组合及其用图
【专利说明】组合及其用途
[0001] 本申请要求2012年9月25日提交的美国临时专利申请号61/705, 172和2013年 3月8日提交的美国临时专利申请号61/774, 595的优先权，其每一个的公开内容通过引用 以其整体结合到本文中。 发明领域
[0002] 本公开内容描述了抗CD38抗体和美法仑的药物组合。
[0003] 发明背景
[0004] 多发性骨髓瘤是B细胞恶性肿瘤，其特征在于在增殖指数低和寿命长的骨髓分泌 性浆细胞中潜在蓄积。该病最终攻击骨和骨髓，导致整个骨骼系统中的多发性肿瘤和损伤。
[0005] 所有癌症中有约1%且所有血液性恶性肿瘤中有近超过10%可归因于多发性骨 髓瘤（MM)。MM的发生率在老年人群中增加，确诊时年龄中位数为约61岁。目前可使用的 针对多发性骨髓瘤的疗法包括化学疗法，例如长春新碱、BCNU、美法仑、环磷酰胺、阿霉素 和泼尼松或地塞米松、干细胞移植、Thalomid? (沙利度胺）、Velcade? (硼替佐米）、 Aredia? (帕米膦酸盐）和Zometa? (唑来膦酸）。目前的治疗方案（包括化疗剂的组 合）的完全缓解率仅约5%，而中位生存时间为从确诊时间起大概36至48个月。使用高 剂量的化学治疗之后接着自体骨髓或外周血液单核细胞移植的最新进展增加了完整缓解 率和缓解持续时间。然而，总体生存时间仅略微延长，并且没有证据显示得到治愈。最终， MM患者常常复发，甚至在单独或与类固醇类组合使用干扰素 a (IFN-α)进行维持治疗时 也如此。
[0006] ⑶38是在这类恶性浆细胞上表达的抗原的实例。⑶38所具有的功能包括在黏附 和信号转导事件中的受体介导以及（胞外）酶活性这二者。作为一种胞外酶，CD38使用 NAD+作为底物，用于环ADP-核糖（cADPR)和ADPR的形成，但也用于烟酰胺和烟酸-腺嘌 呤二核苷酸磷酸盐（NAADP)的形成。已表明cADPR和NAADP起Ca2+动员的第二信使的作 用。通过将NAD+转化成cADPR，⑶38调节胞外NAD+浓度，因此通过调节NAD诱导的细胞死 亡（NCID)而调节细胞存活。除了经由Ca2+进行信号转导之外，⑶38信号转导经由与T细 胞和B细胞上的抗原-受体复合物或其他类型的受体复合物（例如MHC分子）相互作用而 发生，并以此方式参与若干细胞反应，并且还参与IgG转换和分泌。
[0007] 现今，本领域公开了靶向CD38的各种方法。例如CD38特异性抗体 描述于 W01999/62526 (Mayo Foundation) ;W0200206347 (Crucell Holland); US2002164788 (Jonathan Ellis)，其通过引用以其整体予以结合；W02005/103083,美 国序列号10/588,568,其通过引用以其整体予以结合；W02006/125640,美国序列号 11/920, 830,其通过引用以其整体予以结合；W02007/042309,美国序列号12/089, 806,其 通过引用以其整体予以结合（MorphoSys AG) ;W02006099875,美国序列号11/886, 932,其 通过引用以其整体予以结合（Genmab);以及W008/047242,美国序列号12/441，466,其通过 引用以其整体予以结合（Sanofi-Aventis)。然而，为了改进CD38抗体的功效，CD38特异性 抗体和其它作用剂的不同组合疗法已公开于例如W0200040265,美国序列号09/226,895， 其通过引用以其整体予以结合（Research Development Foundation) ;W02006099875 和 W02008037257,美国序列号11/886,932和12/442,808,其通过引用以其整体予以结合 (Genmab) ;TO2012/041800(MorphoSys AG)和 TO2010061360,美国序列号 13/131，389,其 通过引用以其整体予以结合；W02010061359,美国序列号13130867,其通过引用以其整 体予以结合，W02010061358,美国序列号13130865,其通过引用以其整体予以结合；以及 W02010061357,美国序列号13/130, 862,其通过引用以其整体予以结合（Sanofi Aventis)， 所有文献均通过引用以其整体予以结合。
[0008] 然而涉及表达⑶38的肿瘤的许多形式的癌症的预后仍差，且现有疗法并不足够。 因此，需要用于治疗这类形式的癌症的改进方法。
[0009] 发明概述
[0010] 出乎意料的是，发现特定抗CD38抗体与美法仑的组合显示在临床相关的多发性 骨髓瘤体内模型中降低骨溶解的协同水平。由于其出乎意料的协同效应所致，该组合提供 用于治疗人的多发性骨髓瘤的有前景的改进方法。
[0011] 一方面，本公开内容涉及⑶38特异性抗体和美法仑的协同组合。另一方面，本公 开内容涉及包含CD38特异性抗体和氮芥烷化剂的药物组合物。所述组合可用于治疗涉及 肿瘤细胞（例如多发性骨髓瘤）的癌症。
[0012] 美法仑是一种氮芥烷化剂，因此，其它氮芥烷化剂，例如环磷酰胺、氮芥、乌拉莫司 汀、苯丁酸氮芥、异环磷酰胺或苯达莫司汀，当与抗CD38抗体组合使用时也可导致协同效 应。
[0013] 另一方面包括抗CD38抗体和氮芥烷化剂的协同组合在治疗慢性淋巴细胞白血 病、慢性髓细胞白血病、急性髓细胞白血病和/或急性淋巴细胞白血病中的用途。
[0014] 本公开内容的一个方面包括CD38特异性抗体和美法仑的组合，其中所述CD38特 异性抗体包含序列 GFTFSSYYMN(SEQ ID N0:1)的 HCDR1、序列 GIS⑶PSNTYYADSVKG(SEQ ID N0:2)的 HCDR2、序列 DLPLVYTGFAY(SEQ ID N0:3)的 HCDR3、序列 S ⑶ NLRHYYVY(SEQ ID NO: 4)的 LCDR1、序列⑶SKRPS(SEQ ID N0:5)的 LCDR2 和序列 QTYTGGASL(SEQ ID N0:6)的 LCDR3。在一个优选的方面，所述组合用于治疗多发性骨髓瘤。
[0015] 附图描述
[0016] 图1显示实施例3中所述各研宄组的MicroCT扫描平均总骨体积。在各组中，使 用 3. Omg/kg M0R03087 和 4. Omg/kg 美法仑。
[0017] 图2显示实施例3中所述各研宄组的MicroCT扫描平均总骨体积。在各组中，使 用 3. Omg/kg M0R03087 和 8. Omg/kg 美法仑。
[0018] 图3显示分离自使用⑶38抗体（M0R03087)和美法仑及其组合的原位骨质溶解模 型小鼠的血清中的平均蛋白质M浓度。
[0019] 图4显示M0R202的氨基酸序列。
[0020] 发明详述
[0021] 定义
[0022] "药物组合物"包括至少一种活性剂，例如在人体内用于治疗用途的抗体。药物组 合物还包括活性剂（例如在人体内用于治疗用途的抗体）和氮芥的组合。药物组合物可包 括可接受的载体或赋形剂。
[0023] "给予"或"给药"包括但不限于通过可注射形式递送，例如静脉内、肌内、皮内或皮 下途径或粘膜途径，例如作为鼻喷雾剂或气雾剂用于吸入法，或作为可摄食的溶液剂、胶囊 剂或片剂。
[0024] "协同"、"协同作用"或"协同活性"意指超过预期的组合的相加效应。组合的"协 同"、"协同作用"或"协同活性"在本文通过Clarke等人的方法测定。参见Clarke等，Issues in experimental design and endpoint analysis in the study of experimental cytotoxic agents in vivo in breast cancer and other models (乳腺癌和其它模型中 体内实验性细胞毒性剂研宄的实验设计和终点分析中的问题），Breast Cancer Research and Treatment46 :255-278(1997)，其通过引用以其整体予以结合。
[0025] 术语"抗体"意指单克隆抗体，包括任何同种型，例如IgG、IgM、IgA、IgD和IgE。 IgG抗体由通过二硫键相连接的两条相同的重链和两条相同的轻链组成。每条重链和轻链 含有一个恒定区和一个可变区。每个可变区含有被称为"互补决定区"（"CDR"）或"超变 区"的三个区段，主要负责结合抗原的表位。它们按顺序从N末端编号，被称为CDR1、CDR2 和CDR3。CDR以外的可变区的更高度保守的部分被称为"构架区"。"抗体片段"是指Fv、 scFV、dsFv、Fab、Fab'、F(ab' )2片段或其他片段，它包含至少一个可变重链或可变轻链， 各自含有CDR和构架区。"抗原结合片段"是与目标抗原（例如CD38)特异性结合的抗体片 段。
[0026] 本文所用术语"单克隆抗体"是指单一分子组成的抗体分子的制备物。单克隆抗 体组成对特定表位显示单一结合特异性和亲和力。
[0027] "VH"是指抗体或抗体片段的免疫球蛋白重链的可变区。"VL"是指抗体或抗体片 段的免疫球蛋白轻链的可变区。
[0028] 术语"⑶38"是指称为⑶38的蛋白质。
[0029] 人⑶38具有以下氨基酸序列：
[0030] MANCEFSPVS⑶KPCCRLSRRAQLCLGVSILVLILVVVLAVVVPRWRQQWSGPGTTKRFPETVLARC VKYTEIHPEMRHVDCQSVffDAFKGAFISKHPCNITEEDYQPLMKLGTQTVPCNKILLffSRIKDLAHQFTQVQRDM FTLEDTLLGYLADDLTWCGEFNTSKINYQSCPDWRKDCSNNPVSVFWKTVSRRFAEAACDVVHVMLNGSRSKIFD KNSTFGSVEVHNLQPEKVQTLEAWVIHGGREDSRDLCQDPTIKELESIISKRNIQFSCKNIYRPDKFLQCVKNPE DSSCTSEIo (SEQ ID NO ：11)
[0031] "M0R202"，一种抗CD38抗体，图4提供了其氨基酸序列和DNA序列。"M0R202"和 "M0R03087"作为同义词使用，描述图4所示抗体。M0R03087公开于美国专利8, 088, 896,其 通过引用以其整体予以结合。
[0032] 术语"表位"是指被免疫球蛋白或T细