聚马来酸酐-磷脂酰乙醇胺接枝聚合物纳米光敏载体的制备方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及聚马来酸酐-磷脂酰乙醇胺接枝聚合物纳米光敏载体的制备方法，属 医药技术领域。
【背景技术】
[0002] 恶性肿瘤具有生长速度快、转移能力强、复发率高的特点。单靠任何一种治疗手段 治愈癌症又兼顾患者的生存质量，是难以实现的。相对于现有临床上常用的治疗方法，如外 科手术、放射治疗、化学药物治疗及免疫治疗，光动力疗法由于其独特的优点和良好的兼容 性，已成为肿瘤诊断和治疗中一支新的生力军，在肿瘤的综合治疗中发挥着重要作用。光动 力疗法（PhotodynamicTherapy，F1DT)是利用光动力效应进行疾病诊断和治疗的一种新技 术。其过程原理是，特定波长的激光照射使组织吸收的光敏剂受到激发，而激发态的光敏剂 又把能量传递给周围的氧，生成活性很强的单线态氧，单线态氧和相邻的生物大分子发生 氧化反应，产生细胞毒性作用，进而导致细胞受损乃至死亡。相对于手术，化疗等传统的肿 瘤治疗手段相比，光动力疗法有其独到的优势，如创伤很小，适用性好，可重复治疗等。）由 于光动力疗法具有诸多显著优势，美国食品与药品监督管理局（FDA)于1997年正式将光动 力疗法列入肿瘤治疗的五类基本方法（手术、放疗、化疗、光动力、生化免疫），成为单列的 一类肿瘤治疗方法。
[0003] 虽然光动力治疗技术已获得了大量的临床应用，但其依然存在着不少自身难以克 服的缺陷和不足，其中最为显著的就是光敏剂疏水性强，体内易团聚、药物利用率低，容易 造成正常组织如皮肤的光毒性。这些缺陷无疑限制了光动力治疗在肿瘤治疗中的进一步应 用。因此，研制新型光敏药物制剂，对于提高光转换效率，减少对正常组织的光毒性，
[0004] 纳米药剂的研制有望解决上述光动力治疗中长期困扰人们的问题。纳米药剂指利 用三维空间中至少有一维处于纳米尺度范围（I-IOOnm)或由它们作为基本单元构成的纳 米材料为基材，来承载药物而制备的新型药物制剂。因而可以增加药效，从而减少给药量并 降低系统的毒副作用。
【发明内容】
[0005] 鉴于纳米药剂在医学上的重要应用，本发明提供一种聚马来酸酐-磷脂酰乙醇胺 接枝聚合物纳米光敏载体的制备方法。具体涉及两部分内容即1)聚马来酸酐-磷脂酰乙 醇胺接枝聚合物的合成；2)将这种双亲性高分子与光敏剂复合制备出纳米光敏载体。对水 溶性聚马来酸酐进行改性获得的双亲性高分子具有操作简便、适用性强、成本低的优点。并 且由于马来酸酐开环后，生成大量的羧基官能团，使其容易进行多功能化，如肿瘤靶向分子 RGD多肽。同传统的未经修饰的光敏制剂相比，组装得到的聚马来酸酐-磷脂酰乙醇胺接枝 聚合物纳米光敏载体具有结构稳定，粒径均一等优点。
[0006] 本发明首先利用聚（1-十八烯/马来酸酐）开环并与磷脂酰乙醇胺反应制备出 聚马来酸酐-磷脂酰乙醇胺双亲性高分子。同聚（1-十八烯/马来酸酐）相比，聚马来酸 酐-磷脂酰乙醇胺双亲性大大增强在水中具有较好溶解性。如图2红外结构分析所示，聚 马来酸酐-磷脂酰乙醇胺的谱图上有大量酰胺键的产生，证明聚马来酸酐-磷脂酰乙醇胺 双亲性高分子合成成功；接着利用这种双亲性高分子同光敏剂一起，通过薄膜法制备了聚 马来酸酐-磷脂酰乙醇胺接枝聚合物纳米光敏制剂；如图3投射电镜测试结果显示，制备的 这种高分子脂质体粒径小于l〇〇nm，粒度分布均匀；经过化学偶联可将靶向分子RGD连接在 纳米制剂的表面，如图4通过MTT细胞毒性测试，聚马来酸酐-磷脂酰乙醇胺接枝聚合物纳 米光敏制剂和RGD修饰的聚马来酸酐-磷脂酰乙醇胺接枝聚合物纳米光敏制剂在很高的浓 度下（200微克每毫升），仍然具有很低的细胞毒性；如图5通过细胞染色发现，将聚马来酸 酐-磷脂酰乙醇胺接枝聚合物纳米光敏制剂同细胞共培养后，细胞仍能保持很高活性（染 色显示为绿色）；如图6在体外光动力实验中表明，R⑶修饰的聚马来酸酐-磷脂酰乙醇胺 接枝聚合物纳米光敏制剂在光照条件下，可有效地杀伤肿瘤细胞。
[0007] 本发明的技术方案如下：
[0008] 1)聚马来酸酐-磷脂酰乙醇胺接枝聚合物的合成：首先利用聚（1-十八烯/马来 酸酐）开环并与磷脂酰乙醇胺为原料，通过开环反应制备出聚马来酸酐-磷脂酰乙醇胺双 亲性高分子。其具体结构式如下所示：
【主权项】
1. 一种聚马来酸酐-磷脂酰乙醇胺接枝聚合物纳米光敏载体的制备方法，其特征是步 骤如下： 1) 聚马来酸酐-磷脂酰乙醇胺接枝聚合物的合成：利用聚（1-十八烯/马来酸酐）与 磷脂酰乙醇胺为原料，通过开环反应制备出聚马来酸酐-磷脂酰乙醇胺双亲性高分子； 2) 薄膜分散法制备聚马来酸酐-磷脂酰乙醇胺接枝聚合物纳米光敏制剂。
2. 如权利要求1所述的方法，其特征是所述聚马来酸酐_磷脂酰乙醇胺接枝聚合物的 合成方法如下： (1) 将原料聚（1-十八烯/马来酸酐）和磷脂酰乙醇胺加入到反应器；磁力搅拌条件 下，向反应器中加入四氢呋喃使原料完全溶解；加热至30~70°C，冷凝回流反应； (2) 待反应结束后，降温将产物放入透析袋中透析；取透析后溶液过滤冻干，便得到双 亲性聚马来酸酐-磷脂酰乙醇胺接枝聚合物。
3. 如权利要求2所述的方法，其特征是所述的聚（1-十八烯/马来酸酐）：磷脂酰乙醇 胺质量份数配比为1:10~30。
4. 如权利要求2所述的方法，其特征是所述的冷凝回流反应1~3天。
5. 如权利要求2所述的方法，其特征是所述的透析袋中透析3~7天。
6. 如权利要求1所述的方法，其特征是所述采用薄膜分散法步骤如下： (1) 将聚马来酸酐-磷脂酰乙醇胺接枝聚合物与光敏剂酚酞锌，加入二氯甲烷使其完 全溶解中，形成油相； (2) 在35~50°C下于旋转蒸发仪上旋蒸，同时向旋转蒸发仪中通入氮气流保护，使有 机溶剂挥发； (3) 在真空烘箱中充分干燥后，加入去离子水使其完全溶解，将脂质膜水化，然后用超 声波清洗器进行超声分散，便得到聚马来酸酐_磷脂酰乙醇胺接枝聚合物纳米光敏制剂。
7. 如权利要求6所述的方法，其特征是所述的聚马来酸酐-磷脂酰乙醇胺接枝聚合物： 光敏剂酚酞锌质量份数配比为10~30 : 1。
【专利摘要】本发明涉及聚马来酸酐-磷脂酰乙醇胺接枝聚合物纳米光敏载体的制备方法1)聚马来酸酐-磷脂酰乙醇胺接枝聚合物的合成：首先利用聚(1-十八烯/马来酸酐)开环并与磷脂酰乙醇胺为原料，通过开环反应制备出聚马来酸酐-磷脂酰乙醇胺双亲性高分子；2)按照薄膜分散法制备聚马来酸酐-磷脂酰乙醇胺接枝聚合物纳米光敏制剂的制备。本发明操作简便，适用性强，成本低，在水中及多种有机溶剂中具有较好的溶解性，且接枝效率可达10％-30％。光敏制剂有效粒径在50～150nm之间，粒径更均匀；稳定性好，可在水溶液中保存至少2个月以上；载药率可保持在10-20％之间，产率高，适合大批量生产。
【IPC分类】C08F8-40, C08F222-06, A61K41-00, C08F210-14, A61K47-32, A61P35-00
【公开号】CN104623662
【申请号】CN201510084427
【发明人】王汉杰, 侯贝贝, 常津, 宫晓群, 苏琳, 郑斌
【申请人】天津大学
【公开日】2015年5月20日
【申请日】2015年2月16日