一种受体抗体融合蛋白的药物组合物的制作方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种包含TNFR:Fc的药物组合物、该组合物的制备方法、给药方法以 及治疗用途。
【背景技术】
[0002] 肿瘤坏死因子（TNF)是一种涉及炎症和急性期反应的多肽细胞因子。TNF-a大量 存在于患有类风湿性关节炎或克罗恩病的人中。通过生物制剂进行TNF-a的直接抑制在 类风湿性关节炎的治疗中已经取得显著进步，并且这种促炎细胞因子的细胞外抑制已经被 确认为一种有效的治疗。一种这样的生物制剂是依那西普。
[0003] 依那西普（TNFR :Fc)是一种二聚体融合蛋白，该二聚体融合蛋白由连接到人IgG 的Fc部分的人75千道尔顿（p75)肿瘤坏死因子受体（TNFR)的细胞外配体结合部分组成。 依那西普的Fc组分由CH2结构域、CH3结构域以及铰链区组成，而CHl结构域是缺乏的。它 是在中国仓鼠卵巢哺乳动物细胞表达系统中通过重组DNA技术产生的。它由934个氨基酸 组成，并且具有大致150千道尔顿的表观分子量。
[0004] 通常，蛋白质具有非常短的半寿期，并且在暴露于各种因素(如不适宜温度、 水-气界面、高压、物理/机械应力、有机溶剂和微生物污染)之后经历变性(如聚集、解离和 吸附在容器表面)。因此，变性蛋白失去内在的理化性质和生理活性。蛋白质的变性通常是 不可逆的，因此蛋白质一旦变性，它们的天然性质可能不会恢复到初始状态。
[0005] 在生物制药行业中，使用重组DNA技术制备的蛋白质在水性制剂中的长期储存通 常是一项困难的任务。为了克服水性制剂中的蛋白质的稳定性问题，通过冻干(冷冻干燥） 制备了更加稳定的治疗性蛋白产品。冻干产品通常伴随有用于复原的无菌水性介质。在复 原之后，这些制剂典型地具有短的有效贮存寿命，即使在低温(例如，5°C )下保存时也是如 此。在市场上可得到的呈冻干形式的TNF-a抑制剂的实例包括Enbrei?和Remieade?,并 且这两种组合物应当在使用之前复原。
[0006] 针对治疗用途，蛋白质药物如单克隆抗体或受体抗体融合蛋白（如TNFR:Fc)以高 浓度使用，可以通过静脉内输注递送至患者，也可以优选配制该蛋白质治疗药用于皮下注 射。然而，用于皮下注射的药物溶液的体积比静脉内输注体积小得多，从而蛋白质必然以更 高的浓度存在。在每毫升数十毫克的高的治疗性蛋白质浓度上，维持治疗性蛋白质稳定溶 解持续延长的时间段是重要的。高浓度的蛋白质溶液增加了有利于聚集的蛋白质-蛋白质 相互作用的可能性；防止聚集已经变成蛋白质药物配制的重要事项。聚集造成许多问题， 包括活性蛋白的生物利用率减少，药物代谢动力学改变和不想要的免疫原性。（Frokjaer， S?和 Otzen，D. E ?，Nat. Rev. Drug. Discov. 4:298_306 (2005) Jiskoot，W?和 Crommelin, D. J. A. , EJHP Practiced ：2〇-21 (2006)) 〇
[0007] 防止聚集仍主要是经验性的，因为聚集过程的分子细节总体上未知。常见 策略是添加稳定剂、聚集抑制剂、表面活性剂等赋形剂至蛋白质溶液。常使用的赋 形剂包括糖、盐、游离氨基酸如L-精氨酸和L-谷氨酰胺（Golovanov，A.P.等人， J.Am.Chem.Soc. 126:8933_8939 (2004))、多元醇（Singh，S Sci.Tech4 :1-9 (2003) ;Mishra，R.等人，J. Biol. Chem. 280 :15553-15560 (2005))、 聚乙二醇（PEG)和可以减少蛋白质-蛋白质相互作用的其他聚合物，如聚山梨酯 (polysorbates)或泊洛沙姆（Frokjaer 和 Otzen，见上文；Lee，R. C.等人，Ann. Biomed. Eng. 34 ： 1190-1200(2006) ； (Nema, S.'A, PDAJournal of Pharmaceutical Science and Technology51:166-171(1997))。
[0008] PVP是基本上由线性聚合的I-乙烯基-2-吡咯烷酮（乙烯基吡咯烷酮）组成的合 成聚合物，其聚合度导致具有各种分子量的聚合物。聚乙烯吡咯烷酮的同义词包括PVP、聚 (1-乙烯基-2-吡咯烷酮)、聚维酮和Kollidon。PVP是生物学惰性的并且口服和局部用途 径无毒。分子量低于25000道尔顿的PVP通过肾小球滤过作用从体循环中移除并且因此预 期不在身体中堆积。
[0009] PVP已经在制药工业中广泛用作片剂包衣助剂并且在眼用和局部用制品中用作增 黏剂。PVP也已经最初作为血浆增容剂用于肠胃外施用并且随后在可注射制剂(例如，抗生 素、激素、镇痛药）中用来产生黏度。这些制剂限于通常小于500道尔顿的小分子化合物或 小蛋白如激素。含有PVP的当前可用药品包括Bici 11 in C-R? (Wyeth) ,Wycillin?(Wyeth) 和PfiZerpen?(PfiZer)，它们均含有小分子青霉素G，以及非常低浓度（彡0. 6%)的PVP。 Dep〇-SubQProveral04?(Pharmacia and Upjohn)含有 5%PVP 连同小分子醋酸甲轻孕丽。 Bexxar?(Glaxo Smith Kline)含有放射性标记的抗CD20抗体连同4.4-6. 6%PVP。在Bexxar 的例子中，PVP特异地用作放射防护剂以减少放射性标记的抗体因所附着放射性同位素而 自辐射分解（美国专利号5, 961，955和美国专利号6, 338, 835)。PVP和聚乙二醇也被生物 化学家用来沉淀溶解的蛋白质(美国专利号5, 525, 519)。
[0010] 因此，令人希望的是提供在冷藏下具有增强的稳定性并且在正常室温下具有至少 中等的稳定性的TNFR:Fc的药物组合物，从而避免来自复原程序的不便和错误的可能性。
【发明内容】
[0011] 本发明的药物组合物包括一种纯化的多肽、缓冲剂、聚集抑制剂、渗透压调节剂、 稳定剂、表面活性剂、螯合剂、以及任选地防腐剂，它们呈适当的组合。
[0012] 在一个方面，在药物组合物中需要聚集抑制剂来使产品保持在天然状态并且是具 有生物活性的，具有延长的保质期和增强的储存条件。本发明重点考察了 PVP的作用。还有 包括如天冬氨酸、苯丙氨酸、谷氨酸、丙氨酸、组氨酸以及赖氨酸等氨基酸聚集抑制剂，同样 可降低多肽形成聚集体的趋向，可以长时间地减少制剂中的含有Fc结构域的多肽的聚集。
[0013] 在另一个方面，需要缓冲剂来维持制剂的pH值。本发明的缓冲系统包括磷酸缓 冲剂、碳酸氢盐缓冲剂、丁二酸盐缓冲剂、乙酸盐缓冲剂、柠檬酸盐缓冲剂、氨基酸类、以及 Tris缓冲剂，它们单独地或者以适当的组合而使用，提供所希望的从5. . 5到7. 5范围的pH 值。
[0014] 在本发明中，表面活性剂用来防止TNFR = Fc吸附在小瓶、安瓿瓶、圆柱状管 (carpoule)、药筒、或注射器的表面上。表面活性剂降低蛋白质溶液的表面张力，从而防止 其吸附或聚集在一个疏水表面上。适用于本发明制剂的表面活性剂包括但不限于聚山梨 酯(例如聚山梨酯20或80);帕洛沙姆(例如帕洛沙姆188或168);山梨坦酯及其衍生物； Triton ;十二烷基硫酸钠；辛基糖苷钠；十二烷基、十四烷基、亚油酰-或硬脂酰-磺基甜 菜碱；十二烷基、十四烷基、亚油酰或硬脂酰-肌氨酸；亚油酰_、十四烷基或十六烷基-甜 菜碱；月桂酰胺丙基_、椰油酰胺丙基_、亚油酰胺丙基_、肉豆蘧酰胺丙基_、棕榈酰胺丙 基-或异硬脂酰胺丙基甜菜碱(例如月桂酰胺丙基）；肉豆蘧酰胺丙基_、棕榈酰胺丙基-或 异硬脂酰胺丙基-二甲胺；甲基椰油酰基牛磺酸钠或甲基油酰基牛横酸二钠；和M0NAQUAT? 系列（Mona Industries, Inc.，Paterson, N.J.);聚乙二醇，聚丙醇以及乙二醇和丙二醇的 共聚物(例如，Pluronics, PF68等)。它们单独地或组合使用。
[0015] 在一个实施方案中，在本发明中使用的稳定剂选自下组，该组由以下各项组成：氨 基酸类，如甘氨酸、精氨酸、丙氨酸、赖氨酸、脯氨酸、丝氨酸，等等以及其他们的盐，它们单 独地或组合使用；单糖，如葡萄糖和甘露糖以及它们的类似物，它们单独地或组合使用；二 糖类，如蔗糖、海藻糖、麦芽糖和它们的类似物，它们单独地或组合使用；糖醇类，如甘露糖 醇、山梨