表现出不溶性微粒显著减少的依那西普制剂的制作方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及被稳定化以便依那西普的长期储存的含水药物组合物，制造该组合物 的方法、该组合物的给药方法以及包含该组合物的试剂盒，其中，该稳定化的依那西普组合 物表现出不溶性微粒（sub-visible particle)的显著减少。本发明包括不需要精氨酸用 于稳定化的依那西普制剂。本发明还涉及使患者更少地遭受依那西普制剂中的不溶性微粒 的制品和方法。
【背景技术】
[0002] 多肽通常必须在其使用之前储存。当长时间储存时，多肽经常在溶液中不稳定 (Manning et al.，1989, Pharm. Res. 6:903-918)。为了延长其保质期，已经开发了另外的处 理步骤，诸如干燥，例如冻干。然而，冻干的药物组合物使用不太方便。
[0003] 通过改变制剂的元素的浓度，或者通过添加赋形剂来修改该制剂可以提出提高多 肽稳定性的典型做法（参见，例如，美国专利第5580856和61715865号）。然而，使用添加剂 仍然可导致无活性的多肽。此外，在冻干的情况下，再水化步骤可导致多肽的失活，例如，通 过聚集或变性（Hora et al·，1992, Pharm. Res. ,9:33-36 ;Liu et al·，1991，Biotechnol. Bioeng. ,37:177-184)。不希望多肽聚集，因为其可能会导致免疫原性（Cleland et al.,1993,Crit. Rev. Therapeutic Drug Carrier Systems，10:307-377 ;and Robbins et al.，1987, Diabetes，36:838-845)。
[0004] 另一种提高多肽的稳定性的方式是使用特定浓度的L-精氨酸（美国专利第 7648702 号）。
[0005] 在使用之前储存长达两年的一种多肽是依那西普（Ellbrel?, Immunex公司），其 是由连接于人IgGl的Fc部分的人75千道尔顿（P75)肿瘤坏死因子受体（TNFR)的胞外配 体结合部分组成的二聚融合多肽。其由934个氨基酸组成并且具有约150千道尔顿的表观 分子量（Physicians Desk Reference, 2002, Medical Economics Company Inc·)。依那西 普的Fe组分包含重链恒定结构域2 (CH2)、重链恒定结构域3 (CH3)和铰链区，但不包含人 IgGl的重链恒定结构域I(CHl)。Fc结构域可以包含上述结构域中的一种或全部。依那西 普通常通过在中国仓鼠卵巢（CHO)哺乳动物细胞表达系统中的重组DNA技术产生。
[0006] 药物蛋白质制剂（包括依那西普制剂）中的公知问题是该种制剂倾向于表现出不 溶性微粒的存在。据认为，当对患者给药蛋白质制剂时，这种微粒与不希望的免疫反应（免 疫原性）有关。这种免疫反应会减少蛋白质治疗的有效性，并可能对患者有害。
[0007] 本发明提供一种实现长期储存并且形成不溶性微粒的倾向显著降低的新颖的稳 定的依那西普液体制剂。
【发明内容】
[0008] 本发明提供一种含水药物组合物，包括依那西普和用于防止、抑制或者减少所述 组合物中的不溶性微粒的出现的稳定剂，其中，所述稳定剂包括表面活性剂，优选地，所述 表面活性剂选自聚山梨醇酯表面活性剂和泊洛沙姆表面活性剂，其中与不包含表面活性剂 的依那西普组合物相比，所述表面活性剂能够使得所述组合物中的不溶性微粒显著减少。 本发明考虑使用能够达到不溶性微粒的期望减少的任何药学上可接受的表面活性剂。
[0009] 在另一个实施方式中，本发明是一种包括依那西普和用于防止、抑制或者减少所 述组合物中的不溶性微粒的出现的稳定剂的含水药物组合物，其中，所述稳定剂包括选自 聚山梨醇酯表面活性剂和泊洛沙姆表面活性剂的表面活性剂。所述稳定剂包括选自聚山 梨醇酯80、聚山梨醇酯60、聚山梨醇酯40和聚山梨醇酯20的聚山梨醇酯表面活性剂，或 者泊洛沙姆表面活性剂，诸如，例如普朗尼克F-68。意外地，本发明的制剂在不需要商业 Enbrel?制剂中存在的精氨酸稳定剂的情况下表现出优良的稳定性和不溶性微粒的减少。 因此，所述制剂优选地不含有精氨酸，或者基本上不含有精氨酸。
[0010] 在本发明的又一个实施方式中，包含针对不溶性微粒的形成而用于稳定化的聚山 梨醇酯或者泊洛沙姆表面活性剂的依那西普制剂可以进一步包括选自以下的额外的稳定 化成分：（i)选自丝氨酸、脯氨酸和谷氨酸盐的氨基酸；（ii)选自钙、镁和锌的金属离子； (iii)选自单独的木糖醇、或者木糖醇和葡甲胺的组合的木糖醇稳定剂；（iv)选自单独的 氯化钠；氯化钠与蔗糖或者海藻糖的组合，以及氯化钠、蔗糖和海藻糖的组合的氯化钠稳定 剂；(V)选自单独的葡甲胺；葡甲胺与蔗糖的组合；葡甲胺与氯化钠的组合；葡甲胺与氯化 钠和蔗糖的组合的葡甲胺稳定剂；和（vi)糖和多元醇的组合。
[0011] 因此，在一个实施方式中，本发明提供包括依那西普、针对不溶性微粒的形成而用 于稳定化的聚山梨醇酯或者泊洛沙姆表面活性剂、和抑制依那西普的不稳定、聚集和/或 片段化的另外的稳定剂成分的稳定的含水药物组合物，其中，该另外的稳定剂包括选自丝 氨酸、脯氨酸和谷氨酸盐的化合物。在优选的实施方式中，该稳定剂包括谷氨酸盐。
[0012] 在另一实施方式中，本发明提供包括依那西普、针对不溶性微粒形成而用于稳定 化的聚山梨醇酯或者泊洛沙姆表面活性剂、和抑制依那西普的不稳定、聚集和/或片段化 的另外的稳定剂的稳定的含水药物组合物，其中，所述另外的稳定剂包括稳定化金属离子。 优选地，所述表面活性剂是聚山梨醇酯80或者普朗尼克F-68,并且所述金属离子选自钙、 镁、锌或者它们的组合。在甚至更优选的实施方式中，钙、镁、锌分别作为氯化钙、氯化镁和 氯化锌提供。特别优选氯化钙和氯化镁作为用于依那西普的稳定剂。
[0013] 在又一个实施方式中，本发明提供包括依那西普、针对不溶性微粒形成而用于稳 定化的聚山梨醇酯或者泊洛沙姆表面活性剂、和抑制依那西普的不稳定、聚集和/或片段 化的另外的稳定剂成分的稳定的含水药物组合物，其中，所述另外的稳定剂选自离子多元 醇衍生物，诸如葡甲胺、甘露糖基甘油酸酯、葡糖基甘油酸酯、甘露糖基乳酸酯、甘露糖基乙 醇酸酯和磷酸二甘油酯。在该实施方式中，优选的依那西普含水稳定化制剂包括：依那西 普；山梨醇酯80表面活性剂或者普朗尼克表面活性剂；和阻止制剂中的依那西普的不稳 定、聚集和片段化的稳定化成分，所述稳定化成分由（a)葡甲胺；或者（b)葡甲胺与蔗糖的 组合；或者（c)葡甲胺与氯化钠的组合；或者（d)葡甲胺与氯化钠和蔗糖的组合组成。
[0014] 在又一个实施方式中，本发明提供包括依那西普、针对不溶性微粒形成而用于稳 定化的聚山梨醇酯或者泊洛沙姆表面活性剂、和抑制依那西普的不稳定、聚集和/或片段 化的另外的稳定剂成分的稳定的含水药物组合物，其中，所述另外的稳定剂包括糖和多元 醇的组合。优选地，表面活性剂是PS-80或者普朗尼克F-68,所述糖是蔗糖以及所述多元醇 选自甘露醇和山梨醇。在该实施方式的又一方面中，所述糖是右旋糖以及所述多元醇选自 甘露醇和山梨醇。在本实施方式的特别优选的实施例中，本发明涉及稳定化的依那西普制 剂，其中，存在蔗糖和甘露醇的组合以提供依那西普单体的稳定化。
[0015] 在又一个实施方式中，本发明提供包括依那西普、针对不溶性微粒形成而用于稳 定化的聚山梨醇酯或者泊洛沙姆表面活性剂的稳定的含水药物组合物，其中，本发明提供 用于降低依那西普的不稳定、聚集和/或片段化的另外的用于稳定化的成分，所述制剂包 括约25至约75mg/ml的依那西普和一种或者多种稳定剂，其中，所述另外的稳定剂成分选 自（i)氯化钠和（ii)氯化钠与蔗糖或者海藻糖的组合；以及（iii)氯化钠、蔗糖和海藻糖 的组合；其中，用于减少不溶性微粒的稳定剂/表面活性剂优选PS 80或者普朗尼克F-68。
[0016] 在又一个实施方式中，本发明提供包括依那西普、针对不溶性微粒形成而用于稳 定化的聚山梨醇酯或者泊洛沙姆表面活性剂（优选PS-80或者普朗尼克F-68)的稳定的含 水药物组合物，其中，本发明提供用于降低依那西普的不稳定、聚集和/或片段化的另外的 稳定化的成分，其中所述另外的稳定剂包括木糖醇或者木糖醇和葡甲胺的组合。
[0017] 本发明还涉及用于降低依那西普制剂中的不溶性微粒的数量的方法，所述方法包 括以构成所述制剂的约0· 0001至约0· 5w/v% (优选约0· 01至0· 05w/v% )的量向依那西 普制剂加入表面活性剂（优选聚山梨醇酯或者泊洛沙姆表面活性剂）的步骤，从而使得与 在不存在所述表面活性剂的情况下制备的相同制剂相比，每毫升制剂中的具有约1至10微 米的尺寸的不溶性微粒的数量减少至少50%，并且优选减少至少约60至70% ;其中，通过 在制备制剂时以及在其任何可感知的储存或者热应力之前进行的流式影像分析测量不溶 性微粒的数量。
[0018] 在又一个实施方式中，本发明提供一种制品，所述制品包括包含最终剂型的依那 西普制剂的容纳装置，其中，所述制剂包括依那西普和药学上可接受的表面活性剂，其中， 与不具有表面活性剂的相同制剂相比，制剂中存在的不溶性微粒的量大幅降低。在所述制 剂中以范围为0.0005-1% (w/v)的量存在的表面活性剂优选是如上所述的聚山梨醇酯（例 如，聚山梨醇酯80)或者泊洛沙姆表面活性剂（例如，普朗尼克F-68)。如果需要，所包含的 制剂可以包括一种或者多种以上讨论的另外的稳定化的成分。通过诸如流式影像分析的常 规手段在"T0"时确定的所包含的制剂中的不溶性微粒的量优选是使得所述制剂具有（i) 每毫升少于约2500个、尺寸为约5-10 μ m的微粒；（ii)少于约3500个、尺寸为约2-5 μ m的 微粒和（iii)每毫升少于约700个、尺寸为约1-2 μ m的微粒。与不具有表面活性剂的相同 的所包含的制剂相比，所包含的依那西普/表面活性剂制剂中存在的不溶性微粒的水平优 选表现出不溶性微粒的至少约50% -70%的减少。
[0019] 在又一个实施方式中，本发明提供一种使受试者更少地遭受依那西普制剂中的不 溶性微粒的方法，所述方法包括对所述受试者施用包括依那西普和药学上可接受的表面活 性剂的依那西普制剂，其中，与不具有表面活性剂的相同制剂相比，制剂中存在的不溶性微 粒的量大幅减少。在所述制剂中以范围为0.0005-1 % (w/v)的量存在的表面活性剂优选是 如上所述的聚山梨醇酯（例如，聚山梨醇酯80)或者泊洛沙姆表面活性剂（例如，普朗尼克 F-68)。如果需要，所包含的制剂可以包括一种或者多种以上讨论的另外的稳定化成分。通 过诸如流式影像分析的常规手段在"T0"时确定的所述制剂中的不溶性微粒的量优选是使 得所述制剂具有（i)每毫升少于约2500个的尺寸为约5-10 μ m的微粒；（ii)少于约3500 个的尺寸为约2-5 μ m的微粒和（iii)每毫升少于约700个的尺寸为约1-2 μ m的微粒。与 不具有表面活性剂的相同的制剂相比，依那西普/表面活性剂制剂中存在的不溶性微粒的 水平优选表现出不溶性微粒的至少约50% -70%的减少。
[0020] 不同于市售的依那西普，我们发现，令人意外的是本文所描述和例举的每个依那 西普的制剂实施方式都不需要用于长期稳定化的精氨酸，但是如果需要仍然可以加入精氨 酸。再者，含有或不含有精氨酸，并且利用本文所述的表面活性剂，该制剂能够表现出不溶 性微粒的优良降低。提供不利用精氨酸稳定化的依那西普制剂的能力，以及表现出对不溶 性微粒形成的优良抵抗，通过为患者和医疗服务人员提供与需要精氨酸来稳定化的现有商 业依那西普制剂（即，Enbrel? )相比可以以更低的成本获得的依那西普的替代制剂（包 括商业Enbrel?的生物仿制药和生物改进变体）显示出对医疗系统的潜在显著益处。在减 少蛋白治疗的免疫原性方面，不溶性微粒的减少也被看作是一个非常显著的优点。
[0021] 如本文所用的术语"不稳定"或类似术语表示依那西普单体在储存期间经历各种 不希望的转化的倾向，包括可能导致不同粒径的不溶性微粒的形成或者出现的转化。这种 转化包括非常高分子量的（多种）聚集体的形成，其中基本上完整的依那西普单体的多个 拷贝通过各种非共价的吸引力（例如，静电相互作用）彼此随机地相关联。在储存期间不 希望的转化还可以包括依那西普单体降解成更小的片段和/或低聚物。理想的情况下，依 那西普制剂应尽量（在最大程度上）减少制剂在储存过程中造成的不溶性微粒、依那西普 单体的聚集体、低聚体和/或片段的形成的倾向。由降低不需要的聚集体或者片段的形成 的能力带来的重要益处是药物的免疫原性的降低。
[0022] 可以以任选地不含有或者基本上不含有精氨酸的制剂提供以上提及的每个实施 方式。术语"基本上不含有精氨酸"意图表示精氨酸（即便存在）不有助于制剂中的依那 西普单体的稳定化以致于本领域的技术人员将从稳定化的立场判断其存在益处。
[0023] 从以下各个实施方式的描述可以明显看出这些和其他方面，但是可能影响其中的 变化和修改而不偏离本公开的新颖构思的精神和范围。
[0024] 应该理解的是，前述一般描述和以下的详细描述都只是示例和说明性的，并不如 所要求地限制本发明。
[0025] 附图的简要说明
[0026] 图1是表示对应于说明书的表VIII中的数据的在"T0"时测量的不溶性微粒的 流式影响分析的柱状图。如在说明书中进一步