一种2-甲氧基雌二醇白蛋白纳米冻干剂制备方法及其应用
【技术领域】
[0001] 本发明涉及医药，特别是一种2-甲氧基雌二醇白蛋白纳米冻干剂制备方法及其 应用。
【背景技术】
[0002] 2-甲氧基雌二醇（2-methoxyestradiol，2-ME)是20世纪70年代研究雌激素代谢 过程时，在人体内发现的雌二醇的天然代谢产物，属新型激素类抗肿瘤药物。近期，通过对 其药理作用的研究表明，2-ME能诱导内皮细胞的凋亡，扰乱微血管的生成，抑制新生血管的 生成，是较好的新生血管形成抑制剂。进一步研究表明，其在体内外对多种肿瘤均有良好的 抑制作用，已用于多发性骨髓瘤、前列腺癌和乳腺癌的治疗，同时该化合物不依赖雌激素受 体，无雌激素作用。目前，2-ME对实体瘤的研究已处于临床研究阶段。
[0003] 2-ME在实际临床应用中仍存在诸多问题，如药物的低溶解度、口服吸收无规律、肝 首过代谢作用强、半衰期短、生物利用度低等，大大影响了 2-ME的治疗效果。为了得到一种 给药次数少、生物利用度高、稳定性好、制备简单，有利于患者使用的制剂，提高2-ME靶向 性及其治疗效果，以减少其毒副作用，具有非常重要的临床意义。
[0004] 纳米粒（nanoParticles)是利用天然高分子或合成的化学物质为载体制成的载 药微粒，纳米粒子对肿瘤的增强渗透和滞留效应，使更多药物被动靶向而浓集于肿瘤组织， 提1?其抗肿瘤效果。
[0005] 白蛋白（bovineserumalbumin, BSA)是一种天然高分子载体材料，具有安全无毒、 免疫原性低、可生物降解、生物相容性好、易于修饰、价格低廉等优点，是一种优良的药物载 体，其分子中氨基酸以肽键相连接，并且扭曲成团状，具有无数的网状空隙，为镶嵌携带药 物创造了有利的空间条件。
[0006] 冷冻干燥在低温下进行，使得制剂中的一些挥发性成分损失小，微生物的生长和 酶的作用无法进行，因此能保持制剂原有性状，且体积几乎不变，不会发生浓缩现象。干燥 能排除95-99%以上的水份，使干燥后产品能长期保存而不致变质。因此将所制得的2-ME 白蛋白纳米粒进行冻干以得到粉针剂，旨在得到稳定好、治疗效果优的2-ME白蛋白纳米冻 干制剂。那么如何制备2-甲氧基雌二醇白蛋白纳米冻干剂，并实现在制备治疗肿瘤药物中 的应用，是亟待解决的技术问题。
【发明内容】
[0007] 针对上述情况，为克服现有技术之缺陷，本发明之目的就是提供一种2-甲氧基雌 二醇白蛋白纳米冻干剂制备方法及其应用，可有效解决2-甲氧基雌二醇白蛋白纳米冻干 剂的制备，并实现在制备治疗肿瘤药物中的应用问题。
[0008] 本发明解决的技术方案是，本发明2-甲氧基雌二醇白蛋白纳米冻干剂的制备方 法包括以下步骤： (I )、将2-甲氧基雌二醇(简称2-ME)溶解在有机溶剂无水乙醇中，制成2-甲氧基雌二 醇重量浓度为l-5mg/ml的溶液A ; (2) 、将牛血清白蛋白（BSA)溶解于超纯水中，制成牛血清白蛋白重量浓度20-60mg/ml 的溶液B，加入表面活性剂，表面活性剂的加入量为溶液B重量的1/2000-5000,搅拌混匀， 用NaOH溶液调节pH值8-10 ; 所述的表面活性剂为吐温-20 (Tween-20)、聚乙二醇-200 (PEG-200)、聚乙二醇-400 (PEG-400)、泊洛沙姆188中的任意一种或两种以上任意量的组合； (3) 、将溶液A以0. 05-1. Oml/min的流速加入到溶液B中，溶液A和溶液B的体积比为 2-3 : 1，形成混合溶液C ; (4) 、在混合溶液C中加入交联剂质量浓度为8%的戊二醛，混合溶液C与质量浓度为8% 的戊二醛的体积比为10-100 : 1，用磁力搅拌器搅拌均匀后，静置固化； (5) 、将固化得到的制剂旋蒸去除有机溶剂，形成纳米溶液D ; (6) 、在纳米溶液D中加入冻干保护剂，冻干保护剂与纳米溶液D的重量比为10-30 : 1，冷冻干燥去除水分，即为2-ME白蛋白纳米冻干制剂； 所述的冻干保护剂为蔗糖，乳糖，甘露醇，海藻糖，葡萄糖的一种或两种以上任意量的 组合。
[0009] 2-甲氧基雌二醇白蛋白纳米冻干剂具有抑制或凋亡癌细胞的功效，有效用于癌症 的治疗用药，实现2-甲氧基雌二醇白蛋白纳米冻干剂在制备治疗癌症药物中的应用。
[0010] 本发明方法简单，易生产制备，稳定性好，药效长，治疗癌症靶向性强，能够保护药 物免受环境影响，起效快，负作用小，给药次数少、生物利用度高、稳定性好、制备简单，有利 于患者使用，提高2-ME靶向性及其治疗效果，减少毒副作用，具有非常重要的临床意义，有 效用于制备治疗癌症的药物，有巨大的经济和社会效益。
【附图说明】
[0011] 图1为本发明所制备的2-甲氧基雌二醇白蛋白纳米冻干剂的粒径分布图。
[0012] 图2为本发明所制备的2-甲氧基雌二醇白蛋白纳米冻干剂的Zeta电位图。
[0013] 图3为本发明所制备的2-甲氧基雌二醇白蛋白纳米冻干剂在体外的药物释放曲 线图。
[0014] 图4为本发明所制备的2-甲氧基雌二醇白蛋白纳米冻干剂在实验癌症中所得荷 瘤鼠的体重变化曲线图。
【具体实施方式】
[0015] 以下结合实施例对本发明的【具体实施方式】作详细说明。
[0016] 实施例1 本发明在具体实施中，由以下方法实现，将2-甲氧基雌二醇溶于无水乙醇中，制成浓 度为lmg/ml的溶液A，将牛血清白蛋白溶于超纯水中，制成浓度分别为20mg/ml、30mg/ml、 50mg/ml、60mg/ml -种的牛血清白蛋白水溶液B，用0· lmol/L的NaOH溶液调溶液B pH为 9,并向溶液B中加入溶液B重量的1/5000的表面活性剂Tween-20,以80r/min的转速进行 搅拌，搅拌5分钟后，将溶液A用恒流泵控制流速为lml/min加入到溶液B中，溶液A和溶 液B的体积比为2 : I，成混合溶液C，在混合溶液C中缓慢滴加质量浓度为8%的戊二醛水 溶液，混合溶液C与质量浓度为8%的戊二醛水溶液体积比为100 : 1，用磁力搅拌器搅拌均 匀，固化12h，得固化制剂，将固化制剂40°C旋蒸去除无水乙醇，成纳米溶液D，在纳米溶液D 中加入冻干保护剂，冻干保护剂与纳米溶液D的重量比为20 : 1，冷冻干燥去除水分，即得 2-甲氧基雌二醇白蛋白纳米冻干剂。
[0017] 实施例2 本发明在具体实施是，也可由以下方法实现，取2-甲氧基雌二醇溶于乙醇中，配制成 浓度为lmg/ml、2mg/ml、4mg/ml、5mg/ml的一种2-甲氧基雌二醇的乙醇溶液，取牛血清白蛋 白溶于超纯水中，制成浓度为30mg/ml的白蛋白水溶液，超声充分溶解，用0. lmol/L的NaOH 溶液将白蛋白溶液调节到pH为9,并向白蛋白水溶液中加入白蛋白水溶液重量1/2000的表 面活性剂PEG-200,以80r/min的转速进行搅拌，搅拌5分钟后，将2-甲氧基雌二醇的乙醇 溶液用恒流泵控制流速为lml/min加入到白蛋白水溶液中，2-甲氧基雌二醇的乙醇溶液和 白蛋白水溶液的体积比为3 : 1，成混合溶液，然后将质量浓度为8%的戊二醛水溶液缓慢滴 加至混合溶液中，混合溶液与质量浓度为8%的戊二醛水溶液体积比为50