中的任一项的全部或一部分的流感HA和/或NA分子）。试 剂盒可以包含诊断核酸或多肽，例如抗体、探针组，例如作为包装于适合的容器中的cDNA 微阵列，或其他核酸，如一种或多种表达载体。试剂盒可以进一步包括一种或多种另外的试 剂，例如底物、标记、引物（用于标记表达产物）、试管和/或其他附件、用于收集样品的试 剂、缓冲剂、杂交室、盖玻片等。试剂盒任选地进一步包括详细说明使用试剂盒组件探索或 应用诊断设置等的优选方法的指令集或用户手册。
[0110] 当根据说明书使用时，可以将试剂盒例如用于评估疾病状态或病症、用于评估药 学试剂或其他治疗干预对细胞或生物的疾病状态或病症的进展的作用、或用于作为疫苗使 用等。
[0111] 试剂盒可以包括一种或多种翻译系统（例如，宿主细胞）与适当的包装材料、容器 以及指导性材料。此外，试剂盒可以包括各种疫苗，如包括SEQ ID NO: 1和3-8的HA和/ 或NA序列中的任一个的全部或一部分的减毒活疫苗（例如，FluMist)。 实施例
[0112] 实施例Al. -种重组流感病毒，该重组流感病毒包括编码血球凝集素多肽的第一 基因组区段，其中该血球凝集素多肽包括如示于SEQ ID NO: 1、SEQ ID N0:3或SEQ ID N0:4 中的氨基酸序列。
[0113] 实施例A2.如实施例Al所述的重组流感病毒，其中该血球凝集素包括如示于SEQ ID NO: 1中的氨基酸序列。
[0114] 实施例A3.如实施例A2所述的重组流感病毒，其中如示于SEQ ID NO: 1中的该血 球凝集素包括：
[0115] 在氨基酸残基位置125处的天冬氨酸；或
[0116] 在氨基酸残基位置127处的谷氨酸；或
[0117] 在氨基酸残基位置209处的谷氨酸；或
[0118] 在氨基酸残基位置125处的天冬氨酸以及在氨基酸残基位置127处的谷氨酸；或
[0119] 在氨基酸残基位置125处的天冬氨酸以及在氨基酸残基位置209处的谷氨酸；或
[0120] 在氨基酸残基位置127处的谷氨酸以及在氨基酸残基位置209处的谷氨酸；或
[0121] 在氨基酸残基位置125处的天冬氨酸、在氨基酸残基位置127处的谷氨酸以及在 氨基酸残基位置209处的谷氨酸。
[0122] 实施例A4.如实施例A2或A3中任一项所述的重组流感病毒，该重组流感病毒进 一步包括编码神经氨酸酶多肽的第二基因组区段，其中该神经氨酸酶多肽包括如示于SEQ ID NO:5中的氨基酸序列。
[0123] 实施例A5.如实施例Al所述的重组流感病毒，其中该血球凝集素包括如示于SEQ ID NO:3中的氨基酸序列。
[0124] 实施例A6.如实施例A5所述的重组流感病毒，其中如示于SEQ ID NO: 3中的该血 球凝集素包括：
[0125] 在氨基酸残基位置124处的亮氨酸；或
[0126] 在氨基酸残基位置125处的天冬氨酸；或
[0127] 在氨基酸残基位置127处的谷氨酸；或
[0128] 在氨基酸残基位置209处的谷氨酸；或
[0129] 在氨基酸残基位置124处的亮氨酸以及在氨基酸残基位置209处的谷氨酸；或
[0130] 在氨基酸残基位置125处的天冬氨酸以及在氨基酸残基位置209处的谷氨酸；或
[0131] 在氨基酸残基位置127处的谷氨酸以及在氨基酸残基位置209处的谷氨酸；或
[0132] 在氨基酸残基位置124处的亮氨酸、在氨基酸残基位置127处的谷氨酸以及在氨 基酸残基位置209处的谷氨酸；或
[0133] 在氨基酸残基位置125处的天冬氨酸、在氨基酸残基127处的谷氨酸以及在氨基 酸残基位置209处的谷氨酸。
[0134] 实施例A7.如实施例A6所述的重组流感病毒，其中如示于SEQ ID NO: 3中的该血 球凝集素包括：
[0135] 在氨基酸残基位置209处的谷氨酸；或
[0136] 在氨基酸残基位置124处的亮氨酸以及在氨基酸残基位置209处的谷氨酸；或
[0137] 在氨基酸残基位置127处的谷氨酸以及在氨基酸位置209处的谷氨酸。
[0138] 实施例A8.如实施例A5至A7中任一项所述的重组流感病毒，该重组流感病毒进 一步包括编码神经氨酸酶多肽的第二基因组区段，其中该神经氨酸酶多肽包括如示于SEQ ID NO:6中的氨基酸序列。
[0139] 实施例A9.如实施例Al所述的重组流感病毒，其中该血球凝集素包括如示于SEQ ID NO:4中的氨基酸序列。
[0140] 实施例A10.如实施例A9所述的重组流感病毒，其中如示于SEQ ID NO:4中的该 血球凝集素包括：
[0141] 在氨基酸残基位置125处的天冬氨酸；或
[0142] 在氨基酸残基位置127处的谷氨酸；或
[0143] 在氨基酸残基位置209处的谷氨酸；或
[0144] 在氨基酸残基位置125处的天冬氨酸以及在氨基酸位置127处的谷氨酸；或
[0145] 在氨基酸残基位置127处的谷氨酸以及在氨基酸残基位置209处的谷氨酸；或
[0146] 在氨基酸残基位置125处的天冬氨酸以及在氨基酸位置209处的谷氨酸；或
[0147] 在氨基酸残基位置125处的天冬氨酸、在氨基酸残基位置127处的谷氨酸以及在 氨基酸残基位置209处的谷氨酸。
[0148] 实施例All.如实施例A9或AlO中任一项所述的重组流感病毒，该重组流感病毒 进一步包括编码神经氨酸酶多肽的第二基因组区段，其中该神经氨酸酶多肽包括如示于 SEQ ID NO: 5、SEQ ID NO: 7 或 SEQ ID NO:8 中的氨基酸序列。
[0149] 实施例A12.如实施例All所述的重组流感病毒，其中该神经氨酸酶多肽包括如示 于SEQ ID NO:8中的氨基酸序列。
[0150] 实施例A13.如实施例A12所述的重组流感病毒，其中如示于SEQ ID NO:8中的该 神经氨酸酶多肽包括：
[0151] 在氨基酸残基位置222处的天冬酰胺；或
[0152] 在氨基酸残基位置241处的缬氨酸；或
[0153] 在氨基酸残基位置369处的天冬酰胺；或
[0154] 在氨基酸残基位置222处的天冬酰胺以及在氨基酸残基位置369处的天冬酰胺； 或
[0155] 在氨基酸残基位置241处的缬氨酸以及在氨基酸残基位置369处的天冬酰胺；或
[0156] 在氨基酸残基位置222处的天冬酰胺、在氨基酸残基241处的缬氨酸以及在氨基 酸残基位置369处的天冬酰胺。
[0157] 实施例A14.如实施例A13所述的重组流感病毒，其中如示于SEQIDNO:8中的该 神经氨酸酶多肽包括：
[0158] 在氨基酸残基位置369处的天冬酰胺；或
[0159] 在氨基酸残基位置222处的天冬酰胺、在氨基酸残基241处的缬氨酸以及在氨基 酸残基位置369处的天冬酰胺。
[0160] 实施例A15.如实施例A14所述的重组流感病毒，其中：
[0161] 如示于SEQ ID NO: 8中的该神经氨酸酶多肽包括在氨基酸残基位置222处的天冬 酰胺、在氨基酸残基241处的缬氨酸以及在氨基酸残基位置369处的天冬酰胺；并且
[0162] 如示于SEQ ID NO:4中的该血球凝集素多肽包括在氨基酸残基位置125处的天冬 氨酸以及在氨基酸残基位置127处的谷氨酸残基。
[0163] 实施例A16.如实施例A1-A15中任一项所述的重组流感病毒，该重组流感病毒进 一步包括一种流感病毒的六个内部基因组区段，该流感病毒具有减毒、温度敏感和冷适应 中的一种或多种的表型特征。
[0164] 实施例A17.如实施例A16所述的重组流感病毒，其中该六个内部基因组区段属于 甲型流感病毒/安阿伯/6/60。
[0165] 实施例A18.如实施例A1-A15中任一项所述的重组流感病毒，该重组流感病毒进 一步包括甲型/波多黎各/8/34的六个内部基因组区段。
[0166] 实施例A19.如实施例A1-A18中任一项所述的重组流感病毒，该重组流感病毒已 经被灭活。
[0167] 实施例A20.如实施例A1-A17中任一项所述的重组流感病毒，该重组流感病毒是 减毒活的。
[0168] 实施例A21. -种免疫原性组合物，包括如实施例A19或A20所述的重组流感病 毒。
[0169] 实施例A22.-种疫苗，包括如实施例A21所述的免疫原性组合物。
[0170] 实施例A23.如实施例A22所述的疫苗，该疫苗进一步包括至少一种其他的重组流 感病毒。
[0171] 实施例A24.如实施例A22所述的疫苗，该疫苗进一步包括：包含H3N2甲型流感株 HA和NA抗原的重组流感病毒、包含山县乙型流感株HA和NA抗原的重组流感病毒以及包含 维多利亚乙型流感株HA和NA抗原的重组流感病毒。
[0172] 实施例BI.-种产生如实施例A2所述的重组流感病毒的方法，该方法包括：
[0173] (a)向能够支持流感病毒的复制的宿主细胞群体中引入多个载体，该多个载体包 括对应于第一流感株的至少6个内部基因组区段和第一基因组区段的核苷酸序列，该第一 基因组区段产生包含SEQ ID NO: 1的氨基酸序列的血球凝集素多肽；
[0174] (b)培养该宿主细胞群体；并且
[0175] (C)回收该流感病毒。
[0176] 实施例B2.如实施例Bl所述的方法，其中包含SEQ ID NO: 1的氨基酸序列的该血 球凝集素多肽包括：
[0177] 在氨基酸残基位置125处的天冬氨酸；或
[0178] 在氨基酸残基位置127处的谷氨酸；或
[0179] 在氨基酸残基位置209处的谷氨酸；或
[0180] 在氨基酸残基位置125处的天冬氨酸以及在氨基酸残基位置127处的谷氨酸；或
[0181] 在氨基酸残基位置125处的天冬氨酸以及在氨基酸残基位置209处的谷氨酸；或
[0182] 在氨基酸残基位置127处的谷氨酸以及在氨基酸残基位置209处的谷氨酸；或
[0183] 在氨基酸残基位置125处的天冬氨酸、在氨基酸残基位置127处的谷氨酸以及在 氨基酸残基位置209处的谷氨酸。
[0184] 实施例B3.如实施例Bl或B2所述的方法，该方法在步骤（a)处进一步包括引入 对应于第二基因组区段的核苷酸序列，该第二基因组区段产生包含SEQ ID N0:5的氨基酸 序列的神经氨酸酶多肽。
[0185] 实施例B4. -种产生如实施例A5所述的重组流感病毒的方法，该方法包括：
[0186] (a)向能够支持流感病毒的复制的宿主细胞群体中引入多个载体，该多个载体包 括对应于第一流感株的至少6个内部基因组区段和第一基因组区段的核苷酸序列，该第一 基因组区段产生包含SEQ ID N0:3的氨基酸序列的血球凝集素多肽；
[0187](b)培养该宿主细胞群体；并且
[0188] (C)回收该流感病毒。
[0189] 实施例B5.如实施例M所述的方法，其中包含SEQ ID NO: 3的氨基酸序列的该血 球凝集素多肽包括：
[0190] 在氨基酸残基位置124处的亮氨酸；或
[0191] 在氨基酸残基位置125处的天冬氨酸；或
[0192] 在氨基酸残基位置127处的谷氨酸；或
[0193] 在氨基酸残基位置209处的谷氨酸；或
[0194] 在氨基酸残基位置124处的亮氨酸以及在氨基酸残基位置209处的谷氨酸；或
[0195] 在氨基酸残基位置125处的天冬氨酸以及在氨基酸残基位置209处的谷氨酸；或
[0196] 在氨基酸残基位置127处的谷氨酸以及在氨基酸残基位置209处的谷氨酸；或
[0197] 在氨基酸残基位置124处的亮氨酸、在氨基酸残基位置127处的谷氨酸以及在氨 基酸残基位置209处的谷氨酸；或
[0198] 在氨基酸残基位置125处的天冬氨酸、在氨基酸残基127处的谷氨酸以及在氨基 酸残基位置209处的谷氨酸。
[0199] 实施例B6.如实施例B5所述的方法，其中如示于SEQ ID NO: 3中的该血球凝集素 包括：
[0200] 在氨基酸残基位置209处的谷氨酸；或
[0201] 在氨基酸残基位置124处的亮氨酸以及在氨基酸残基位置209处的谷氨酸；或
[0202] 在氨基酸残基位置127处的谷氨酸以及在氨基酸位置209处的谷氨酸。
[0203] 实施例B7.如实施例B4-B6中任一项所述的方法，该方法在步骤（a)处进一步包 括引入对应于第二基因组区段的核苷酸序列，该第二基因组区段产生包含SEQ ID NO:6的 氨基酸序列的神经氨酸酶多肽。
[0204] 实施例B8. -种产生如实施例A9所述的重组流感病毒的方法，该方法包括：
[0205] (a)向能够支持流感病毒的复制的宿主细胞群体中引入多个载体，该多个载体包 括对应于第一流感株的至少6个内部基因组区段和第一基因组区段的核苷酸序列，该第一 基因组区段产生包含SEQ ID N0:4的氨基酸序列的血球凝集素多肽；
[0206] (b)培养该宿主细胞群体；并且
[0207] (C)回收该流感病毒。
[0208] 实施例B9.如实施例B8所述的方法，其中包含SEQIDNO:4的氨基酸序列的该血 球凝集素多肽包括：
[0209] 在氨基酸残基位置125处的天冬氨酸；或
[0210] 在氨基酸残基位置127处的谷氨酸；或
[0211] 在氨基酸残基位置209处的谷氨酸；或
[0212] 在氨基酸残基位置125处的天冬氨酸以及在氨基酸位置127处的谷氨酸；或
[0213] 在氨基酸残基位置127处的谷氨酸以及在氨基酸残基位置209处的谷氨酸；或
[0214] 在氨基酸残基位置125处的天冬氨酸以及在氨基酸位置209处的谷氨酸；或
[0215] 在氨基酸残基位置125处的天冬氨酸、在氨基酸残基位置127处的谷氨酸以及在 氨基酸残基位置209处的谷氨酸。
[0216] 实施例B10.如实施例B8或B9所述的方法，该方法在步骤（a)处进一步包括引入 对应于第二基因组区段的核苷酸序列，该第二基因组区段产生包含SEQ ID NO: 5或SEQ ID N0:7或SEQ ID N0:8的氨基酸序列的神经氨酸酶多肽。
[0217] 实施例BlL如实施例BlO所述的方法，其中该神经氨酸酶多肽包括SEQIDN0:8 的氨基酸序列。
[0218] 实施例B12.如实施例Bll所述的方法，其中如示于SEQ ID N0:8中的该神经氨酸 酶多肽包括：
[0219] 在氨基酸残基位置222处的天冬酰胺；或
[0220] 在氨基酸残基位置241处的缬氨酸；或
[0221] 在氨基酸残基位置369处的天冬酰胺；或
[0222] 在氨基酸残基位置222处的天冬酰胺以及在氨基酸残基位置369处的天冬酰胺； 或
[0223] 在氨基酸残基位置241处的缬氨酸以及在氨基酸残基位置369处的天冬酰胺；或
[0224] 在氨基酸残基位置222处的天冬酰胺、在氨基酸残基241处的缬氨酸以及在氨基 酸残基位置369处的天冬酰胺。
[0225] 实施例B13.如实施例B12所述的方法，其中如示于SEQ ID NO:8中的该神经氨酸 酶多肽包括：
[0226] 在氨基酸残基位置369处的天冬酰胺；或
[0227] 在氨基酸残基位置222处的天冬酰胺、在氨基酸残基241处的缬氨酸以及在氨基 酸残基位置369处的天冬酰胺。
[0228] 实施例B14.如实施例B13所述的方法，其中：
[0229] 如示于SEQ ID NO: 8中的该神经氨酸酶多肽包括在氨基酸残基位置222处的天冬 酰胺、在氨基酸残基241处的缬氨酸以及在氨基酸残基位置369处的天冬酰胺；并且
[0230] 如示于SEQ ID NO:4中的该血球凝集素多肽包括在氨基酸残基位置125处的天冬 氨酸以及在氨基酸残基位置127处的谷氨酸残基。
[0231] 实施例Cl. 一种提高甲型流感病毒在鸡胚中的复制能力的方法，该方法包括：
[0232] 将对应于氨基酸残基位置125、127和209 (Hl编号）的一个或多个血球凝集素氨 基酸残基变为非天然存在的酸性氨基酸残基；
[0233] 从而提高该流感病毒的复制能力。
[0234] 实施例C2.如实施例C2所述的方法，其中该改变包括：
[0235] 用天冬氨酸取代位置125处的氨基酸残基；或
[0236] 用谷氨酸取代位置127处的氨基酸残基；或
[0237] 用谷氨酸取代位置209处的氨基酸残基；或
[0238] 用天冬氨酸取代位置125处的氨基酸残基并用谷氨酸取代位置127处的氨基酸残 基；或
[0239] 用天冬氨酸取代位置125处的氨基酸残基并用谷氨酸取代位置209处的氨基酸残 基；或
[0240] 用谷氨酸取代位置127处的氨基酸残基并用谷氨酸取代位置209处的氨基酸残 基；或
[0241] 用天冬氨酸取代位置125处的氨基酸残基、用谷氨酸取代位置127处的氨基酸残 基并用谷氨酸取代位置209处的氨基酸残基。
[0242] 实施例C3.如实施例Cl或C2所述的方法，该方法进一步包括将对应于氨基酸位 置222、241或369 (NI编号）的一个或多个神经氨酸酶氨基酸残基变为非天然存在的氨基 酸残基，其中该改变包括：
[0243] 用天冬酰胺取代位置222处的氨基酸残基；或
[0244] 用缬氨酸取代位置241处的氨基酸残基；或
[0245] 用天冬酰胺取代位置369处的氨基酸残基；或
[0246] 用天冬酰胺取代位置222处的氨基酸残基并用缬氨酸取代位置241处的氨基酸残 基；或
[0247] 用天冬酰胺取代位置222处的氨基酸残基并用天冬酰胺取代位置369处的氨基酸 残基；或
[0248] 用缬氨酸取代位置241处的氨基酸残基并用天冬酰胺取代位置369处的氨基酸残 基；或
[0249] 用天冬酰胺取代位置222处的氨基酸残基并用缬氨酸取代位置241处的氨基酸残 基并用天冬酰胺取代位置369处的氨基酸残基。
[0250] 实施例C4.如实施例Cl至C3中任一项所述的方法，其中该甲型流感病毒是流感 HlNl病毒。
[0251] 实施例C5. -种由实施例Cl至C4中任一项所述的方法产生的甲型流感病毒。
[0252] 实施例C6.如实施例C5所述的甲型流感病毒，该甲型流感病毒已经被灭活。
[0253] 实施例C7.如实施例C5所述的甲型流感病毒，该甲型流感病毒是减毒活的。
[0254] 实施例C9. 一种免疫原性组合物，包括如实施例C6或C7所述的甲型流感病毒。
[0255] 实施例C10.-种疫苗，包括根据实施例C9所述的免疫原性组合物。
[0256] 实施例DL-种提高甲型流感病毒在鸡胚中的复制能力的方法，该方法包括：
[0257] 将对应于氨基酸位置222、241和369 (NI编号）的一个或多个神经氨酸酶氨基酸 残基变为非天然存在的氨基酸残基，其中该改变包括：
[0258] 用天冬酰胺取代位置222处的氨基酸残基；或
[0259] 用缬氨酸取代位置241处的氨基酸残基；或
[0260] 用天冬酰胺取代位置369处的氨基酸残基；或
[0261] 用天冬酰胺取代位置222处的氨基酸残基并用缬氨酸取代位置241处的氨基酸残 基；或
[0262] 用天冬酰胺取代位置222处的氨基酸残基并用天冬酰胺取代位置369处的氨基酸 残基；或
[0263] 用缬氨酸取代位置241处的氨基酸残基并用天冬酰胺取代位置369处的氨基酸残 基；或
[0264] 用天冬酰胺取代位置222处的氨基酸残基并用缬氨酸取代位置241处的氨基酸残 基并用天冬酰胺取代位置369处的氨基酸残基。
[0265] 从而提高该流感病毒的复制能力。
[0266] 实施例D2.如实施例Dl所述的方法，其中该甲型流感病毒是流感HlNl病毒。
[0267] 实施例D3.-种由实施例Dl或D2中任一项所述的方法产生的甲型流感病毒。
[0268] 实施例D4.如实施例D3所述的甲型流感病毒，该甲型流感病毒已经被灭活。
[0269] 实施例D5.如实施例D4所述的甲型流感病毒，该甲型流感病毒是减毒活的。
[0270] 实施例D6.-种免疫原性组合物，包括如实施例D4或D5所述的甲型流感病毒。
[0271] 实施例D7. -种疫苗，包括根据实施例D6所述的免疫原性组合物。
[0272] 实施例EL-种分离的血球凝集素多肽，包括如示于SEQIDNO: 1、SEQIDNO:3 或SEQIDNO:4中的氨基酸序列。
[0273] 实施例E2.如实施例El所述的分离的血球凝集素多肽，包括如示于SEQ ID NO: 1 中的氨基酸序列。
[0274] 实施例E3.如实施例E2所述的分离的血球凝集素多肽，其中如示于SEQIDNO: 1 中的氨基酸序列包括：
[0275] 在氨基酸残基位置125处的天冬氨酸；或
[0276] 在氨基酸残基位置127处的谷氨酸；或
[0277] 在氨基酸残基位置209处的谷氨酸；或
[0278] 在氨基酸残基位置125处的天冬氨酸以及在氨基酸残基位置127处的谷氨酸；或
[0279] 在氨基