用于治疗视网膜变性的方法和组合物的制作方法
【专利说明】用于治疗视网膜变性的方法和组合物
[0001] 相关申请的交叉参考
[0002] 本申请要求2012年10月9日提交的美国临时申请号US61/711，665的利益，将该 文献的公开内容完整地引入本文参考。
[0003] 关于联邦政府支持的声明
[0004] 不适用。
[0005] 领域
[0006] 本申请属于用于视网膜变性的细胞疗法领域，所述视网膜变性例如发生在色素性 视网膜炎和年龄相关性黄斑变性（AMD)中。
[0007] 背景
[0008] 例如，因脉络膜新血管生成（"湿AMD"）或视网膜与脉络膜之间的细胞碎片累 积（"干AMD"）导致的视网膜变性是当今世界中失明的主要原因。Cai等人(2012)Front Biosci. 17:1976-95〇类似地，当色素性视网膜炎发生时，感光细胞（视杆和视锥）变性和 死亡也可以导致视力退化和/或视盲。因此，在恢复感光细胞功能的具体治疗中阻断和/ 或逆转视网膜变性的疗法是需要的。
[0009] 概述
[0010] 本文公开了使用由骨髓贴壁干细胞（MASCs)传代的细胞治疗视网膜变性的方法 和组合物，所述骨髓贴壁干细胞已经被改造以表达外源性Notch胞内结构域。这样的细胞 称作用于本公开目的的SB623细胞。
[0011] 在一个方面中，本文公开了通过对需要的受试者眼施用SB623细胞治疗视网膜变 性的方法。
[0012] 在另一个方面中，本文公开了增加受试者眼中感光细胞活性的方法，所述方法包 含对受试者眼施用SB623细胞，使得感光细胞活性增加。
[0013] 在另一个方面中，本文公开了增强受试者眼中感光细胞功能的方法，所述方法包 含对受试者眼施用SB623细胞，使得感光细胞功能增强。
[0014] 在另一个方面中，本文公开了增强视觉信号从视网膜到脑视觉皮质传送的方法， 所述方法包含对受试者眼施用SB623细胞，使得视觉信号从视网膜到脑视觉皮质的传送增 强。
[0015] 在本文所述的任意方法中，可以通过任意递送方法施用所述细胞，包括直接注射、 局部施用等。在一些实施方案中，例如，将SB623细胞作为包含该细胞与一种或多种药用载 体的组合物（或制剂）施用。此外，所述方法可以包括以相同或不同制剂的形式反复施用 SB623细胞。
[0016] 因此，本公开特别提供了如下实施方案：
[0017] 1.对需要的受试者治疗视网膜变性的方法，该方法包含对所述受试者施用SB623 细胞。
[0018] 2.实施方案1的方法，其中将SB623细胞移植入受试者眼。
[0019] 3.实施方案1或2任一项的方法，其中所述移植是玻璃体内移植。
[0020] 4.实施方案1或2任一项的方法，其中所述移植是视网膜下移植。
[0021] 5.实施方案1-4任一项的方法，其中所述视网膜变性发生在色素性视网膜炎中。
[0022] 6.实施方案1-4任一项的方法，其中所述视网膜变性发生在年龄相关性黄斑变性 (AMD)中。
[0023] 对本领域技术人员而言，这些和其它方面根据作为整体的公开内容显而易见。
[0024] 附图简述
[0025] 图1显示来自出生后4周（治疗前，上部组群）、出生后8周（治疗后4周，来自 上部第二组群）和出生后12周（治疗后8周，来自上部的第三组群）时RCS大鼠眼的有代 表性的视网膜电流图（ERG)痕迹。在出生后4周时通过玻璃体内注射1.5x 105SB623细胞 (右侧的组）或PBS(左侧的组）治疗大鼠。下部的组群显示，对于出生后4周时通过玻璃 体内注射I. 5x 105SB623细胞（右侧的组）或PBS (左侧的组）治疗的大鼠，在出生后12周 时（治疗后8周）如根据叠氮化物响应测定的感光细胞活性。
[0026] 图2，A和B组，其显示描述来自出生后4、5、6、8和12周时（即治疗前和治疗后1、 2、4和8周时）取得的RCS大鼠的视网膜电流图a-波（图2A)与b-波（图2B)之间的相对 振幅的一组示意图。对于每一组的棒形图，最左侧的棒形图代表首次用于实验的（即未治 疗的）动物的值。继续向右，其余的棒形图代表通过玻璃体内注射媒介物、〇. 375x 105SB623 细胞、0. 75x 105SB623细胞和1.5x 105SB623细胞治疗的动物的值。括号内的数字表示所 分析的眼数量。将治疗前的值设定为100%。
[0027] 图3是显示出生后12周时（治疗后8周）RCS大鼠眼中叠氮化物响应的振幅（以 微伏计）的示意图。未进行治疗（"首次用于实验的动物"）得动物或对4周龄动物进行玻 璃体内注射 PBS("媒介物"）、0. 375x 105SB623 细胞、0. 75x 105SB623 细胞或 I. 5x 105SB623 细胞。括号内的数字表示所分析的眼数量。
[0028] 图4, A和B组，其显示在治疗后9周时RCS大鼠视网膜的苏木素和曙红（H&E)-染 色的切片。图4B显示来自出生后4周时通过玻璃体内注射1.5x 105SB623细胞治疗的大鼠 眼的切片。图4A显示来自出生后4周时通过玻璃体内注入PBS的对照大鼠眼的切片。发 育良好的外核层（图中显示的"0NL"）存在于SB623-治疗的眼中，但在媒介物治疗的眼中 不存在。
[0029] 图5，A-D组，其显示来自玻璃体内注射1.5x 105SB623细胞后9周（出生后13周） 的RCS大鼠视网膜的切片。图5A和5C显示H&E-染色的切片；图5B和显示用抗-人线 粒体抗体染色（绿色）并用核-特异性染料DAPI复染（蓝色）的切片。两个上面的组显 示包含玻璃体内SB623细胞团的切片。两个下面的组显示视网膜切片，其中可以在视网膜 的内界膜上观察到SB623细胞。
[0030] 图6显不来自出生后4周（治疗如，上部组群）、出生后8周（治疗后4周，来自 上部第二组群）和出生后28周（治疗后24周，来自上部的第三组群）时RCS大鼠眼的有 代表性的视网膜电流图（ERG)痕迹。在出生后4周时通过视网膜下注射1.5x 105SB623细 胞（右侧的组）或PBS(左侧的组）治疗大鼠。下部的组群显示，对于出生后4周时通过视 网膜下注射1.5x 105SB623细胞（右侧的组）或I3BS (左侧的组）治疗的大鼠，在出生后28 周时（治疗后24周）如根据叠氮化物响应测定的感光细胞活性。
[0031] 图7, A和B组，其显示描述来自治疗前和治疗后4、8、12、16、20和24周时取得的 RCS大鼠的视网膜电流图a-波（图7A)与b-波（图7B)之间的相对振幅的一组示意图。 对于每一组的棒形图，最左侧的棒形图代表首次用于实验的（即未治疗的）动物的值；中间 的棒形图代表通过视网膜下注射媒介物治疗的动物的值；且最右侧的棒形图代表通过视网 膜下注射1.5x 105SB623细胞治疗的动物的值。括号内的数字表示所分析的眼数量。将治 疗前的振幅设定为100%。
[0032] 图8是显示治疗后4、8、12、16、20和24周时RCS大鼠眼中叠氮化物响应的振幅 (以微伏计）的示意图。对于每组3个棒形图，最左侧的棒形图代表首次用于实验的（即未 治疗的）动物的值；中间的棒形图代表通过视网膜下注射媒介物治疗的动物的值；且最右 侧的棒形图代表通过视网膜下注射1.5x 105SB623细胞治疗的动物的值。括号内的数字表 示所分析的眼数量。
[0033] 图9显示来自首次用于实验的、媒介物治疗的和SB623细胞治疗的RCS大鼠的视 网膜下移植后26周取得的视觉诱发电位（VEP)痕迹。
[0034] 图10, A和B组，其显示在治疗后27周时RCS大鼠视网膜的苏木素和曙红 (H&E)-染色的切片。图IOB显示来自出生后4周时通过视网膜下注射1.5x 105SB623细胞 治疗的大鼠眼的切片。图IOA显示来自出生后4周时通过视网膜下注入PBS的对照大鼠眼 的切片。发育良好的外核层（图中显示的"0NL"）存在于SB623-治疗的眼中，但在媒介物 治疗的眼中不存在。
[0035] 图11，A和B组，其显示来自视网膜下注射1.5x 105SB623细胞后27周（出生后 31周）的RCS大鼠视网膜的切片。图IlA显示H&E-染色的切片；图IlB显示用抗-人线粒 体抗体染色（绿色）并且用核-特异性染料DAPI复染（蓝色）的切片。移植的SB623细 胞在图IlA中可见（箭头）。
[0036] 详细描述
[0037] 本文公开了用于治疗视网膜变性和视网膜变性病症的方法和组合物。特别地，将 SB623细胞（通过用编码Notch胞内结构域的序列转染间充质干细胞得到的细胞）移植入 发生视网膜变性（或患有视网膜变性病症）的受试者眼可以预防视网膜变性并且导致视网 膜功能长期恢复。
[0038] 除非另有指示，否则本公开的实施使用细胞生物学、毒理学、分子生物学、生物 化学、细胞培养、免疫学、肿瘤学、重组DNA领域和相关领域的标准方法和常规技术。这 样的技术描述在文献中且由此为本领域技术人员可以得到。例如，参见：Alberts，B.等 人，"Molecular Biology of the Cell,"第 5 版，Garland Science，New York，NY，2008; Voet, D.等人 "Fundamentals of Biochemistry ：Life at the Molecular Level, " 第 3 版，John Wiley&Sons，Hoboken, NJ，2008 ;Sambrook，J.等人，"Molecular Cloning :A Laboratory Manual, "第 3 版，Cold Spring Harbor Laboratory Press,2001 ；Ausubel, F. 等人，"Current Protocols in Molecular Biology," John Wiley&Sons, New York, 1987 和最新期刊杂