玉屏风在制药中的应用
【技术领域】
[0001] 本发明涉及玉屏风在制药中的应用，具体涉及在制备促进树突状细胞增殖与活化 的药物中的应用，同时涉及在制备减少炎性T细胞亚群增殖的药物中的应用。
【背景技术】
[0002] 树突状细胞（dendriticcell，DC)作为连接固有免疫与适应性免疫的纽带，是功 能最强的专职抗原递呈细胞（antigen-presentingcell，APC)，广泛分布于全身各组织器 官，它能通过模式识别受体（pattern-recognitionreceptors，PRR)识别各种病原微生物、 摄取抗原、加工成抗原肽、递呈给相应的T淋巴细胞，并分泌多种细胞因子，激活初始T细胞 (Na'iveTcells)，诱导其向效应性Thl/Th2/Thl7/Treg等不同亚群分化，是获得性免疫的 始动者，成为多种疾病细胞生物治疗的重要细胞。DC的这一功能依赖于共同刺激信号分子 和主要组织相容性抗原复合物（majorhistocompatibilitycomplex，MHC)分子的表达、相 应细胞因子的释放等多个环节的信号调控。
[0003]DC功能的启动主要通过多种PRR识别多种病原微生物共有的病原相关分子模式 (pathogen-associatedmolecularpattern，PAMP)，快速启动有效信号清除危险因素，维 持免疫内环境稳定。Toll样受体（Toll-likerec印tors，TLRs)是其中一类重要的PRR，为 I型跨膜蛋白，其胞内段含有一结构保守的区域，负责活化信号的传导；胞外段为富含亮氨 酸的重复序列，参与配体识别。TLRs及其信号途径在调控DC成熟和免疫应答中起重要作 用，在正常情况下，体内绝大多数DC处于非成熟状态，具有很强的抗原捕获、处理能力，但 缺乏激活T细胞的能力。一旦TLRs被PAMPs刺激，未成熟DCQmmaturedendriticcell, iDC)历经一个快速的成熟过程，上调细胞粘附分子和趋化因子受体等介导迀移和募集的分 子的表达，迀移至次级淋巴器官，进一步分化为成熟DC(maturedendriticcell,mDC)，丧 失吞噬抗原能力，上调共刺激信号和MHC-II的表达，获得激活初始T细胞活化和功能分化 的能力，扩大Thl/Th2/Thl7/Treg等亚群主导的适应性免疫应答。
[0004] DC具有强大的抗原递呈能力和强化获得性免疫反应的作用，使其成为细胞生物治 疗的重要细胞。该细胞的体外诱导培养方法通常采用细胞因子与TLR配基、病毒载体负载 的flt3等方法，这些方法诱导的DC较易导致炎性细胞因子的过表达，在临床应用中往往存 在成本较高和难以控制的副作用等问题。中药在增强免疫方面已有较多的文献报道，但精 确用于DC体外培养的诱导剂尚无系列的研宄成果。根据中医理论和现代医学研宄成果，结 合DC在细胞生物治疗中的应用价值，在经典增强免疫的中药中发掘新用途，减低DC体外培 养工程中生物制剂应用成本、降低其副作用，为经典中药的新用途提供重要的科学技术手 段。
[0005] 玉屏风是中医固表抗邪的经典方药，并在抗病毒、抗感染的治疗实践中反复验证 了其有效性，但是，有关玉屏风在树突状细胞增殖和活化中的应用尚无报道。
【发明内容】
[0006] 为了解决上述技术问题，本发明提供了玉屏风的新用途，即在制药中的新用途。
[0007] 具体涉及在制备促进树突状细胞增殖及活化的药物中的应用。
[0008] 同时还涉及在制备减少炎性T细胞亚群增殖的药物中的应用。
[0009] 为了更好的理解本发明，结合药理实验来说明其在制药中的新用途。
[0010] 1?实验材料和方法 1.1实验材料 1.1.1实验动物 实验采用SPF级近交系BALB/c小鼠，6~8周龄，体重（21±1. 2)g，雌性，购于山东大 学实验动物中心，23~27°C，45~50%湿度无菌饲养，自由摄食饮水。
[0011]I. 1. 2中药玉屏风散的配伍及提取玉屏风散方药组成：君药防风（Divaricate SaposhnikoviaRoot，黑龙江）、臣药黄苗（MilkvetchRoot，内蒙古）、佐药白术（Largehead AtractylodesRh，浙江）按1:2:2比例配伍，先将3味药漂洗后加入8倍水，充分浸泡1小 时后，煮沸45min，滤取药液；再加入5倍水继续煮沸lh，滤取药液；重复煎煮三次，合并滤 取药液，水浴浓缩成膏状，依次加入65%、75%、85%的乙醇，沉淀过夜，滤取上清，采用水浴减 压法回收乙醇，获取玉屏风散制剂(含生药I. 2g/ml)。制剂分装后，灭菌后4°C冰箱保存。
[0012] 1.1. 3实验仪器 用于动物饲养、细胞培养、细胞检测、基因检测等相关实验仪器见表1。
[0013] LL4实验试剂及配置方法 荧光抗体：用于检测DC膜表面分子的多种抗体：FITC标记的大鼠抗小鼠CD86单克隆 抗体、PE标记的大鼠抗小鼠⑶80和IA-d(MHC-II)单克隆抗体均购自BDPharmingen公 司。PE_Cy5标记的大鼠抗小鼠⑶Ilc单克隆抗体购自eBioscience公司。用于小鼠T淋巴 细胞胞内外分子检测的多种荧光抗体：FITC标记的大鼠抗小鼠CD4、PE-Cy5标记的大鼠抗 小鼠CD3、PE标记的大鼠抗小鼠IFN-y、TNFa、IL-10、IL-17、IL-4等荧光抗体均购于BD Pharmingen公司。
[0014] 表1实验中常用仪器
【主权项】
1. 玉屏风在制备促进树突状细胞增殖的药物中的应用。
2. 玉屏风在制备促进树突状细胞活化的药物中的应用。
3. 玉屏风在制备减少炎性T细胞亚群增殖的药物中的应用。
【专利摘要】本发明涉及玉屏风在制药中的新用途。玉屏风具有促进树突状细胞增殖与活化中的作用,玉屏风参与诱导的树突状细胞具有更好的增殖能力和更强的抗原递呈能力，同时玉屏风还具有减少炎性T细胞亚群增殖的作用。
【IPC分类】A61P37-04, A61K36-481
【公开号】CN104758343
【申请号】CN201510182593
【发明人】姚成芳, 郭钰琪, 王丽, 李霞, 周宪宾, 郝钰, 张巧凤
【申请人】山东省医学科学院基础医学研究所
【公开日】2015年7月8日
【申请日】2015年4月17日