时，最后再冷至-78℃。
在另一烧瓶中，将4S-苄基-5,5-二甲基噁唑烷-2-酮溶于干THF(500ml)，并在一层氩气下冷至-78℃。缓慢加入正丁基锂(2.4M正己烷溶液，83ml，200mmol)室温下搅拌混合物30分钟。得到的阴离子利用套管转入原始的反应容器中。反应物温至室温，在室温下搅拌过夜。反应用1M碳酸氢钾(200ml)终止，减压除去溶剂。剩余物在乙酸乙酯和水之间分配。有机层用盐水洗涤，用无水硫酸镁干燥，过滤并减压浓缩，得到一桔红色油状物。TLC分析显示在要求的产物外还有未反应的手性辅助剂存在。将该材料的一部分(30g)溶于二氯甲烷，冲过一硅胶板，得到一黄色油状的纯净标题化合物(25.3g)。1H-NMR；δ(CDCl3),7.31-7.19(5H,m),5.41(2H,s),4.51(1H,dd,J=9.7,4.2Hz),3.32(1H,dd,J=14.2,4.2Hz),2.82(1H,dd,J=14.2,9.7Hz),2.40-2.34(2H,m),1.48-1.32(4H,m),1.43(3H,s),1.27(3H,s)和0.91(3H,t,J=7.1Hz)。一些手性辅助剂通过和甲醇一起冲过硅胶板被回收。
步骤C:4S-苄基-3-[2-(苄氧基氨基-甲基)-己酰基]-5,5-二甲基-噁唑烷-2-酮(对甲苯磺酸盐)将4S-苄基-3-(2-丁基丙烯酰基)-5,5-二甲基-噁唑烷-2-酮(19.8g,62.8mmol)和O-苄基羟胺(15.4g,126mmol)混合，室温搅拌过夜。混合物溶于乙酸乙酯，用1M盐酸，1M碳酸钠和盐水洗涤，用无水硫酸镁干燥，然后过滤。滤液减压浓缩，形成淡黄色油状物(25.3g)，由NMR和HPLC分析，包含4S-苄基-3-[2-(苄氧基氨基-甲基)-己酰基]-5,5-二甲基-噁唑烷-2-酮(约82％d.e.)，以及微量的起始材料。产物和另一批(26.9g,76％d.e.)合并，并溶于乙酸乙酯(200ml)。加入对甲苯磺酸(22.7g,119mmol)，将混合物冷至0℃。通过投入晶种并刮擦得到标题化合物的白色晶状固体。产量25.2g,(34％，单非对映异构体)。还得到第二批产物(14.7g,20％，单非对映异构体)。1H-NMR；δ(CDCl3),7.89(2H,d,J=8.2Hz),7.37-7.12(10H,m),7.02(2H,d,J=6.9Hz),5.28-5.19(2H,m),4.55(1H,m),4.23(1H,m),3.93(1H,m),3.58(1H,m),2.58(1H,m),2.35(3H,s),1.67-1.51(2H,m),1.29-1.16(4H,m),1.25(3H,s),1.11(3H,s)和0.80-0.75(3H,m)。步骤D:2R-苄氧基氨基-甲基)-己酸4S-苄基-3-[2R-(苄氧基氨基-甲基)-己酰基]-5,5-二甲基-噁唑烷-2-酮对甲苯磺酸盐(25.2g,40.2mmol)在乙酸乙酯和1M碳酸钠之间分配。有机层用无水硫酸镁干燥，过滤，减压蒸发。剩余油状物溶于THF(150ml)和水(50ml)，冷至0℃，用氢氧化锂(1.86g,44.2mmol)处理。溶液在0℃搅拌30分钟，室温搅拌过夜。反应用1M柠檬酸酸化至pH4，然后除去溶剂。剩余物在二氯甲烷和1M碳酸钠间分配。碱性的水相层用柠檬酸酸化至pH4，用乙酸乙酯抽提三次。合并有机层用无水硫酸镁干燥，过滤并浓缩，得到无色油状物的标题化合物(7.4g,73％)。1H-NMR；δ(CDCl3),8.42(2H,brs),7.34-7.25(5H,m),4.76-4.66(2H,m),3.20-3.01(2H,m),2.73(1H,m),1.70-1.44(2H,m),1.34-1.22(4H,m)和0.92-0.86(3H,m)。
步骤E:2R-(苄氧基氨基-甲基)-己酸(1S-二甲基氨基甲酰基-2,2-二甲基-1-丙基)酰胺将2R-苄氧基氨基-甲基)-己酸(7.98g,31.8mmol)溶于DMF(150ml)，将溶液冷至0℃。加入EDC(6.1g,31.8mmol)和HOBt(430mg,3.2mmol)，搅拌混合物15分钟。加入叔-亮氨酸-N,N-二甲基酰胺(5.53g,34mmol)，反应温至室温，搅拌过夜。溶剂减压除去，剩余物溶于乙酸乙酯，依次用1M盐酸，饱和碳酸氢钠和盐水洗涤，干燥并过滤。除去溶剂以得到黄色油状的标题化合物(8.7g,69％)，其不经进一步纯化在步骤F中使用。1H-NMR；δ(CDCl3),7.35-7.28(5H,m),6.77(1H,brd,J=9.2Hz),5.69(1H,brs),4.93(1H,d,J=9.4Hz),4.72(2H,s),3.15(3H,s),3.10-3.00(2H,m),2.95(3H,s),2.49(1H,m),1.64-1.21(6H,m),0.99(9H,s)和0.86(3H,t,J=6.8Hz).
步骤F:2R-[(苄氧基-甲酰基氨基)-甲基]-己酸(1S-二甲基-氨基甲酰基-2,2-二甲基-1-丙基)酰胺将2R-(苄氧基氨基-甲基)-己酸(1S-二甲基氨基甲酰基-2,2-二甲基-1-丙基)酰胺(7.8g,19.9mmol)溶于干THF(100ml),并用1-甲酰基-苯并三唑(3.08g,21.0mmol)处理。反应物室温搅拌过夜。减压除去溶剂，剩余物溶于乙酸乙酯，用2M氢氧化钠溶液和盐水洗涤。有机层用无水硫酸镁干燥，过滤并减压浓缩至干。该产物从乙醚-己烷中结晶(4.83g,57％分两批获得)。1H-NMR；δ(CDCl3，旋转异构体)，8.12(0.6H,brs),7.89(0.4H,brs),7.37(5H,s),6.25(1H,d,J=9.3Hz),4.96(0.6H,brs),4.86(1H,d,J=9.4Hz),4.80(0.4H,brs),3.74(2H,brs),3.13(3H,s),2.94(3H,s),2.53(1H,m),1.38-1.21(6H,m),0.95(9H,s)和0.85(3H,t,J=6.9Hz)。注意小样品从乙醚-己烷中结晶以得到适宜X-射线晶体衍射的晶体。证实立体化学如在此陈述。
步骤G:2R-[(甲酰基-羟基氨基)-甲基]-己酸(1S-二甲基氨基甲酰基-2,2-二甲基-1-丙基)酰胺将2R-[(苄氧基-甲酰基氨)-甲基]-己酸(1S-二甲基氨基甲酰基-2,2-二甲基-1-丙基)胺(4.72g,11.3mmol)溶于乙醇(80ml)，置于一层氩气之下。加入10％钯碳(940mg)，悬浮于乙酸乙酯(2ml)的悬浮液，在有氢气鼓泡通过系统的情况下，剧烈搅拌混合物。30分钟后，将悬浮液置于一氢气球下，室温搅拌过夜。烧瓶用氩气次扫化，然后过滤除去催化剂。滤液减压浓缩，得到无色泡沫状的标题化合物，它在放置时结晶(3.65g,98％)。1H-NMR；δ(CDCl3，旋转异构体)，9.32(0.4H,brs),8.41(0.4H,s),7.88(0.6H,brs),7.27(0.6H,s),6.75(0.4H,brd,J=8.8Hz),6.58(0.6H,brd,J=9.3Hz),4.89(1H,m),4.04(0.4H,m),3.82(0.6H,m),3.53(1H,m),3.16(1.2H,s),3.15(1.8H,s),2.98(1.2H,s),2.96(1.8H,s),2.79(0.6,m),2.65(0.4H,m),1.78-1.58(6H,m),0.99(3.6H,s),0.95(5.4H,s)和0.87,3H,t,J=6.7Hz).13C-NMR；δ(CDCl3，旋转异构体)，175.8,173.3,172.0,55.4,54.9,52.2,48.8,46.3,38.9,38.8,36.3,36.1,30.3,30.2,29.7,26.9,23.0和14.3。LRMS:+ve ion 352[M+Na],-ve ion 328[M-H]。
实施例14至27的化合物通过实施例13，方法1的类似方法制备，用合适的酯代替步骤A中的乙酸己酯。在两个非对映异构体都被制备时，非对映异构体A快洗脱，在体外通常有更强的抗PDF的能力。在一些例子中，只有快洗脱的非对映异构体(步骤E)被制备到最终产物。
实施例142R(或S)-[(甲酰基-羟基氨基)-甲基]-3-环戊基-丙酸(1S-二甲基-氨基甲酰基-2,2-二甲基-丙基)-酰胺 非对映异构体A。无色玻璃状。1H-NMR；δ(CDCl3，旋转异构体)，9.33(0.4H,brs),8.94(0.6H,brs),8.40(0.4H,s),7.82(0.6H,s),6.82(0.4H,brd,J=8.6Hz),6.62(0.6H,brd,J=9.3Hz),4.90(1H,m),4.06(0.4H,brdd,J=14.7,7.3Hz),3.81(0.6H,brdd,J=14.0,9.7Hz),3.50(1H,m),3.16(1.2H,s),3.14(1.8H,s),2.97(1.2H,s),2.95(1.8H,s),2.80(1H,m),1.87-1.32(9H,m),1.16-0.95(2H,m),0.99(3.6H,s)和0.95(5.4H,s).13C-NMR；δ(CDCl3,旋转异构体),172.9,171.3,55.0,54.5,52.0,48.6,45.4,44.2,38.5,38.4,37.9,37.6,36.4,36.3,35.8,35.6,35.5,32.7,32.6,26.5,26.4和25.1。LRMS:+ve ion 378[M+Na],-ve ion 354[M-H]。
非对映异构体B.无色玻璃状。1H-NMR；δ(CDCl3，旋转异构体)，9.30(0.6H,brs),8.41(0.6H,s),7.75(0.4H,s),6.52(0.4H,brd,J=8.7Hz),6.41(0.6H,brd,J=7.3Hz),4.85(0.4H,brd,J=9.5Hz),4.63(0.6H,brd,J=7.5Hz),3.85-3.40(2H,m),3.25-2.95(6H,3brs),2.78(1H,2brm),1.90-1.40(8H,m),1.30(1H,m),1.20-1.00(2H,m)和1.05-0.95(9H,2s).13C-NMR；δ(CDCl3，旋转异构体)，174.9,173.3,172.8,56.5,54.7,51.5,50.5,44.7,44.6,38.6,38.4,38.0,37.8,36.2,36.0,35.7,35.5,35.3,34.3,33.0,32.9,32.4,32.3,30.9,26.6,26.5,25.1,25.0和24.9。LRMS:+ve ion 378[M+Na],-ve ion 354[M-H]。
实施例152R(或S)-[(甲酰基-羟基氨基)-甲基]-庚酸-(1S-二甲基氨基甲酰基-2,2-二甲基-丙基)-酰胺 非对映异构体A暗桔红色油状物。1H-NMR；δ(CDCl3，旋转异构体)，8.32(0.33H,s),7.76(0.67H,brs),6.78(0.33H,brd,J=9.1Hz),6.68(0.67H,brd,J=9.1Hz),4.87-4.79(1H,m),3.96(0.33H,brdd,J=14.6,7.6Hz),3.74(0.67H,brdd,J=13.9,9.7Hz),3.51-3.36(1H,m),3.09(1H,s),3.08(2H,s),2.90(1H,s),2.89(2H,s),2.86-2.55(1H,m),1.53-1.19(8H,brm),0.92(3H,s),0.88(6H,s)和0.79(3H,m).13C-NMR；δ(CDCl3,旋转异构体),174.3,172.0,170.5,170.4,54.0,53.5,53.4,50.8,49.7,47.4,44.9,43.8,37.5,37.4,34.8,34.7,34.6,30.6,29.2,29.1,25.8,25.5,21.4和12.9。LRMS:+ve ion 344M+H],-ve ion342[M-H]。
非对映异构体B暗桔红色油状物。1H-NMR；δ(CDCl3，旋转异构体)，8.36(0.5H,s),7.74(0.5H,s),6.69(0.5H,brs),6.57(0.5H,brd,J=7.6Hz),4.89(0.5H,brs),4.70(0.5H,d,J=7.8Hz),3.76-3.40(2H,m),3.21(1.5H,s),3.16(1.5H,s),2.98(3H,s),2.81(1H,brs),2.72-2.60(1H,m),1.67(2H,brs),1.42-1.22(6H,m),1.02(4.5H,s),0.99(4.5H,s),0.90(1.5H,s)和0.87(1.5H,s).13C-NMR；δ(CDCl3，旋转异构体)，175.2,173.8,173.1,56.5,55.1,52.3,51.1,50.6,45.8,45.5,39.0,38.9,36.6,36.3,35.6,34.9,32.1,32.0,30.1,29.9,27.4,27.4,27.0,26.9,22.9和14.3。LRMS:+ve ion 344[M+H],-ve ion342[M-H]。
实施例162R(或S)-[(甲酰基-羟基氨基)-甲基]-丙酸-(1S-二甲基氨基甲酰基-2,2-二甲基-丙基)-酰胺 非对映异构体A。白色吸湿性泡沫。1H-NMR；δ(CDCl3，旋转异构体)，8.40(0.33H,s),7.83(0.67H,brs),6.88(0.33H,brd,J=8.6Hz),6.69(0.67H,brd,J=9.2Hz),4.90(1H,t),4.06(0.33H,brdd,J=14.5,7.4Hz),3.82(0.67H,brdd,J=13.7,9.8Hz),3.57-3.44(1H,m),3.16(1H,s),3.15(2H,s),2.98(1H,s),2.96(2H,s),2.87-2.63(1H,m),1.64-1.26(4H,brm),0.98(3H,s),0.94(6H,s)和0.90(3H,t,J=7.3Hz).13C-NMR；δ(CDCl3，旋转异构体)，175.8,173.2,172.0,55.4,54.9,52.2,48.7,46.2,45.0,38.9,38.9,36.3,36.1,36.1,32.7,32.6,27.0,26.9,20.9,20.8和14.4。LRMS:+ve ion 338[M+Na],-ve ion 314[M-H]。实施例172R(或S)-[甲酰基-羟基氨基)-甲基]-4-甲基-戊酸-(1S-二甲基-氨基甲酰基-2,2-二甲基-丙基)-酰胺 非对映异构体A。白色吸湿性固体。1H-NMR；δ(CDCl3，旋转异构体)，8.41(0.4H,s),7.83(0.6H,s),6.65(0.4H,d,J=8.6Hz),6.55(0.6H,d,J=9.0Hz),4.91-4.83(1H,m),4.03-3.95(0.4H,m),3.84-3.74(0.6H,m),3.62-3.43(1H,m),3.16(1H,s),3.13(2H,s),2.98(1H,s),2.96(2H,s),2.89-2.79(0.6H,m),2.76-2.71(0.4H,m),1.69-1.34(1.8H,m),1.29-1.20(1.2H,m),1.0(3.6H,s),0.95(5.4H,s)和0.93-0.88(6H,m).13C-NMR；δ(CDCl3，旋转异构体)，175.8,173.3,172.0,171.7,55.5,55.0,52.4,49.1,44.3,43.2,39.5,39.4,38.9,38.8,36.3,36.1,27.0,26.9,26.3,26.0,23.1,23.0和22.8。LRMS:+ve ion352[M+Na],-ve ion 328[M-H]。
实施例183-环己基-2R(或S)-[(甲酰羟基氨基)-甲基]-丙酸(1S-二甲基-氨基甲酰基-2,2-二甲基-丙基)-酰胺 白色固体。1H-NMR；δ(CDCl3，旋转异构体)，8.38(0.25H,s),7.82(0.75H,s),6.93(0.25H,d,J=8.9Hz),6.74(0.75H,d,J=8.9Hz),4.90(1H,d,J=9.4Hz),4.02(0.25H,dd,J=9.7,14.1Hz),3.78(0.75H,dd,J=9.7,14.1Hz),3.46(1H,m),3.15(3H,s),2.96(3H,s),2.92(1H,m),1.65(6H,m),1.20(5H,m),0.98(9H,s)和0.87(2H,m).13C-NMR；δ(CDCl3，旋转异构体)，176.4,174.2,172.4,56.0,55.6,53.4,49.9,44.0,43.3,39.6,39.4,38.7,38.5,36.9,36.7,36.6,34.8,34.5,27.5,27.4和27.2。LRMS:+ve ion 370[M+H],368[M-H]。
实施例192R(或S)-环戊基-3-(甲酰羟基氨基)-丙酸-(1S-二甲基氨基甲酰基-2,2-二甲基-丙基)-酰胺 非对映异构体A.。灰白色泡沫。1H-NMR；δ(CD3OD，旋转异构体)，8.22(0.33H,s),7.79(0.66H,s),4.89(1H,s),3.87(1H,m),3.50(1H,m),3.19(3H,s,),2.93(3H,s),2.82(0.66H,m),2.65(0.33H,m),1.89(2H,m),1.56(5H,m),1.24(2H,m)和0.98(9H,s).13C-NMR；δ(CD3OD,旋转异构体),176.0,56.7,53.2,51.1,42.7,39.2,36.5,36.4,32.0,27.4,26.4和26.2.IR(反射片)Vmax3318,2953,1663,1628,1529,1367,1229,1142,1087,877cm-1。LRMS:+ve ion 364[M+Na],-ve ion 340[M-H]。实施例202R(或S)-[(甲酰基-羟基氨基)-甲基]-辛酸(1S-二甲基氨基甲酰基-2,2-二甲基-丙基)-酰胺 非对映异构体A。1H-NMR；δ(CDCl3，旋转异构体)，8.40(0.4H,s),7.83(0.6H,s),6.88(0.4H,d,J=8.9Hz),6.68(0.6H,d,J=9.2Hz),4.90(1H,m),4.05(0.4H,m),3.81(0.6H,m),3.50(1H,m),3.16(1.2H,s),3.15(1.8H,s),2.97(1.2H,s),2.96(1.8H,s),2.86(0.6H,m),2.69(0.4H,m),1.59-1.25(10H,m),1.14-0.95(9H,m)和0.89-0.77(3H,m).13C-NMR；δ(CDCl3，旋转异构体)，175.2,172.9,171.6,171.4,54.9,54.5,54.3,52.0,48.4,46.1,45.7,45.1,44.7,39.7,38.5,38.4,35.8,35.6,35.6,31.7,31.5,30.2,30.1,29.1,29.1,27.0,26.4,22.4和14.0。LRMS:+ve ion 380[M+Na],358[M+H],-ve ion 356[M-H]。
实施例212R(或S)-[(甲酰基-羟基氨基)-甲基]-壬酸(1S-二甲基氨基甲酰基-2,2-二甲基-丙基)-酰胺 非对映异构体A棕色固体。1H-NMR；δ(CDCl3，旋转异构体)，9.30(0.4H,s),8.41(0.6H,s),7.83(0.4H,s),6.66(0.4H,d,J=8.9Hz),6.52(0.6H,d,J=9.7Hz),4.92-4.84(1H,m),4.06-3.97(0.4H,m),3.87-3.77(0.6H,m),3.63-3.45(1H,m),3.16(1.2H,s),3.14(1.8H,s),2.98(1.2H,s),2.96(1.8H,s),2.86-2.74(0.6H,m),2.66-2.63(0.4H,m),1.95-1.25(12H,m),1.00-0.95(9H,m),和0.90-0.84(3H,m).13C-NMR；δ(CDCl3,旋转异构体),175.5,172.8,171.4,162.2,156.1,55.1,54.5,51.3,50.8,48.4,46.3,44.9,38.4,38.4,35.8,35.7,33.9,31.7,30.3,30.2,29.4,29.0,27.1,26.5,26.5,24.9,22.6和14.0。LRMS:+ve ion394[M+Na],372[M+H],-ve ion 370[M-H]。实施例222R(或S)-[(甲酰基-羟基氨基)-甲基]-癸酸(1S-二甲基氨基甲酰基-2,2-二甲基-丙基)-酰胺 非对映异构体A无色油状。LRMS:+ve ion 408[M+Na],386[M+H],-ve ion384[M-H]。
实施例23
2R(或S)-[(甲酰基-羟基氨基)-甲基]-5-甲基-己酸(1S-二甲基-氨基甲酰基-2,2-二甲基-丙基)-酰胺 非对映异构体A无色油状。1H-NMR；δ(CDCl3，旋转异构体)，9.31(0.4H,s),8.40(0.4H,s),8.17(0.6H,s),6.77(0.4H,d,J=7.5Hz),6.60(0.6H,d,J=8.0Hz),4.89(1H,m),4.04(0.4H,m),3.83(0.6H,m),3.52(1H,m),3.16(1.2H,s),3.15(1.8H,s),2.98(1.2H,s),2.96(1.8H,s),2.70(1H,m),1.58-1.14(5H,m),1.00-0.95(9H,m)和0.87-0.84(6H,m).13C-NMR；δ(CDCl3,旋转异构体),172.9,171.5,162.2,156.3,55.1,54.6,51.4,48.5,46.4,45.0,38.5,38.4,36.2,35.9,35.6,29.7,28.1,28.0,27.9,26.7,26.6,26.5和22.4。LRMS:+ve ion366[M+Na],344[M+H],-ve ion 342[M-H]。
实施例242R(或S)-[(甲酰基-羟基氨基)-甲基]丙酸(1S-二甲基氨基甲酰基-2,2-二甲基-丙基)-酰胺 非对映异构体A:1H-NMR；δ(CDCl3，旋转异构体)，8.41(0.55H,s),7.81(0.45H,s),6.67(0.45H,d,J=8.4Hz),6.51(0.45H,d,J=7.2Hz),4.88(0.45H,d,J=9.4Hz),4.66(0.55H,d,J=7.7Hz),3.76(1H,m),3.55(0.55H,dd,J=14.3,9.8Hz),3.44(0.45H,dd,J=14.2,5.3Hz),3.21(1.65H,s),3.14(1.35H,s),2.99(1.65H,s),2.97(1.35H,s),2.81(1H,m),1.21(1.65H,d,J=6.7Hz),1.19(1.35H,d,J=6.8Hz),1.01(4.95H,s)和0.98(4.05H,s)。LRMS:+ve ion 310[M+Na],-ve ion 286[M-H]。
非对映异构体B:1H-NMR；δ(CDCl3，旋转异构体)，9.47(0.4H,brs),8.41(0.4H,s),7.86(0.6H,s),6.96(0.4H,brs),6.74(0.6H,d,J=7.3Hz),4.91(1H,m),3.99(0.4H,dd,J=14.2,7.6Hz),3.83(0.6H,dd,J=13.8,9.0Hz),3.50(1H,m),3.16(1.2H,s),3.15(1.8H,s),2.97(3H,s),2.90(1H,m),1.21(1.2H,d,J=6.8Hz),1.15(1.8H,d,J=6.5Hz),0.99(3.6H,s)和0.95(5.4H,s)。LRMS:+veion 310[M+Na],-ve ion 286[M-H]。
实施例252R(或S)-[(甲酰基-羟基氨基)-甲基]-3-甲基丁酸(1S-二甲基-氨基甲酰基-2,2-二甲基-丙基)-酰胺 非对映异构体A:1H-NMR；δ(CDCl3，旋转异构体)，9.33(0.4H,s),8.38(0.4H,s),7.81(0.6H,s),6.86(0.4H,brs),6.58(0.6H,d,J=8.6Hz),4.90(1H,m),4.06(0.4H,dd,J=14.7,7.3Hz),3.91(0.6H,dd,J=13.8,10.6Hz),3.17(1.2H,s),3.15(1.8H,s),2.98(1.2H,s),2.96(1.8H,s),2.62(0.6H,m),2.48(0.4H,m),1.90(1H,m),1.09-0.86(15H,m)。LRMS:+ve ion 338(M+Na),-ve ion 314(M-H)。
实施例262R(或S)-[(甲酰基-羟基氨基)-甲基]-3-苯基-丙酰基丙酸-(1S-二甲基氨基甲酰基-2,2-二甲基-丙基)-酰胺
非对映异构体A无色玻璃。1H-NMR；δ(CDCl3，旋转异构体)，9.33(0.3H,brs),8.95(0.7H,brs),8.43(0.3H,brs),7.83(0.7H,brs),7.27-7.10(5H,m),6.65(0.3H,brs),6.45(0.7H,brd,J=8.2Hz),4.80-4.70(1H,m),4.22-4.10(0.3H,m),3.89(0.7H,dd,J=13.7,9.6Hz),3.63-3.47(1H,m),3.20-2.69(3H,m),3.04(3H,brs),2.86(3H,brs),和0.87(9H,brs).13C-NMR；δ(CDCl3,旋转异构体),137.9,137.7,128.8,128.5,126.6,54.9,54.5,51.3,48.3,47.3,46.6,38.3,38.2,36.2,36.1,35.8,35.7,35.6,35.5和26.4。LRMS:+ve ion 386(M+Na),-ve ion 362(M-H)。
实施例272R(或S)-[(甲酰基-羟基氨基)-甲基]-3-(4-甲氧基苯基)-丙酸-(1S-二甲基氨基甲酰基-2,2-二甲基-丙基)-酰胺 非对映异构体A:LRMS:+ve ion 416(M+Na),394(M+H),-ve ion 392(M-H)。
实施例28到31的化合物通过实施例13的方法Ⅱ的类似方法制备。用合适的氨基酸酰胺或苄基酯代替步骤E中的叔-亮氨酸N,N-二甲基酰胺。
实施例282S-{2R-[甲酰基-羟基氨基)-甲基]-己酰基氨基}-3-苯基丙酸
白色泡沫。1H-NMR；δ(CD3OD，旋转异构体)，8.11(0.35H,s),7.80(0.65H,s),7.31-7.16(5H,m),4.68(1H,dd,J=8.7,5.5Hz),3.58(1H,m),3.39(1H,m),3.19(1H,m),2.98(1H,m),2.76(1H,m),1.55-1.26(6H,m)和0.90-0.85(3H,m).13C-NMR；δ(CD3OD,旋转异构体),176.1,175.7,174.7,174.5,138.6,138.5,130.3,129.5,129.4,127.7,55.0,53.3,49.8,45.4,38.4,38.3,31.0,30.8,30.1,23.7和14.2.IR(反射片)Vmax2932,2359,1727,1660,1551,1454,1381,1221,882,701cm-1。LRMS:+ve ion 359[M+Na],-ve ion 335(M-H)。
实施例292S-{2R-[甲酰基-羟基氨基)-甲基]-己酰基氨基}-3,3-二甲基丁酸 白色泡沫。1H-NMR；δ(CD3OD,旋转异构体),8.25(0.3H,s),7.82(0.7H,s),4.31(1H,s),3.83-3.29(2H,m),3.10-2.89(1H，m)，1.54-1.33(6H,m),1.03(3H,s),1.01(6H,s)和0.92-0.87(3H,m).13C-NMR；δ(CD3OD，旋转异构体)，174.9,172.9,61.0,52.4,44.2,44.0,33.6,30.1,29.1,26.2,22.6和13.1.IR(反射片)Vmax2959,2359,1644,1537,1371,1218,881和704cm-1。LRMS:+ve ion325(M+Na),-ve ion 301(M-H)。
实施例302S-[2R-(甲酰基-羟基氨基)-甲基]-己酸{1-[(2S-羟甲基-吡咯烷-1-氨基甲酰基]-2,2-二甲基-丙基}-酰胺
无色油状物。1H-NMR；δ(CD3OD，旋转异构体)，8.26(0.4H,s),7.84(0.6H,s),4.62(0.4H,d,J=8.2Hz),4.39(0.6H,d,J=8.4Hz),4.12(1H,m),3.91-3.37(6H,brm),2.93(0.6H,m),2.78(0.4H,m),1.93(5H,m),1.45(2H,m),1.39(3H,m),0.97(3H,brs),0.95(3H,brs),和0.89(3H,t,J=6.7Hz).13C-NMR；δ(CDCl3,旋转异构体),174.8,172.9,65.3,65.1,59.6,59.5,55.9,55.7,51.9,47.8,44.7,44.0,31.5,30.5,29.3,28.7,28.1,27.3,23.8,22.0,21.2,18.7,18.3,17.6,14.7和13.3。LRMS:+ve ion 394(M+Na),372(M+H),-ve ion 370(M-H)。
实施例312S-[2R-(甲酰基-羟基氨基)-甲基]-己酸{1-[(2-羟基乙基)甲基-氨基甲酰基]-2,2-二甲基-丙基}-酰胺 白色泡沫。1H-NMR；δ(CD3OD，旋转异构体)，8.25(0.25H,s),8.03(0.125H,s),7.82(0.625H,s),4.88(1H,m),3.83-3.54(4H,brm),3.41(2H,m),3.25(2H,s),2.96(2H,s和m),1.49(2H,m),1.23(4H,m),1.00(6H,s),0.99(3H,s),和0.88(3H,m).13C-NMR；δ(CD3OD，旋转异构体)，173.6,164.4,61.1,61.0,56.9,56.5,54.2,53.9,52.2,41.8,38.9,36.9,36.3,35.3,31.6,30.8,27.5,24.1和14.7。LRMS:+ve ion 382[M+Na],-ve ion 358[M-H]。
实施例32至59的化合物是按照实施例7，方法Ⅱ的类似方法制备的，用合适的胺或氨基酸酰胺/苄基酯来代替步骤E中的叔-亮氨酸N,N-二甲基酰胺。在一些例子的步骤E中使用了HOAt，氢解去保护(步骤G)在催化转移条件下(环己烯，乙醇中的钯炭)进行。
实施例322R-[(甲酰基-羟基氨基)-甲基]-己酸-(1R-二甲基氨基甲酰基-2,2-二甲基-丙基)-酰胺 无色油状物。LRMS:+ve ion 330[M+H],-ve ion 328[M-H]。
实施例332R-[(甲酰基-羟基氨基)-甲基]-己酸(1S-二甲基氨基甲酰基-2S-甲基-丁基)-酰胺 白色泡沫。LRMS:+ve ion 352[M+Na],-ve ion 328[M-H]。
实施例342R-[(甲酰基-羟基氨基)-甲基]-己酸(1S-二甲基氨基甲酰基-2-甲氧基-2-甲基-丙基)-酰胺 由外消旋的β-羟甲基缬氨酸制备。非对映异构体A无色油状物。LRMS:+veion 368[M+Na],346[M+H],-ve ion 344[M-H]。非对映异构体B。LRMS:+ve ion368[M+Na],346[M+H],-ve ion 344[M-H]。
实施例352R-[(甲酰基-羟基氨基)-甲基]-己酸(1S-二甲基氨基甲酰基-2-羟基-2-甲基-丙基)-酰胺 无色油状物。LRMS:+ve ion 354[M+Na],-ve ion 330[M-H]。
实施例362R-[(甲酰基-羟基氨基)-甲基]-己酸[2-(4-氯苯基)-1S-二甲基-氨基甲酰基-乙基]-酰胺 无色油状物。LRMS:+ve ion 330(M+H),-ve ion 328(M-H)。
实施例372R-[(甲酰基-羟基氨基)-甲基]-己酸[1S-二甲基氨基甲酰基-2-(4-羟基苯基)-乙基]-酰胺 无色油状物。LRMS:+ve ion 402(M+Na),380(M+H)。
实施例382R-[(甲酰基-羟基氨基)-甲基]-己酸(1S-二甲基氨基甲酰基-2-萘-2-基-乙基)-酰胺 无色油状物。LRMS:+ve ion 414(M+H),-ve ion 412(M-H)。
实施例392R-[(甲酰基-羟基氨基)-甲基]-己酸(2-环己基-1S-二甲基-氨基甲酰基-乙基)-酰胺 白色泡沫。LRMS:+ve ion 392(M+Na),370(M+H)。
实施例402R-[(甲酰基-羟基氨基)-甲基]-己酸(1S-二甲基氨基甲酰基-苯基-甲基)-酰胺 无色油状物。LRMS:+ve ion 350(M+H),-ve ion 348(M-H)。
实施例412-{2R-[(甲酰基-羟基氨基)-甲基]-己酰基}-1,2,3,4-四氢-异喹啉-3S-羧酸二甲基酰胺 LRMS:+ve ion 398(M+Na),376(M+H),-ve ion 374(M-H)。实施例42
2R-[(甲酰基-羟基氨基)-甲基]-己酸(4-氨基-1S-二甲基氨基甲酰基-丁基)-酰胺 无色油状物。LRMS:+ve ion 345(M+H),-ve ion 343(M-H)。
实施例432R-[(甲酰基-羟基氨基)-甲基]-己酸(1S-二甲基氨基甲酰基-2-羟基-乙基)-酰胺 无色油状物。LRMS:+ve ion 326(M+Na),-ve ion 302(M-H)。
实施例44N-羟基-N-[2R-(4-甲基-哌嗪-1-羰基)-己基]-甲酰胺 LRMS:+ve ion 272[M+H]。实施例45N-羟基-N-[2R-(吗啉-4-羰基)-己基]-甲酰胺 LRMS:+ve ion 281(M+Na),259(M+H),-ve ion 257(M-H)。实施例46N-羟基-N-[2R-(2S-羟甲基-吡咯烷-1-羰基)-己基]-甲酰胺 LRMS:-ve ion 271(M-H)。实施例472R-[(甲酰基-羟基氨基)-甲基]-己酸(1S-羟甲基-2,2-二甲基-丙基)-酰胺 LRMS:+ve ion 289(M+H),-ve ion 287(M-H)。实施例482R-[(甲酰基-羟基氨基)-甲基]-己酸(1S-甲氧基甲基-2,2-二甲基-丙基)-酰胺 LRMS:+ve ion 303(M+H),-ve ion 301(M-H)。
实施例492R-[(甲酰基-羟基氨基)-甲基]-己酸[1S-(4-苄基-哌啶-1-羰基)-2,2-二甲基-丙基]-酰胺 LRMS:-ve ion 458(M-H)。
实施例502R-[(甲酰基-羟基氨基)-甲基]-己酸[1S-(苄基-苯乙基-氨基甲酰基)-2,2-二甲基-丙基]-酰胺 LRMS:+ve ion 496(M+H),-ve ion 494(M-H)。实施例51
2S-[(甲酰基-羟基氨基)-甲基]-己酸[2,2-二甲基-1S-(吡咯烷-1-羰基)-丙基]-酰胺 LRMS:+ve ion 356(M+H),-ve ion 354(M-H)。
实施例522R-[(甲酰基-羟基氨基)-甲基]-己酸[2,2-二甲基-1S-(吗啉-4-羰基)-丙基]-酰胺 LRMS:+ve ion 372(M+H),-ve ion 370(M-H)。
实施例532R-[(甲酰基-羟基氨基)-甲基]-己酸[2,2-二甲基-1S-(4-甲基-哌嗪-1-羰基)-丙基]-酰胺 LRMS:+ve ion 385(M+H),-ve ion 383(M-H)。
实施例542R-[(甲酰基-羟基氨基)-甲基]-己酸[2,2-二甲基-1S-(4-甲基-哌啶-1-羰基)-丙基]-酰胺 LRMS:+ve ion 384(M+H),-ve ion 382(M-H)。
实施例552R-[(甲酰基-羟基氨基)-甲基]-己酸(1S-环己基氨基甲酰基-2,2-二甲基-丙基)-酰胺 LRMS:+ve ion 398(M+H),-ve ion 396(M-H)。
实施例562R-[(甲酰基-羟基氨基)-甲基]-己酸[1S-(4-乙酰基-哌啶-1-羰基)-2,2-二甲基-丙基]-酰胺 LRMS:+ve ion 412(M+H),-ve ion 410(M-H)。实施例571-(2S-{2R-[(甲酰基-羟基氨基)-甲基]-己酰氨基}-3,3-二甲基-丁酰)-哌啶-4-羧酸甲酯 LRMS:+ve ion 442(M+H),-ve ion 440(M-H)。
实施例582R-[(甲酰基-羟基氨基)-甲基]-己酸[2,2-二甲基-1S-(八氢-喹啉-1-羰基)-丙基]-酰胺 LRMS:+ve ion 424(M+H),-ve ion 422(M-H)。
实施例592R-[(甲酰基-羟基氨基)-甲基]-己酸[1S-(3,4-二氢-2H-喹啉-1-羰基)-2,2-二甲基-丙基]-酰胺 LRMS:-ve ion 416(M-H)。
实施例602S-{3-乙基硫甲基-2R-[(甲酰基-羟基氨基)-甲基]丙酰胺}-3,3,N,N-四甲基丁酰胺 标题化合物的合成途径在流程4中略述,在下文详述。
流程4 试剂和反应条件A.3-锂-4-苄基-噁唑烷-2-酮，THF,-78℃；B。LiN(SiMe3)2,THF,-78℃，然后AcCl；C.HCl.H2NOBzl,NaOAc,aq乙醇；D.NaCNBH3,AcOH,室温；E.HCOBt,THF；F.LiOH,aq THF,0℃；G.H-Tle-NMe2,HOAt,EDC,DMF；H.H2,Pd/C,MeOH然后分离非对映异构体(HPLC)。
步骤A:2-乙基硫甲基-丙烯酸将丙二酸(5.2g,50mmol),多聚甲醛(3.3g,110mmol),二环己基胺，9.95ml,50mmol)和乙硫醇(4.06ml,55mmol，溶于二氧噁烷(120ml))的混合物在70℃加热2小时。减压除去溶剂，剩余物重新溶于乙酸乙酯，溶液用饱和碳酸氢钠水溶液(4×20ml)提取。混合的水层用乙酸乙酯(20ml)洗涤，然后用1M盐酸酸化。得到的悬浮液抽提入二氯甲烷，溶液用无水硫酸镁干燥，过滤并蒸发，以得到白色固体状的标题化合物(3.76g,52％)。1H-NMR；δ(CDCl3),9.89(1H,brs),6.35(1H,s),5.77(1H,s),3.39(2H,s),2.49(2H,dd,J=7.4,14.5Hz)和1.25(3H,t,J=5.2Hz)。
步骤B:4S-苄基-3-(2-乙基硫甲基-丙烯酰基)-5,5-二甲基-噁唑烷-2-酮将2-乙基硫甲基-丙烯酸(3.76g,25.8mmol)溶于干THF(75ml)，并在一层氩气下冷至-78℃。将三乙胺(4.6ml,33.5mmol)和三甲基乙酰氯(3.17ml,25.8mmol)以使温度保持在-60℃以下的速率加入。混合物在-78℃搅拌30分钟，温至室温，搅拌2小时，最后冷回-78℃。
在另一烧瓶中，将4S-苄基-5,5-二甲基-噁唑烷-2-酮溶于干THF(75ml)并在一层氩气下冷至-78℃。缓慢加入正丁基锂(2.4M乙烷溶液12.9ml,30.9mmol)，在室温下搅拌混合物30分钟。生成的阴离子利用套管被入原来的反应容器。反应物温至室温，在室温下搅拌过夜。反应用饱和碳酸氢钠(20ml)终止，溶剂减压除去。剩余物在乙酸乙酯和水之间分配。有机层用饱和碳酸氢钠、1M盐酸和盐水依次洗涤，然后用无水硫酸镁干燥，过滤，减压浓缩。剩余物用快速色谱纯化(20％硅胶，20％乙酸乙酯(溶于正己烷))，得到黄色油状的标题化合物(6.5g,76％)。1H-NMR；δ(CDCl3),7.29(5H,m),5.58(1H,s),5.49(1H,s),4.54(1H,dd,J=3.9,9.7Hz),3.52(2H,dd,J=15.8,3.1Hz),3.38(1H,dd,J=3.9,14.5Hz),2.84(1H,dd,J=4.6,14.3Hz),2.52(2H,dd,J=7.2,14.6Hz),1.42(3H,s),1.29(3H,s)和1.22(3H,t,J=7.5Hz),LRMS:+ve ion356(M+Na),334(M+H)。
步骤C:4S-苄基-3-[2R-叔-丁氧基氨基-甲基)-3-乙基硫甲基-丙酰基]-5,5-二甲基-噁唑烷-2-酮将4S-苄基-3-(2-乙基硫甲基-丙烯酰基)-5,5-二甲基-噁唑烷-2-酮(2.1g,6.3mmol)溶于乙醇(10ml)，加入O-叔-丁基-羟胺盐酸盐(0.95g,7.56mmol)，三乙胺(1.1ml,7.87mmol)。混合物在30℃搅拌过夜。减压除去溶剂，然后将剩余物溶于乙酸乙酯。有机溶液用1M盐酸，饱和碳酸氢钠和盐水依次洗涤，用无水硫酸镁干燥，然后过滤。将滤液减压浓缩，得到淡黄色的油状标题化合物(2.429,91％；用HPLC得到的单一非对映异构体)。1H-NMR；δ(CDCl3),7.30(5H,m),5.09(1H,brs),4.54(1H,dd,J=3.5,9.9Hz),4.33(1H,m),3.19(2H,m),3.08(1H,dd,J=5.4,11.8Hz),2.80(3H,m),2.56(2H,dd,J=7.4,14.7Hz),1.41(3H,s),1.36(3H,s),1.23(3H,t,J=7.3Hz)和1.13(9H,s),LRMS:+ve ion423(M+H)。
步骤D:2R-叔-丁氧基氨基-甲基)-3-乙基硫甲基-丙酸将4S-苄基-3-[2R-叔-丁氧基氨基-甲基)-3-乙基硫甲基-丙酰基]-5,5-二甲基-噁唑烷-2-酮(2.42g,5.72mmol)溶于THF(40ml)的溶液冷至0℃，加入氢氧化锂(288mg,6.86mmol)溶于水(10ml)的溶液。混合物温至室温，搅拌5小时。减压除去溶剂，剩余物在水和乙酸乙酯之间分配。除去水层，将乙酸乙酯层用水，饱和碳酸氢钠依次洗涤。合并的水层用乙酸乙酯(20ml)洗涤，然后用1M盐酸酸化。得到的乳状液用二氯甲烷(3×20ml)抽提，然后将合并的有机层用无水硫酸镁干燥，过滤，蒸发，得到无色油状的标题化合物(0.68g,50％)。1H-NMR；δ(CDCl3),8.03(2H,brs),3.21(2H,d,J=6.1Hz),2.89(2H,m),2.75(1H,m),2.57(2H,dd,J=7.4,14.8Hz),1.26(3H,t,J=7.4Hz)和1.18(9H,s)。LRMS:+ve ion 236[M+H],-ve ion 234M-H]。
步骤E:2S-[2R-(叔-丁氧基-氨基-甲基)-3-乙基硫甲基-丙酰基氨基}-3,3,N,N-四甲基丁酰胺溶液将2R-叔-丁氧基氨基-甲基)-3-乙基硫甲基-丙酸(340mg,1.44mol)溶于DMF(10ml),加入叔-亮氨酸-N,N-二甲基酰胺(272mg,1.73mmol),HOAt(19.6mg,0.14mmol)和EDC(331mg,1.73mmol)。反应在室温下搅拌过夜。减压除去溶剂，剩余物溶于二氯甲烷。有机层用1M盐酸、1M碳酸钠和盐水依次洗涤，用无水硫酸镁干燥，然后过滤。滤液减压浓缩，得到无色油状的标题化合物(440mg,82％)。1H-NMR；δ(CDCl3),6.87(1H,d,J=9.0Hz),5.11(1H,brs),4.93(1H,d,J=9.3Hz),3.15(3H,s),3.11(1H,m),2.95(3H,s),2.79(3H,m),2.54(3H,s),1.22(3H,t,J=7.6Hz),1.18(9H,s)和1.01(9H,s)。LRMS:+ve ion 398[M+Na],376[M+1]。
步骤F:2S-{2R-[(叔-丁氧基-甲酰基氨基)-甲基]-3-乙基硫甲基-丙酰基氨基}-3,3,N,N-四甲基丁酰胺将2S-[2R-(叔-丁氧基-氨基-甲基)-3-乙基硫甲基-丙酰基氨基}-3,3,N,N-四甲基丁酰胺(220mg,0.58mmol)溶于二氯甲烷(5ml)的溶液冷至0℃,用甲酸醋酸酐(0.1ml)处理。反应在室温下搅拌4小时，然后减压蒸发去溶剂。剩余物用快速色谱(硅胶，洗脱用50％溶于正己烷中的乙酸乙酯)纯化，以得到无色油状的标题化合物(120mg,52％)。1H-NMR；δ(CDCl3，旋转异构体)，8.31(1H,brs),6.56(1H,d,J=9.1Hz),4.94(0.33H,d,J=9.4Hz),4.88(0.67H,d,J=9.2Hz),4.08(0.67H,brm),3.83(1.34H,brm),3.13(3H,s),2.95(3H,s),2.80(2H,m),2.61(1H,dd,J=6.8,14.0Hz),2.49(2H,dd,J=7.4,14.7Hz),1.29(9H,s),1.25(3H,t,J=7.2Hz)和0.99(9H,s)。LRMS:+ve ion 426[M+Na],404[M+H]。
步骤G:2S-{3-乙基硫甲基-2R-[(甲酰基-羟基氨基)-甲基]丙酰基氨基}-3,3,N,N-四甲基丁酰胺将2S-{2R-[(叔丁氧基甲酰基氨基)-甲基]-3-乙基硫甲基-丙酰基氨基}-3,3,N,N-四甲基丁酰胺(120mg,0.3mmol)溶于氘代氯仿(1ml)的溶液用TFA(4ml)处理，4℃放置过夜。减压除去溶剂，剩余TFA用甲苯共沸除去。剩余物用制备好的HPLC纯化，得到无色油状的标题化合物(40mg,38％；由HPLC得到的7∶2的非对映异构体的混合物)。1H-NMR；δ(CDCl3，旋转异构体),8.40(0.33H,s),7.87(0.67H,s),7.24(0.33H,d,J=9.3Hz),6.98(0.67H,d,J=9.3Hz),4.91(0.67H,d,J=9.3Hz),4.90(0.33H,d,J=9.3Hz),4.07(0.33H,dd,J=7.5,14.5Hz),3.86(0.67H,dd,J=8.8,14.2Hz),3.75(0.67H,m),3.68(0.33H,m),3.16(1H,s),3.15(2H,s),3.05(1H,m),2.96(3H,s),2.77(1H,m),2.66(1H,m),2.52(2H,dd,J=7.4,14.8Hz),1.22(3H,t,J=7.3Hz),0.99(3H,s)和0.96(6H,s).13C-NMR；δ(CDCl3，旋转异构体)，173.3,171.6,171.2,55.2,54.8,51.1,48.5,45.2,44.4,38.5,38.4,35.9,35.8,35.7,31.7,31.4,26.7,26.6,26.5和14.6。LRMS:+ve ion 370[M+Na],348[M+H],-ve ion 346[M-H]。
实施例61的化合物相似制备，用哌啶代替步骤A中的乙硫醇。
实施例612-{2-[(甲酰基-羟基氨基)-甲基]-3-哌啶-1-基-丙酰基氨基}-3,3,N,N-四甲基-丁酰胺 白色固体(由HPLC得到的非对映异构体的4∶1的混合物)。1H-NMR；δ(CDCl3，旋转异构体)，8.29(1H,s),7.95(1H,brs),4.87(1H,d,J=9.1Hz),4.02(1H,dd,J=5.0,14.6Hz),3.56(1H,dd,J=8.2,14.6Hz),3.14(3H,s),2.96(3H,s),2.89(1H,m),2.69(1H,m),2.52(5H,m),1.65(4H,m),1.49(2H,m)和0.99(9H,s).13C-NMR；δ(CDCl3),172.2,171.3,60.4,55.0,54.9,48.6,42.4,38.8,36.2,36.1,27.0,25.6和24.3。LRMS:+ve ion 371[M+H],-ve ion 369[M-H]。
实施例62到65的化合物用实施例7,方法Ⅱ的类似方法制备,用O-叔-丁基羟胺代替步骤B中的O-苄基羟胺,而用合适的胺或氨基酸酰胺/苄基酯来代替步骤E中的叔-亮氨酸N,N-二甲基酰胺。最终去保护用TFA通过酸解进行。(见上文实施例60)。
实施例622R-[(甲酰基-羟基氨基)-甲基]-己酸(1R-二甲基氨基甲酰基-2-甲基-2-甲基硫丙基)-酰胺 无色油状。1H-NMR；δ(CDCl3，旋转异构体)，8.4(0.5H,s),7.85(0.5H,s),7.11(0.5H,d,J=9.1Hz),6.93(0.5H,d,J=9.1Hz),5.15(1H,d,J=9.4Hz),3.90(0.5H,m),3.73(0.5H,m),3.64(0.5H,d,J=14.3Hz),3.48(0.5H,dd,J=14.0,3.9Hz),3.22(3H,s),2.97(3H,s),2.83(0.5H,m),2.70(0.5H,m),2.07(1.5H,s),2.04(1.5H,s),1.58(1H,m),1.36(4H,m),1.32(3H,s),1.28(3H,s)和0.86(3H,t,J=6.6Hz).13C-NMR；δ(CDCl3，旋转异构体)，15.4,173.5,170.8,63.6,53.2,53.1,52.5,49.5,47.5,46.1,44.9,41.6,37.5,36.5,36.4,35.4,30.2,29.8,28.0,14.3,12.0和11.9。LRMS:+ve ion 362[M+H],-ve ion360[M-H]。
实施例632R-[(甲酰基-羟基氨基)-甲基]-己酸(2-苄基硫-1R-二甲基-氨基甲酰基-2-甲基-丙基)-酰胺 白色泡沫。1H-NMR；δ(CDCl3，旋转异构体)，8.37(0.33H,s),7.81(0.66H,s),7.31(5H,m),7.06(0.33H,d,J=8.8Hz),6.89(0.66H,d,J=9.3Hz),5.20(1H,d,J=9.3Hz),3.94(0.33H,dd,J=8.3,14.6Hz),3.78(2.66H,m),3.61(0.33H,dd,J=3.5,14.4Hz),3.42(0.66H,dd,J=5.1,14.9Hz),3.21(3H,s),3.03(3H,s),2.82(0.66H,m),2.69(0.33H,m),1.61(1H,m),1.42(1H,m),1.37(3H,s),1.32(3H,s),1.26(4H,m)和0.86(3H,t,J=6.6Hz).13C-NMR；δ(CDCl3，旋转异构体)，175.3,173.5,171.0,138.1,137.4,129.5,129.3,129.1,129.0,128.9,127.6,127.4,55.9,53.7,52.5,51.2,49.6,49.5,46.1,44.9,39.0,38.6,36.6,36.4,33.9,33.7,30.3,30.1,29.7,26.7,26.1,25.7,25.5,24.2,22.9和14.3。LRMS:+ve ion 460[M+Na],438[M+H],-ve ion 436[M-H]。
实施例642R-[(甲酰基-羟基氨基)-甲基]-己酸[2-苄基硫-2-甲基-1R-(吗啉-4-羰基)-丙基]-酰胺 白色泡沫。1H-NMR；δ(CDCl3，旋转异构体)，8.44(0.5H,s),8.37(0.5H,s),7.30(5H,m),6.88(0.5H,d,J=8.3Hz),6.78(0.5H,d,J=9.2Hz),5.12(1H,d,J=9.5Hz),3.91(1H,dd,J=8.2,14.6Hz),3.78(10H,m),3.45(1H,dd,J=4.5,14.2Hz),2.80(0.5H,m),2.64(0.5H,m),1.61(1H,m),1.41(1H,m),1.36(3H,s),1.33(3H,s),1.29(4H,m)和0.87(3H,t,J=6.8Hz).13C-NMR；δ(CDCl3，旋转异构体)，175.5,173.4,169.4,137.8,129.5,129.3,129.1,129.0,127.8,127.5,67.1,67.0,53.3,53.2,51.99,49.6,49.5,49.2,47.9,46.5,45.0,43.2,43.0,34.0,30.3,30.2,29.7,26.8,26.5,25.9,25.8,22.9和14.3。LRMS:+ve ion502[M+Na],480[M+H],-ve ion 478[M-H]。
实施例652-[(甲酰基-羟基氨基)-甲基]-己酸[2-苄基硫-2-甲基-1R(或S)-(4-甲基-哌啶-1-羰基)-丙基]-酰胺 非对映异构体A白色固体。LRMS:+ve ion 514[M+Na],492[M+H],-ve ion490[M-H]。
非对映异构体B无色胶。LRMS:+ve ion 514[M+Na],492[M+H],-ve ion490[M-H]。
实施例66到68是用实施例7，方法Ⅱ的类似方法制备的，用合适的丙二酸代替步骤A中的丁基丙二酸，用O-叔-丁基羟胺代替步骤C中的O-苄基羟胺。Michael加成反应中的立体选择性是可变的。最终的去保护用TFA酸解进行(见上文实施例60)。
实施例662R-[(甲酰基-羟基氨基)-甲基]-戊-4-烯酸(1S-二甲基氨基甲酰基-2,2-二甲基-丙基)-酰胺 单一非对映异构体1H-NMR；δ(CDCl3，旋转异构体)，8.40(0.25H,s),7.84(0.75H,s),7.05(0.35H,d,J=9.0Hz),6.74(0.65H,d,J=9.3Hz),5.70(1H,m),5.03-5.24(2H,m),4.88(1H,dd,J=9.4,6.7Hz),3.98(0.5H,m),3.81(0.5H,m),3.55(1H,m),3.14(3H,s),2.97(1.3H,s),2.96(1.7H,s),2.75-2.92(1H,m),2.16-2.50(2H,m),0.98(4.5H,s)和0.94(4.5H,s)。LRMS:+ve ion 336[M+Na],-ve ion 312[M-H]。
实施例672R-[(甲酰基-羟基氨基)-甲基]-己-5-烯酸(1S-二甲基氨基甲酰基-2,2-二甲基-丙基)-酰胺 非对映异构体A无色油状。1H-NMR；δ(CDCl3，旋转异构体)，8.42(0.45H,s),7.84(0.55H,s),6.78(0.45H,d,J=8.4Hz),6.60(0.55H,d,J=9.3Hz),5.74(1H,m),5.03(2H,m),4.88(1H,m),4.14(0.4H,m),3.81(0.6H,m),3.55(1H,m),3.16(1H,s),3.15(2H,s),2.98(1H,s),2.97(2H,s),2.85(0.7H,m),2.68(0.3H,m),2.07(2H,m),1.73(1.6H,m),1.50(0.4H,m),0.99(4H,s)和0.95(5H,s)。LRMS:+ve ion 350[M+Na],-ve ion 326[M-H]。
非对映异构体B无色油状。1H-NMR；δ(CDCl3，旋转异构体)，8.41(0.5H,s),7.75(0.5H,s),6.58(0.5H,d,J=9.1Hz),6.36(0.5H,d,J=9.1Hz),5.75(1H,m),5.01(2H,m),4.86(0.5H,d,J=9.5Hz),4.64(0.5H,d,J=7.5Hz),3.42-3.82(2H,m),3.22(1.5H,s),3.07(1.5H,s),2.99(3H,s),2.87(0.5H,m),2.66(0.5H,m),2.13(2H,m),1.81(1H,m),1.49(1H,m),1.02(4.5H,s)和1.00(4.5H,s)。LRMS:+ve ion 350[M+Na],-ve ion 326[M-H]。
实施例682R-[(甲酰基-羟基氨基)-甲基]-己-4-炔酸(1S-二甲基氨基甲酰基-2,2-二甲基-丙基)-酰胺
非对映异构体A无色油状。1H-NMR；δ(CDCl3，旋转异构体)，8.39(0.4H,s),7.87(0.6H,s),7.20(0.4H,d,J=8.4Hz),6.94(0.6H,d,J=9.3Hz),4.90(1H,m),3.66-4.14(2H,m),3.16(2H,s),3.14(2H,s),2.96(3H,s),2.88(1H,m),2.41(2H,m),1.77(3H,m),1.00(3.5H,s)和0.96(5.5H,s)。LRMS:+ve ion 348[M+Na],-ve ion 324[M-H]。
非对映异构体B无色油状。1H-NMR；δ(CDCl3，旋转异构体)，8.37(0.5H,s),7.81(0.5H,s),6.87(1H,m),4.91(0.5H,d,J=9.4Hz),4.79(0.5H,d,J=8.2Hz),3.76(1.5H,m),3.63(0.5H,m),3.19(1.5H,s),3.14(1.5H,s),2.98(3H,s),2.85(1H,s),2.41(2H,m),1.77(3H,m),1.03(4.5H,s)和1.01(4.5H,s)。LRMS:+ve ion 348[M+Na],-ve ion 324[M-H]。
实施例692R-[1R(或S)-(甲酰基-羟基氨基)-乙基]-己酸(1S-二甲基氨基甲酰基-2,2-二甲基.丙基)-酰胺 标题化合物按照流程5中略述的途径制备,在下文详述。
流程5 试剂和反应条件A.(CHO)n,EtSH，二环己基胺，二噁烷，70℃,2h；B.tBuCOCl,Et3N，然后3-锂-4-苄基-5,5-二甲基-噁唑烷-2-酮；C.HCl,H2NotBu,Et3N,o/n；D.LiOH,aq THF,0℃；E.H-叔-LeuNMe2,HOAt,EDC,DMF；F.HCOAc,CH2Cl2；G.TFA,CDCl3.
步骤A:4-苄基-3-己酰基-噁唑烷-2-酮将4S-苄基-噁唑烷-2-酮(14.5g,81.7mmol)在一层氩气下溶于干THF(75ml)。溶液在冰浴中冷却，然后缓慢加入正丁基锂(1.6M溶于乙烷，56ml，89.2mmol)。锂盐从溶液中以固块的形式结晶出来，温至室温过夜。生成的桔红色悬浮液在冰浴中，加入己酰氯(10.4ml,74.3mmol)(溶于干THF(50ml))的冷溶液。混合物温至室温，然后搅拌3小时。反应用1M碳酸钠溶液(5ml)终止，减压除去溶剂。剩余物在1M碳酸钠(100ml)和乙酸乙酯(150ml)间分配。除去有机层，将水层用更多的乙酸乙酯抽提。合并的有机层用水、1M碳酸钠和盐水依次洗涤，用无水硫酸镁干燥，过滤。浓缩滤液得到桔红色油状物。用快速色谱纯化后得到黄色油状的标题化合物(10.21g,50％)。1H-NMR；δ(CDCl3),7.38-7.24(3H,m),7.24-7.16(2H,m),4.68(1H,m),4.24-4.12(2H,m),3.30(1H,dd,J=13.4,3.2Hz),3.02-2.86(2H,m),2.77(1H,dd,J=13.4,9.6Hz),1.77-1.63(2H,m),1.44-1.30(4H,m)和0.92(3H,brt,J=6.9Hz)。
步骤B:1-(4S-苄基-2-氧-噁唑烷-3-基)-2R-丁基-1,3-丁二酮将4-苄基-3-己酰-噁唑烷-2-酮(10.2g,37.1mmol)在一层氩气下溶于THF(150ml),并冷至-78℃。以几分钟的时间通过套管加入六甲基二硅氮烷锂(1M溶于THF,41ml,41mmol)，然后将所得绿色的溶液在-78℃搅拌2小时。缓慢加入乙酰氯(3.3ml，46.3mmol)，搅拌反应混合物3.5小时。将柠檬酸(3.0g,14mmol)溶于水(15ml)的溶液快速加入以终止反应。减压除去溶剂，剩余物在乙酸乙酯和水之间分配，用盐水洗涤，用无水硫酸镁干燥，并过滤。浓缩滤液得到黄色油状的标题化合物(12.11g，含有剩余溶剂)在步骤C中不经进一步纯化使用。1H-NMR；δ(CDCl3),7.37-7.21(5H,m),4.68(1H,m),4.53(1H,dd,J=9.6,3.7Hz),4.23-4.13(2H,m),3.43(1H,dd,J=13.5,3.3Hz),2.75(1H,dd,J=13.5,9.9Hz),2.33(3H,s),2.03(1H,m),1.77(1H,m),1.46-1.26(4H,m)和0.98-0.86(3H,m)。
步骤C:1-(4S-苄基-2-氧-噁唑烷-3-基)-2R-丁基-1,3-丁二酮3-(O-苄基-肟)在1-(4S-苄基-2-氧-噁唑烷-3-基)-2R-丁基-1,3-丁二酮(12.11g,38.15mmol)溶于水(10ml)和乙醇(90ml)的溶液中加入醋酸钠(3.75g,45.78mmol)和O-苄基羟胺盐酸盐(7.31g,45.78mmol)。形成的悬浮液在室温下搅拌过夜。产物(7.3g,45％，单肟异构体)直接从反应中结晶，过滤，用含水乙醇(1∶1)洗涤，真空干燥。另-批物质(5.31g,33％，肟异构体的混合物)从母液中通过酸碱抽提以黄色油状物的形式获得，然后柱层析。1H-NMR；δ(CDCl3，主肟异构体)，7.34-7.20(8H,m),7.12-7.07(2H,m),5.14-5.02(2H,m),4.53(1H,m),4.13(1H,dd,J=9.4,4.0Hz),4.04(1H,brt,J=8.4Hz),3.91(1H,dd,J=9.0,2.7Hz),3.16(1H,dd,J=13.4,2.9Hz),2.09(3H,s),1.97(1H,m),1.75(1H,dd,J=13.4,10.8Hz),1.67(1H,m),1.45-1.22(4H,m)和0.91(3H,brt,J=6.9Hz)。
步骤D:4S-苄基-3-[2R-(1R(或S)-苄氧基氨基-乙基)-己酰基]-噁唑烷-2-酮将由步骤C(5.31g,12.5mmol)的到的肟混合物溶于乙酸(30ml)，并在冰水浴中冷却，然后一次加入氰基氢硼化钠(0.8g,12.5mmol)。几分钟后，冒泡平息，再加入另一部分硼氢化钠(0.8g)。反应温至室温，搅拌过夜。减压除去乙酸，剩余物用甲苯共沸。将结果的油状物溶于乙酸乙酯，用水，1M碳酸钠和盐水洗涤，用无水硫酸镁干燥，并过滤。将滤液蒸发得到一淡黄色油状物，将其用快速色谱(硅胶，洗脱用溶于正己烷的10％-25％的乙酸乙酯)纯化。产量3.43g,64％)。1H-NMR；δ(CDCl3，α-非对映异构体的混合物)，7.36-7.17(10H,m),5.80(0.45H,brs),5.55(0.55H,brd,J=8.9Hz),4.72-4.59(3H,m),4.20-4.05(2H,m),3.97(0.45H,m),3.82(0.55H,m),3.47-3.22(2H,m),2.45(1H,m),1.90-1.48(2H,m),1.40-1.14(7H,m)和0.95-0.84(3H,m)。
步骤E:N-[2R-(4S-苄基-2-氧-噁唑烷-3-羰基)-1R(或S)-甲基-己基]-N-苄氧基-甲酰胺将4S-苄基-3-[2R-(1R(或S)-苄氧基氨基-乙基)-己酰基]-噁唑烷-2-酮(3.08g,7.3mmol)溶于干THF，并用N-甲酰基苯并三唑(1.60g,10.9mmol)处理，反应物在室温搅拌4小时。减压除去溶剂，剩余的油状物用二氯甲烷(40ml)和1M氢氧化钠(30ml)分离。除去有机层，用额外的氢氧化钠，然后盐水洗涤，用无水硫酸镁干燥，过滤并蒸发。用快速色谱(硅胶，20％到50％的溶于正己烷的乙酸乙酯)纯化，得到淡黄色固体状的标题化合物(2.50g,76％。1H-NMR；δ(CDCl3,α-非对映异构体和旋转异构体的混合物),8.22(1H,brm),7.54-7.13(10H,m),5.22-3.92(7H,brm),3.30(1H,m),2.48(1H,brm),1.85-1.13(9H,brm)和0.93-0.83(3H,m)。
步骤F:2R-[1R(或S)-(苄氧基-甲酰基氨基)-乙基]-己酸将N-[2R-(4S-苄基-2-氧-噁唑烷-3-羰基)-1R(或S)-甲基-己基]-N-苄氧基-甲酰胺(1.50g,3.31mmol)溶于THF(25ml)和水(5ml),并将溶于在冰水浴中冷却。加入过氧化氢溶液(27％w/w),13.26mmol),然后立即加入氢氧化锂(167mg,3.98mmol)。反应温至室温，然后再搅拌3小时。冷却溶液，然后加入亚硝酸钠(0.92g,13.3mmol)。10分钟后，减压除去大部分溶剂，得到一白色糊状物，将其在乙酸乙酯(25ml)和1M碳酸钠(30ml)之间分配。有机层用另外的碳酸钠洗涤，合并的水层提取物用乙酸乙酯洗涤。将水层冷却，用1M盐酸酸化，用乙酸乙酯提取两次。合并的有机层用盐水洗涤，用无水硫酸镁干燥，过滤并蒸发以得到绿色油状的标题化合物(839mg,86％)。1H-NMR；δ(CDCl3,α-非对映异构体和旋转异构体的混合物)，8.40-7.64(2H,brm),7.48-7.27(5H,m),5.23-4.80(2H,m),4.16(1H,brm),2.79(1H,m),1.67-1.47(2H,m),1.47-1.18(7H,m)和0.95-0.82(3H,m)。
步骤G:2R-[1R(或S)-(苄氧基-甲酰基氨基)-乙基]-己酸(1S-二甲基-氨基甲酰基-2,2-二甲基-丙基)-酰胺将2R-[1R(或S)-(苄氧基-甲酰基氨基)-乙基]-己酸(839mg,2.86mmol)，叔-亮氨酸N,N-二甲基酰胺(498mg,3.15mmol)和EDC(658mg,3.43mmol)一起溶于DMF(15ml)，并加入催化量的HOAt(60mg)。溶液在室温下搅拌数日。减压除去溶剂，剩余的油状物用乙酸乙酯和1M盐酸(75ml)分配。有机层用1M盐酸，1M碳酸钠和盐水依次洗涤，用无水硫酸镁干燥，过滤并蒸发，得到黄色泡沫(1.08g,82％)。1H-NMR；δ(CDCl3，α-非对映异构体和旋转异构体的混合物)，8.13(1H,brm),7.52-7.31(5H,m),6.28(1H,brm),5.36-4.67(3H,brm),4.09(1H,brm),3.14(3H,s),2.95(1.2H,s),2.93(1.8H,s),2.48(1H,brm),1.61-1.04(9H,m),0.99(3.6H,s),0.95(5.4H,s)和0.89-0.75(3H,m)。
步骤H:2R-[1R(或S)-(甲酰基-羟基氨基)-乙基]-己酸(1S-二甲基-氨基甲酰基-2,2-二甲基-丙基)-酰胺将2R-[1R(或S)-(苄氧基-甲酰基氨基)-乙基]-己酸(1S-二甲基-氨基甲酰基-2,2-二甲基-丙基)-酰胺(200mg,0.46mmol)溶于甲醇(15ml)，置于一层氩气下。加入乙酸乙酯内的含有10％钯炭(20mg)悬浮液，混合物在氢气中搅拌3小时。过滤除去催化剂，蒸发滤液得到一无色油状物(163mg,quant.)。两种非对映异构体产物可用制备性的HPLC分离。
非对映异构体A(27mg):1H-NMR；δ(CDCl3，主要为一种旋转异构体)，8.67(0.9H,brs),8.33(0.1H,brs),7.92(1H,s),6.74(0.1H,brm),6.54(0.9H,d,J=9.4Hz),4.93(0.9H,d,J=9.4Hz),4.64(0.1H,brm),3.89(1H,qd,J=6.6,2.6Hz),3.16(3H,s),2.96(3H,s),2.62-2.48(1H,m),1.52-1.06(6H,m),1.35(3H,d,J=6.6Hz),1.00(9H,s)和0.82(3H,t,J=6.9Hz).13C-NMR；δ(CDCl3),173.0,171.3,57.2,54.4,50.4,38.4,35.6,29.9,29.1,26.6,22.5,17.2和13.9。LRMS:+ve ion 366[M+Na],-ve ion 342[M-H]。
非对映异构体B(42mg):1H-NMR；δ(CDCl3，旋转异构体混合物)，9.15(0.6H,s),8.60(0.4H,brs),8.42(0.6H,s),7.84(0.4H,s),6.83(0.6H,d,J=9.2Hz),6.55(0.4H,d,J=9.4Hz),4.91(0.6H,d,J=9.2Hz),4.89(0.4H,d,J=9.4Hz),4.69(0.6H,qd,J=7.0,4.3Hz),3.92(0.4H,dq,J=9.1,6.8Hz),3.15(3H,s),2.97(1.8H,s),2.95(1.2H,s),2.59(0.4H,td,J=9.8,4.3Hz),2.39(0.6H,td,J=7.4,4.3Hz),1.92-1.07(6H,m),1.37(1.2H,d,J=6.8Hz),1.31(1.8H,d,J=7.0Hz),1.01(5.4H,s),0.96(3.6H,s),0.85(1.8H,t,J=7.2Hz)和0.83(1.2H,t,J=7.2Hz).13C-NMR；δ(CDCl3,旋转异构体混合物),175.7,173.2,171.3,170.7,56.7,55.0,54.4,53.2,50.8,49.9,38.3,35.7,35.6,35.5,35.4,30.3,29.5,29.3,26.5,26.4,22.5,22.4,16.0,15.4和13.8。LRMS:+ve ion 366[M+Na],-ve ion 342[M-H]。
实施例70N-环己基-2-{2-[(甲酰基-羟基氨基)-甲基]-3-苯基-丙酰基氨基}-3,3-二甲基-丁酰胺 将1M氨溶于甲醇(1ml,1mmol)和1M三甲基乙醛溶于甲醇(1ml,1mmol)的原料溶液在一试管中混合,放置1小时。加入1M环己基胩溶于甲醇(1ml,1mmol)的溶液，然后加入溶于甲醇(2ml,1mmol)的0.5M2RS-[(苄氧基-甲酰基氨基)-甲基]-己酸。反应混合物在室温下搅拌2天。用Savant Speedvac除去溶剂，并将反应混合物从乙酸乙酯-己烷中结晶出来，得到白色固体的2-{2-[(苄氧基-甲酰基氨基)-甲基]-3-苯基-丙酰基氨基}-N-环己基-3,3-二甲基-丁酰胺(93mg,18％)，将其用接触转移氢解(氢气，10％钯炭，甲醇-乙酸乙酯)去保护，得到标题化合物(75mg,99％)。
白色固体。LRMS:+ve ion 440[M+Na],418[M+H],-ve ion 416[M-H]。
实施例71到77的化合物用Ugi4组分缩合反应，如上所述，平行制备。所有产物用HPLC测定，以大于85％的纯度获得。
实施例71
2-{2-[(甲酰基-羟基氨基)-甲基]-3-苯基-丙酰基氨基}-3,3-二甲基-己酸环己基酰胺 白色固体(90mg)。1H-NMR；δ(CD3OD),7.82(1H,s),7.29-7.08(5H,m),4.20(1H,d,J=5.0Hz),3.89(1H,m),3.19(1H,m),2.95-2.67(2H,m),1.88-1.58(5H,brm),1.44-1.05(9H,brm)和0.89(9H,s)。LRMS:+ve ion 468[M+Na],446[M+H],-ve ion 444[M-H]。
实施例722-{2-[(甲酰基-羟基氨基)-甲基]-3-苯基-丙酰基氨基}-3,3-二甲基-己酸苄基酰胺 白色固体(77mg)。1H-NMR；δ(CD3OD),7.82(1H,s),7.35-7.11(10H,m),4.38-4.19(3H,m),3.85(1H,m),3.52(1H,m),2.97-2.63(3H,m),1.37-1.11(4H,m)和0.93-0.78(9H,m)。LRMS:+ve ion 476[M+Na],454[M+H]。
实施例732-{2-[(甲酰基-羟基氨基)-甲基]-3-苯基-丙酰基氨基}-3,3-二甲基-丁酸叔-丁基酰胺 白色固体(47mg)。1H-NMR；δ(CD3OD),7.82(1H,s),7.45(1H,m),7.30-7.09(5H,m),4.12(1H,d,J=7.2Hz),3.89(1H,m),3.41(1H,m),3.15(1H,m),2.97-2.68(2H,m),1.28(9H,s)和0.92(9H,s)。LRMS:+ve ion 414[M+Na],392[M+H],-ve ion 390[M-H]。
实施例742-{2-[(甲酰基-羟基氨基)-甲基]-3-苯基-丙酰基氨基}-3,3-二甲基-己酸(1,1,3,3-四甲基)-丁酰胺 白色固体(65mg)。1H-NMR；δ(CD3OD),7.79(1H,s),7.42-7.21(1H,m),7.20-7.10(5H,m),4.23(1H,d,J=9.1Hz),3.86(1H,m),3.51(1H,m),3.23(1H,m),3.00-2.56(2H,m),1.50-1.15(12H,m)和1.02-0.83(18H,m)。LRMS:+ve ion498[M+Na],476[M+H,-ve ion 474[M-H]。
实施例75N-(环己基-环己基氨基甲酰基-甲基)-2-[(甲酰基-羟基氨基)-甲基]-3-苯基-丙酰胺 白色固体(98mg)。1H-NMR；δ(CD3OD),7.38-7.08(5H,m),4.01(1H,m),3.81(1H,m),3.68-3.35(2H,m),3.15(1H,m),2.98-2.65(2H,m),1.88-1.49(10H,brm)和1.45-0.83(11H,brm)。LRMS:+ve ion 466[M+Na],444[M+H],-ve ion 442[M-H]。
实施例76N-(环己基-苄基氨基甲酰基-甲基)-2-[(甲酰基-羟基氨基)-甲基]-3-苯基-丙酰胺 白色固体(34mg)。1H-NMR；δ(CD3OD),7.35-7.10(10H,m),4.44-4.23(2H,m),4.05(1H,m),3.87-3.35(2H,m),3.09(1H,m),2.85-2.72(2H,m),1.65-1.46(4H,m),1.38-0.93(5H,brm)和0.75-0.51(2H,brm)。LRMS:+ve ion474[M+Na],-ve ion 450[M-H]。
实施例78N-[环己基-(1,1,3,3-四甲基-丁基氨基甲酰基)-甲基]-2-[(甲酰基-羟基氨基)-甲基]-3-苯基-丙酰胺 白色固体(51mg)。1H-NMR；δ(CD3OD),7.80(1H,s),7.36-7.10(5H,m),4.05(1H,m),3.85(1H,m),3.49(1H,m),3.15(1H,m),2.91(1H,m),2.68(1H,m),1.90(1H,m),1.80-1.48(7H,m),1.40-1.12(10H,m)和1.08-0.83(10H,m)。LRMS:+ve ion 496[M+Na],474[M+H],-ve ion 472[M-H]。
生物实施例A示范化合物1(实施例1)和化合物2(实施例2)的抗菌效果a).
抑制大肠杆菌DH5α菌株(基因型F-φ80d/acZAM15Δ(lacZYA-argF)U169deoRrecA1endA1hsdR17(rk-,mk+)phoAsupE44λ-thi-1gyrA96re/A1)从GibcoBRLLifeTechnologies获得，阴沟肠杆菌(美国典型培养物保藏中心(ATCC)保藏号13047)，肺炎克雷伯氏菌(ATCC保藏号13883)或头状葡萄球菌(ATCC保藏号35661)的抑制剂的最小抑制浓度(minimal inhibitoryconcentrations(MIC))被如以下测定。测试化合物(从实施例1和2分别而来的化合物1和2，(两者都是异构体A))和三种标准的实验用抗生素，羧苄青霉素(Sigma，目录号C3416)，卡那霉素(Sigma，目录号K4000)和氯霉素(Sigma，目录号C1919)的原溶液，通过将每种化合物以10mM的浓度溶于二甲基亚砜来制备。为了测定最小抑制浓度，在2×YT肉汤(胰蛋白胨16g/酵母提取液10g/l，氯化钠5g/l从BIO101Inc获得，1070Joshua Way,Vista,CA92083,USA)中制备两倍的系列稀释度，以得到0.05ml每孔的含化合物的培养液。接种体通过将培养物在37℃在2×YT肉汤中生长过夜来制备。细胞密度调整至660nm的吸光度(A660)=0.1；光学密度标准化的制备液在2×YT肉汤中被稀释至1∶1000；而每孔用0.05ml的已稀释的细菌接种。微量滴定板在潮湿的培养箱中在37℃培养18小时。记录抑制可见生长的最低的药物浓度作为MIC(μM)。
表1
b).
抑制蛙分枝杆菌(ATCC保藏号110)，绿脓杆菌(ATCC保藏号9027)，肺炎克雷伯氏菌(ATCC保藏号10031)，幽门螺杆菌(ATCC保藏号43504)，氨基糖苷类、红霉素抗性的肺炎链球菌和甲氧西林抗性(MR)的金黄色葡萄球菌(ATCC保藏号33591)的临床分离物的抑制剂最小抑制浓度(MIC)被如下测定。测试化合物1和2(每种的异构体A)和三种标准的实验室用抗菌剂庆大霉素(G)，氨卡青霉素(A)和红霉素(E)的原溶液通过将每种化合物溶于10mg/ml的二甲基亚砜来制备。在此使用的方法与a)相同，除了蛙分枝杆菌的培养液使用Brain Heart Infasion肉汤(GIBCO)，并在37℃培养48小时，金黄色葡萄球菌(MR)，肺炎克雷伯氏菌，和绿脓杆菌使用营养肉汤(DIFCO)，37℃培养20小时，幽门螺杆菌用含有7％的绵羊血的Columbia琼脂培养基(OXOID),35℃培养72小时，肺炎链球菌用含7％小牛血清的胰解大豆营养液(DIFCO)在37℃培养48小时。记录可见生长的最低的药物浓度作为MIC(μM)。
阳性载体对照(1％DMSO；无测试药剂)使所有的微生物生长。
阴性空白对照(无微生物，+测试药剂)，显示无微生物生长。
表2.
nd=未测得。
在另一个实验中，抑制一定范围的革兰氏阳性和革兰氏阴性的细菌的化合物1和实施例4的产物(化合物3)的最小抑制浓度(MIC)用微量稀释肉汤法，参照已批准的国家临床实验室委员会标准程序(对好氧菌的稀释抗微生物易感性实验方法-第四版ISBN1-56238-309-4)来测定。
对抗革兰氏阳性菌的活性
抵抗革兰氏阴性菌的活性
化合物3和实施例14(化合物4)的抗多抗性屎肠球菌的临床分离物的活性，采用紧随在前的结果所采用的方法评定。其活性在下表列出，和用同样方法对已知的抗菌剂得出的结果作比较
对抗多抗性屎肠球菌临床分离物
生物实施例Bⅰ)克隆大肠杆菌PDF基因将大肠杆菌PDF基因克隆在pET24a(+)(设计的pET24-PDF)中，用来转化BL21DE3细胞(来自Novagenlnc,(Madison,Wisconsin).)37℃在添加有30μg/ml卡那霉素的YT琼脂培养基(8g/l胰蛋白胨，5g/酵母提取液，NaCl5g/l，琼脂15g/l)上选择克隆。
ⅱ)PDF的表达用20ml带有pET24-PDF的BL21DE3细胞的过夜培养物感染存于2升的带挡板的烧瓶中的500ml2×YT肉汤(16g/l胰蛋白胨，10g/l酵母提取物，NaCl5g/l)(其中含有30ug/ml卡那霉素)，振荡37℃培养至OD6000.6，然后通过将培养液调整到1.0mM异丙基β-D硫代半乳吡喃糖苷(IPTG)来诱导菌种。诱导可在37℃再进行3小时，将细胞离心收集，用250ml磷酸盐缓冲的生理盐水(PBS)洗涤细胞团，将细胞团储藏在-70℃。
ⅲ)制备融合蛋白部分将从1升压榨液得到的细胞重新在2×25的冰冷磷酸缓冲盐中悬浮。将细胞悬浮液用固定有中探针的MSE Soniprep 150，在20-25微米振幅，以6×20秒脉冲在冰上超声处理。形成的悬浮液用20,000×g离心15分钟以重新澄清。上清液用作进一步纯化酶用。
ⅳ)PDF纯化从1L磷酸缓冲盐〔PBS〕培养物得到的大肠杆菌裂解液被调整到2M硫酸铵。将15ml苯基琼脂糖凝胶柱和PBS/2M硫酸铵在4℃平衡。将裂解液加到柱上，用平衡缓冲液洗脱。柱用从2M到0M的降低硫酸铵浓度洗脱，洗脱量在10倍柱体积以上。每5ml部分收集，用SDS-PAGE分析。将含有大部分20kDa PDF的洗脱液合并，用3kDa透析膜浓缩至5ml量。将该部分加到一用PBS平衡的Superde×75(粒度排除色谱)柱上。浓缩的PDF汇集液以1ml/min的速度在4℃洗脱，每5ml收集一次，用SDS-PAGE分析。汇集最纯的部分，储存在-70℃。
(ⅴ)体外PDF化验化验在单96孔板中进行，最终体积为100μl含有-20μlPDF(4μg/ml)-20μl100mM Hepes pH7.0+1MKCl+0.05％Brij-10μl测试化合物在20％DMSO中的系列稀释液-50μl甲酰基-Met-Ala-Ser(8mM)化验在37℃培养30分钟。去甲酰化的(Met-Ala-Ser)产物的自由氨基基团用荧光胺检测，用下列添加物-50μl0.2M硼酸盐pH9.5-50μl荧光胺(150μg/ml溶于干二噁烷)荧光用激发波长390nM和发射波长485nM在SLT Fluostar阅读机上定量。标准对照反应是无抑制剂反应，其提供零抑制数；以及无酶亦无抑制剂的反应，其提供100％的抑制数。通过将荧光单位转换成％抑制量并将抑制剂浓度对％抑制量作图来分析数据。数据符合一S形曲线的方程式y=A+((B-A)/(1+((C/×)D)))，其中A代表0抑制，B代表100％抑制而C代表IC50，D代表斜率。IC50代表能降低酶活力达50％的所需的抑制剂浓度(nM)。
本发明的化合物被发现能在体外抑制细菌PDF。另外，放线酰胺素也被发现可在体外抑制细菌PDF。
生物实施例C示范化合物2在体内抑制PDF。
1阻遏tRNAi-Met转甲酰反应产生对化合物2〔非对映异构体/异构体A〕抗性。
三甲氧苄二胺嘧啶特异抑制二氢叶酸还原酶，因此降低了四氢叶酸(THF)衍生物，包括甲酰基四氢叶酸(fTHF)，甲硫氨酰基-tRNA甲酰基转移酶(EC2.1.2.9)的底物的聚集。如果在补充了胸苷的丰富培养基中以前体形式额外加入所有的其生物合成和THF衍生物有关的基本代谢产物，例如泛酸盐、甲硫氨酸、甘氨酸、嘌呤核苷酸和胸苷，则生长在加入了胸苷(0.3mM)和三甲基苄二胺嘧啶(100μg/ml)的丰富培养基中的细菌能合成所有的除f-Met-tRNAi之外的正常细胞的化学组分。(Baumstark等，J.Bacteriol.129:457-471,1977)。替代使用未甲酰化的Met-tRNAi，导致在N-末端缺少甲酰基团的多肽的形成，与脱甲酰基酶的作用无关。如本发明人预计的那样，在补充了三甲基苄二胺嘧啶和胸苷的LB培养基(胰蛋白胨10g/l，酵母抽提液5g/INaCl10g/IpH7.5)中生长的DH5α细胞被发现对化合物2(非对映异构体A)有抗性。在表达的蛋白质上经历正常的甲酰化过程的细胞被化合物2A抑制，而其中同样在这些条件下生长的细胞中制造的未甲酰化的蛋白质不被化合物2A抑制。这些示范例证明了化合物2A很可能通过抑制PDF进行的去甲酰化反应来起作用。
表3.
2用化合物2A处理细菌，导致N-封端蛋白质的积聚如果本发明的化合物确实在体内抑制PDF，则用化合物2(实施例2，非对映异构体A)对细菌处理的结果是在新合成的蛋白质的N-末端有N-甲酰基甲硫氨酸的积聚。这些蛋白质会是N-封端的，而且将不能被用作以Edman降解法进行N-末端测序的底物。
为了测试这个假设，将一想得到的蛋白质在存在或缺少测试化合物的情况下表达。将该蛋白质分离，纯化，然后采用本领域熟练技术人员所知的技术对它进行Edman降解。
让用能表达人类钙激活中性蛋白酶小调节亚基的表达载体转化的细菌细胞生长至0.6OD600的浓度，然后在存在200μM化合物2A，存在240μM羧苄青霉素，或存在载体对照的情况下，采用IPTG来诱导细胞2.5小时以使之表达异种蛋白质。蛋白质抽提物用SDS-PAGE分离，洗脱钙激活中性蛋白酶亚基，用Edman降解法，使用ABI自动蛋白质测序仪来测定该蛋白质序列。等量的蛋白质被测序。发明人发现用化合物2A处理的蛋白质的产量和载体以及羧苄青霉素处理的对照比较，明显下降了85％。
用从胃肿瘤活组织切片，采用InVitrogen Micro Fast Track mRNA分离试剂盒2.2版(目录号K1520-02)得到的信使RNA，克隆钙激活中性蛋白酶小调节亚基。用Promega Riboclone cDNA合成系统M-MLV-RT(H-),Notl(Promega，目录号C1660)按照厂商的指示来合成由此mRNA而来的拷贝DNA。用Applied Biosystems,Inc.,Custom Services，以已出版的钙激活中性蛋白酶小亚基序列(EMBL登录号X04106)为基础，来合成两种在多聚酶链式反应(PCR)中使用的寡聚核苷酸引物。
将Hindlll/Xhol钙激活中性蛋白酶片段采用标准程序克隆入Hindlll和Xhol消化的表达载体pET24d(+)(从Novagen Inc,(Madison,WI,USA))。连接混合物被用来转化感受态的DH5α细胞(Life Technologies,Inc,Grand Island,NY,USACat#18265-017)。通过在YT培养基上加入30μg/ml的卡那霉素，37℃培养过夜来筛选菌落。采用Promega Plus SV miniprep kit来制备质粒DNA带有钙激活中性蛋白酶插入列的克隆，用标准程序识别。DNA序列用如上所述的PE Applied Biosystems循环测序仪来确定。
克隆入pET24d(+)(称为pET24-CANS)的大肠杆菌基因被用来转化BL21DE3细胞(来自Novagen Inc,(Madison,Wisconsin))。37℃在添加了30μg/ml的卡那霉素的YT琼脂培养基(8g/l胰蛋白胨，5g/酵母提取物，NaCl 5g/l，琼脂15g/l)上选择克隆。
权利要求
1．一种式(Ⅰ)化合物或它的医药学上或兽医学上可接受的盐在制备抗菌组合物中的用途 其中R1代表氢，或C1-C6烷基，或被一个或多个卤素原子取代的C1-C6烷基；R2代表R10-(X)n-(ALK)m-基团，其中R10代表氢，或C1-C6烷基，C2-C6链烯基，C2-C6炔基，环烷基，芳基，或杂环基团，其中的任意一个可以是非取代的或被(C1-C6)烷基，(C1-C6)烷氧基，羟基，巯基，(C1-C6)烷硫基，氨基，卤素(包括氟、氯、溴和碘)，三氟甲基，氰基，硝基，-COOH,-CONH2,-COORA,-NHCORA,-CONHRA,-NHRA,-NRARB，或-CONRARB取代，其中RA和RB分别独立为(C1-C6)烷基，而ALK代表直链或支链二价C1-C6亚烷基，C2-C6亚烯基，C2-C6亚炔基，而且可插入一个或多个非相邻的-NH-,-O-或-S-键，而X代表-NH-,-O-或-S-，而m和n分别独立的代表0或1；而A代表(ⅰ)式(ⅠA),(ⅠB),(ⅠC)或(ⅠD)的一个基团 其中R3代表氢，而R4代表天然或非天然的α氨基酸的侧链，或者，R3和R4当与它们分别连接的氮和碳原子结合在一起时，形成一个5到8个原子的可任选取代的饱和杂环，该杂环任选的与碳环或第二个杂环相稠合，R5和R6独立代表氢，或任选取代的C1-C8烷基，环烷基，芳基，芳基(C1-C6烷基)，杂环基，或杂环(C1-C6烷基)，或者，R5和R6当与它们连接的氮原子结合在一起时，形成一个3到8个原子的可任选取代的饱和杂环，该杂环任选的与碳环或第二个杂环相稠合，而R7代表氢，C1-C6烷基，或酰基基团。
2．一种治疗人和非人类哺乳动物的细菌感染的方法，其特征在于对患此类感染的对象施用抗菌有效剂量的如权利要求1所述的式(Ⅰ)的化合物。
3．如权利要求1所述的用途，或如权利要求2所述的方法，其特征在于在式(1)的化合物中R1代表氢，或C1-C6烷基；R2代表R10-(X)n-(ALK)-基团，其中R10代表氢，C1-C6烷基，C2-C6链烯基，C2-C6炔基，环烷基，芳基，或杂芳基基团，其中的任意一个可以是非取代的或被(C1-C6)烷基，(C1-C6)烷氧基，羟基，巯基，(C1-C6)烷硫基，氨基，卤素(包括氟、氯、溴和碘)，三氟甲基，硝基，-COOH,-CONH2,-COORA,-NHCORA,-CONHRA,-NHRA,-NRARB，或-CONRARB取代，其中RA和RB分别独立为(C1-C6)烷基，而ALK代表直链或支链二价C1-C6亚烷基，C2-C6亚烯基，C2-C6亚炔基，而且可插入一个或多个非相邻的-NH-,-O-或-S-键，而X代表-NH-,-O-或-S-，而n是0或1；而R3代表氢或C1-C6烷基，而R4代表天然或非天然的α氨基酸的侧链，而R5和R6分别独立代表氢，或C1-C6烷基，或者，R5和R6当与它们连接的氮原子结合在一起时，形成一个3到8个原子的可任选取代的饱和杂环，而R7代表氢，或酰基基团。
4．一种医药学或兽医学抗菌药物组合物，其特征在于，它包含如权利要求1所述的式(Ⅰ)的化合物和除权利要求1所述的式(Ⅰ)的化合物以外的抗菌剂，以及医药学或兽医学可接受的赋形剂或载体。
5．式(Ⅰ)的化合物或其医药学和兽医学上可接受的盐，其特征在于 R1代表氢，C1-C6烷基或被一个或多个卤素原子取代的C1-C6烷基；R2代表R10-(ALK)m-基团，其中R10代表氢，或C1-C6烷基，C2-C6链烯基，C2-C6炔基，环烷基，芳基，或杂环基团，其中任意一个可以是非取代或被(C1-C6)烷基，(C1-C6)烷氧基，羟基，巯基，(C1-C6)烷硫基，氨基，卤素(包括氟，氯，溴和碘)，三氟甲烷，硝基，-COOH,-CONH2,-COORA,-NHCORA,-CONHRA,-NHRA,-NRARB，或-CONRARB取代，其中RA和RB分别独立为(C1-C6)烷基，ALK代表直链或支链二价C1-C6亚烷基，C2-C6亚烯基，C2-C6亚炔基，而且可插入一个或多个非相邻的-NH-,-O-或-S-键，而m代表0或1；A代表(ⅰ)式(ⅠA),(ⅠB),(ⅠC)或(ⅠD)中的一个基团 其中R3代表氢，而R4代表天然或非天然的α氨基酸的侧链，或者，R3和R4当与它们连接的氮和碳原子结合在一起时，形成一个5到8个原子的可任选取代的饱和杂环，该环可任选与碳环或第二个杂环稠合，R5和R6分别独立代表氢，或被任选取代的C1-C8烷基，环烷基，芳基(C1-C6烷基)，非芳族杂环，或杂环(C1-C6烷基)，或者，R5和R6当与它们连接的氮原子结合在一起时，形成一个3到8个原子的可任选取代的饱和杂环，该环任选和碳环或第二个杂环相稠合，而R7代表氢，C1-C6烷基，或酰基基团；条件是(ⅰ)当A是式(ⅠA)或(ⅠB)基团，而R2是C2-C5烷基时，则R4不是天然α氨基酸的侧链，或任一功能性取代基被保护，任一氨基基团被酰基化，任一羧基基团被酯化的天然α氨基酸的侧链；(ⅱ)当A是式(ⅠA)或(ⅠB)的基团时，则R4不是二环芳基甲基基团；而(ⅲ)当A是式(ⅠA)基团而R2是环丙基甲基、环丁基甲基，或环戊基甲基，并且R5和R6之一是氢时，则R4不是叔丁基。
6．如权利要求5所述的化合物，其特征在于R1代表氢，或C1-C6烷基；R2代表R10-(ALK)-基团，其中R10代表氢，C1-C6烷基，C2-C6链烯基，C2-C6炔基，环烷基，芳基，或杂芳基基团，其中的任意一个可以是非取代的或被(C1-C6)烷基，(C1-C6)烷氧基，羟基，巯基，(C1-C6)烷硫基，氨基，卤素(包括氟、氯、溴和碘)，三氟甲基，硝基，-COOH,-CONH2,-COORA,-NHCORA,-CONHRA,-NHRA,-NRARB，或-CONRARB取代，其中RA和RB分别独立为(C1-C6)烷基，而ALK代表直链或支链二价C1-C6亚烷基，C2-C6，亚烯基，C2-C6亚炔基，而且可插入一个或多个非相邻的-NH-,-O-或-S-键，而R3代表氢或C1-C6烷基，R4代表天然或非天然的α氨基酸的侧链，R5和R6分别独立代表氢，C1-C6烷基，或者，R5和R6当与它们连接的氮原子结合在一起时，形成一个3到8个原子的可任选取代的饱和杂环，而R7代表氢或酰基基团；条件是当A是式(ⅠA)的基团时，则(ⅰ)R4不是天然α氨基酸的侧链，或任一功能性取代基被保护，任一氨基基团被酰基化，任一羧基基团被酯化的天然α氨基酸的侧链；(ⅱ)R4不是稠合的二环芳基亚甲基基团；而(ⅲ)当R2是环烷基(C1-C6)时，R4不是叔丁基。
7．如权利要求1所述的用途，权利要求2所述的方法，权利要求4所述的组合物，或权利要求5所述的化合物，其特征在于式(Ⅰ)的化合物中，R1是氢。
8．如权利要求1所述的用途，权利要求2所述的方法，权利要求4所述的组合物，或权利要求5所述的化合物，其特征在于式(Ⅰ)的化合物中，R2是；任选取代的C1-C8烷基，C3-C6链烯基，C3-C6炔基或环烷基；在苯环中任选取代的苯基(C1-C6烷基)-，苯基(C3-C6链烯基)-或苯基(C3-C6炔基)-；在环烷基环中任选取代的环烷基(C1-C6烷基)-，环烷基(C3-C6链烯基)-，或环烷基(C3-C6炔基)-；在杂环中任选取代的杂环(C1-C6烷基)-，杂环(C3-C6链烯基)-，或杂环(C3-C6炔基)-；或CH3(CH2)pO(CH2)q-或CH3(CH2)pS(CH2)q-，其中p是0,1,2或3而q是1,2或3。
9．如权利要求1所述的用途，权利要求2所述的方法，权利要求4所述的组合物，或权利要求5所述的化合物，其特征在于式(Ⅰ)的化合物中，R2是甲基，乙基，正或异丙基，正和异丁基，正戊基，异戊基，3-甲基-丁-1-基，正己基，正庚基，n-乙酰基，正辛基，甲硫基乙基，乙硫基甲基，2-甲氧基乙基，2-乙氧基乙基，2-乙氧基甲基，3-羟基丙基，烯丙基，3-苯基丙-3-烯-1-基，丙-2-炔-1-基，3-苯基丙-2-炔-1-基，3-(2-氯苯基)丙-2-炔-1-基，丁-2-炔-1-基，环戊基，环己基，环戊基甲基，环戊基乙基，环戊基丙基，环己基甲基，环己基乙基，环己基丙基，呋喃-2-基甲基，呋喃-3-基甲基，四氢呋喃-2-基甲基，四氢呋喃-2-基甲基，哌啶基甲基，苯基丙基，4-氯苯基丙基，4-甲基苯基丙基，4-甲氧基苯基丙基，苄基，4-氯苄基，4-甲基苄基，或4-甲氧基苄基。
10．如权利要求1所述的用途，权利要求2所述的方法，权利要求4所述的组合物，或权利要求5所述的化合物，其特征在于式(Ⅰ)的化合物中，R2是正丁基，苄基或环戊基甲基。
11．如权利要求1所述的用途，权利要求2所述的方法，权利要求4所述的组合物，或权利要求5所述的化合物，其特征在于式(Ⅰ)的化合物中，R3是氢。
12．如权利要求1所述的用途，权利要求2所述的方法，权利要求4所述的组合物，或权利要求5所述的化合物，其特征在于式(Ⅰ)的化合物中，R4是天然α-氨基酸的特征性基团，例如苄基，或4-甲氧基苄基，其任一官能性基团可被保护，任一氨基可被酰化，任一存在的羧基可被酯化；-[Alk]nR9基团，其中Alk是(C1-C6)亚烷基或(C2-C6)亚烯基基团，可任选插入一个或多个-O-，或-S-原子，或-N(R12)-基团[其中R12是氢或(C1-C6)烷基]，n是0或1，而R9是氢，或任选取代的苯基，芳基，杂环基，环烷基或环烯基基团或(仅当n为1时)R9也可能为羟基，巯基，(C1-C6)烷硫基，氨基，卤素，三氟甲烷，硝基，-COOH,-CONH2,-COORA,-NHCORA,-CONHRA,-NHRA,-NRARB，或-CONRARB，其中RA和RB分别独立为(C1-C6)烷基基团；或被式为-OCH2COR8的基团在苯环内取代的苄基，其中R8是羟基，氨基，(C1-C6)烷氧基，苯基(C1-C6)烷氧基，(C1-C6)烷基氨基，二((C1-C6)烷基)氨基，苯基(C1-C6)烷基氨基；或杂环(C1-C6)烷基基团，它是非取代的或在杂环内被卤素，硝基，羧基，(C1-C6)烷氧基，氰基，(C1-C6)烷酰基，三氟甲基(C1-C6)烷基，羟基，甲酰基，氨基，(C1-C6)烷基氨基，二-(C1-C6)烷基氨基，巯基，(C1-C6)烷硫基，羟基(C1-C6)烷基，巯基(C1-C6)烷基，或(C1-C6)烷基苄基单-或二-取代；或-CRaRbRc基团，其中每一个Ra，Rb和Rc独立的为氢，(C1-C6)烷基，(C2-C6)链烯基，(C2-C6)炔基，苯基(C1-C6)烷基，(C3-C8)环烷基；或Rc是氢而Ra和Rb分别独立为苯基或杂芳基，例如吡啶基，或Rc是氢，(C1-C6)烷基，(C2-C6)链烯基，(C2-C6)炔基，苯基(C1-C6)烷基，或(C3-C8)环烷基，以及Ra和Rb和与它们相连的碳原子一起形成3到8元的环烷基或5-到6-元的杂环；或Ra，Rb和Rc与它们相连的碳原子一起形成三环核(例如金刚烷基)；或Ra和Rb分别独立的为(C1-C6)烷基，(C2-C6)链烯基，(C2-C6)炔基，苯基(C1-C6)烷基，或如下为Rc定义的除氢外的基团，或Ra和Rb和与它们相连的碳原子一起，形成环烷基或杂环，而Rc是氢，-OH,-SH，卤素，-CN,-CO2H,(C1-C4)全氟烷基，-CH2OH,-CO2(C1-C6)烷基，-O(C1-C6)烷基，-O(C2-C6)链烯基，-S(C1-C6)烷基，-SO(C1-C6)烷基，-SO2(C1-C6)烷基，-S(C2-C6)链烯基，-SO(C2-C6)链烯基，-SO2(C2-C6)链烯基，或-Q-W基团，其中Q代表化学键或-O-，-S-，-SO-或-SO2-，而W代表苯基，苯基烷基，(C3-C8)环烷基，(C3-C8)环烷基烷基，(C4-C8)环烯基，(C4-C8)环烯基烷基，杂芳基或杂芳基烷基基团，其中W可任选的被从羟基，卤素，-CN,-CO2H,-CO2(C1-C6)烷基，-CONH2,-CONH(C1-C6)烷基，-CONH(C1-C6烷基)2，-CHO,-CH2OH,(C1-C4)全氟烷基，-O(C1-C6)烷基，-S(C1-C6)烷基，-SO(C1-C6)烷基，-SO2(C1-C6)烷基，-NO2,-NH2,-NH(C1-C6)烷基，-N((C1-C6)烷基)2，-NHCO(C1-C6)烷基，(C1-C6)烷基，(C2-C6)链烯基，(C2-C6)炔基，(C3-C8)环烷基，(C4-C8)环烯基，苯基或苄基中独立选出的一个或多个取代基取代。
13．如权利要求1所述的用途，权利要求2所述的方法，权利要求4所述的组合物，或权利要求5所述的化合物，其特征在于式(Ⅰ)的化合物中，R4是甲基，乙基，苄基，4-氯苄基，4-羟基苄基，苯基，环己基，环己基甲基，吡啶-3-基甲基，叔-丁氧基甲基，萘基甲基，异丁基，仲丁基，叔丁基，1-苄硫基-1-甲基乙基，1-甲硫基-1-甲基乙基，1-巯基-1-甲基乙基，1-甲氧基-1-甲基乙基，1-羟基-1-甲基乙基，1-氟-1-甲基乙基，2-羟基乙基，2-羧基乙基，2-甲基氨基甲酰基乙基，2-氨基甲酰基乙基，或4-氨基丁基。
14．如权利要求1所述的用途，权利要求2所述的方法，权利要求4所述的组合物，或权利要求5所述的化合物，其特征在于式(Ⅰ)的化合物中，R4是叔丁基，异丁基，苄基或甲基。
15．如权利要求1所述的用途，权利要求2所述的方法，权利要求4所述的组合物，或权利要求5所述的化合物，其特征在于式(Ⅰ)的化合物中，R3和R4与它们分别相连的氮和碳原子结合在一起时，形成可被任选取代的5到8个原子的饱和杂环。
16．如权利要求1所述的用途，权利要求2所述的方法，权利要求4所述的组合物，或权利要求5所述的化合物，其特征在于式(Ⅰ)的化合物中，R3和R4在与它们分别相连的氮和碳原子之间形成桥，所述桥由二价基-(CH2)3-6-，或-(CH2)r-O-(CH2)s-，或-(CH2)r-S-(CH2)s-表示，其中r和s每个分别为1,2或3，附加条件是r+S=2,3,4，或5。
17．如权利要求1所述的用途，权利要求2所述的方法，权利要求4所述的组合物，或权利要求5所述的化合物，其特征在于式(Ⅰ)的化合物中，R5和R6分别独立为氢，甲基，乙基，叔丁基，环戊基，环己基，1,1,3,3-四甲基丁基，苄基，或2-羟基乙基。
18．如权利要求1所述的用途，权利要求2所述的方法，权利要求4所述的组合物，或权利要求5所述的化合物，其特征在于式(Ⅰ)的化合物中，R5和R6在和与它们相连的氮原子结合一起时，形成饱和的5-到8-元的单环N-杂环，该杂环通过该N原子相连，且任选包含-N(R11)-，其中R11是氢或C1-C6烷基，苄基，酰基，或氨基保护基团，O,S,SO或SO2作为环上成员，和/或在一个或多个碳原子上任选被羟基，C1-C6烷基，羟基(C1-C6烷基)-，C1-C6烷氧基，氧，缩酮化的氧，氨基，单(C1-C6烷基)氨基，双(C1-C6烷基)氨基，羧基，C1-C6烷氧基羰基，羟甲基，C1-C6烷氧基甲基，氨基甲酰基，单(C1-C6烷基)氨基甲酰基，双(C1-C6烷基)氨基甲酰基，或羟基亚氨基取代。
19．如权利要求1所述的用途，权利要求2所述的方法，权利要求4所述的组合物，或权利要求5所述的化合物，其特征在于式(Ⅰ)的化合物中，R5和R6在和与它们相连的氮原子结合一起时，形成取代或非取代的1-吡咯烷基，哌啶-1-基，1-哌嗪基，六氢-1-哌嗪基，吗啉-4-基，四氢-1,4-噻嗪-4-基，四氢-1,4-噻嗪-4-基1-氧，四氢-1,4-噻嗪-4-基1,1-双氧，噻唑烷-3-基，六氢吖庚因基或八氢吖辛因基环。
20．如权利要求1所述的用途，权利要求2所述的方法，权利要求4所述的组合物，或权利要求5所述的化合物，其特征在于式(Ⅰ)的化合物中，R5和R6在和与它们相连的氮原子结合一起时，形成取代或非取代的1-吡咯烷基，哌啶-1-基，1-哌嗪基，六氢-1-哌嗪基，吗啉-4-基，四氢-1,4-噻嗪-4-基，四氢-1,4-噻嗪-4-基1-氧，四氢-1,4-噻嗪-4-基1,1-双氧，六氢吖庚因基或八氢吖辛因基，上述的取代例是2-(甲基氨基甲酰基)-1-吡咯烷基，2-(羟甲基)-1-哌啶基，4-羟基哌啶基，2-(甲基氨基甲酰基)哌啶基，4-羟基亚氨基哌啶基，4-甲氧基哌啶基，4-甲基哌啶-1基，4-苄基哌啶-1-基，4-乙酰基哌啶-1-基，4-甲基-1-哌嗪基，4-苯基-1-哌嗪基，1,4-二氧杂-8-氮杂螺[4,5]癸-8-基，六氢-3-(甲基氨基甲酰基)-2-哒嗪基，和六氢-1-(苄氧基羰基)-2-哒嗪基，十氢异喹啉-2-基，或1,2,3,4-四氢异喹啉-2-基环。
21．如权利要求1所述的用途，权利要求2所述的方法，权利要求4所述的组合物，或权利要求5所述的化合物，其特征在于式(Ⅰ)的化合物中，R7是氢，或R20C(O)-基团，其中R20是(C1-C6)烷基基团，例如甲基或乙基。
22．如权利要求1所述的用途，权利要求2所述的方法，权利要求4所述的组合物，或权利要求5所述的化合物，其特征在于式(Ⅰ)的化合物中，R20是甲基或乙基。
23．如权利要求1所述的用途，权利要求2所述的方法，权利要求4所述的组合物，或权利要求5所述的化合物，其特征在于式(Ⅰ)的化合物中，A代表式(ⅠA)的基团，R1代表氢，R2代表正丁基，苄基或环戊基甲基，R3是氢，R4是叔丁基，异丁基，苄基或甲基，R5是氢或甲基，而R6代表甲基。
24．如权利要求1所述的用途，权利要求2所述的方法，权利要求4所述的组合物，或权利要求5所述的化合物，其特征在于式(Ⅰ)的化合物中，A代表式(ⅠB)的基团，R1代表氢，R2代表正丁基，苄基或环戊基甲基，R3代表氢，而R4是叔丁基，异丁基，苄基或甲基。
25．2R(或S)-[(甲酰基-羟基-氨基)-甲基]-己酸(1S-二甲基氨基甲酰基-乙基)-酰胺，或它的医药学或兽医学可接受的盐。
26．2R(或S)-[(甲酰基-羟基-氨基)-甲基]-3-环戊基-丙酸(1S-二甲基-氨基甲酰基-2,2-二甲基-丙基)-酰胺或它的医药学或兽医学可接受的盐。
27．如权利要求5所述的化合物，其在本文的实施例1-3,5-13,15-78的任一例中被公开，或它的医药学或兽医学可接受的盐。
28．一种抗菌的医药学或兽医学的组合物，其中包括如权利要求5到27中任一项所述的化合物，以及医药学或兽医学可接受的赋形剂或载体。
29．一种用以鉴定抗菌化合物的方法，其特征在于，包括(ⅰ)在体外筛选测试化合物作为PDF抑制剂的活性，(ⅱ)筛选展现出所述PDF抑制剂活性的化合物，以测定其抑制细菌生长的能力。
30．一种抑制细菌PDF活性的化合物在制备抗菌组合物或药剂中的用途，条件是(ⅰ)该化合物不是式(Ⅺ)的化合物RCO-CH(W)-NH-CO(Y)-CH-CH2-CO-NH-OH(Ⅺ)其中，(a)R是环氨基基团，W是氢，甲基，异丙基，异丁基或苄基，而Y是氢，C1-C6烷基，苯基，苄基，4-氯苄基，4-硝基苄基，或4-氨基苄基；或，(b)R是2-吡啶基氨基或2-噻唑基氨基，W是异丙基而Y是正戊基；或，(c)R是二乙基氨基，W是甲基或异丙基，而Y是正戊基；或(ⅱ)该化合物不是包含二价的哌嗪-1,6-二基基团的化合物。
31．一种治疗病毒感染或污染的方法，其特征在于通过对患有这种感染或污染的病人给药，或对这种感染或污染的位置施用抗菌有效量的化合物，该化合物抑制细菌PDF酶的活性，条件是(ⅰ)该化合物不是式(Ⅺ)的化合物RCO-CH(W)-NH-CO-CH(Y)-CH2-CO-NH-OH(Ⅺ)其中，(a)R是环氨基基团，W是氢，甲基，异丙基，异丁基或苄基，而Y是氢，C1-C6烷基，苯基，苄基，4-氯苄基，4-硝基苄基，或4-氨基苄基；或，(b)R是2-吡啶基氨基或2-噻唑基氨基，W是异丙基而Y是正戊基；或，(c)R是二乙基氨基，W是甲基或异丙基，而Y是正戊基；或(ⅱ)该化合物不是包含二价的哌嗪-1,6-二基基团的化合物。
全文摘要
式(Ⅰ)的化合物是抗菌剂，其中R
文档编号A61K31/445GK1298299SQ9980275
公开日2001年6月6日 申请日期1999年2月5日 优先权日1998年2月7日
发明者M·G·亨特, R·P·贝克特, J·M·克莱门茨, M·惠特克, S·J·戴维斯, L·M·普拉特, Z·M·斯帕沃尔德, S·朗克伯瑞 申请人:英国生物技术药物有限公司