一种雷公藤免疫纳米粒及用图
【技术领域】
[0001]本发明涉及生物医药技术领域，具体地说，是一种雷公藤免疫纳米粒及用途。
【背景技术】
[0002]肥大细胞和嗜碱性粒细胞是过敏反应的主要效应细胞，细胞表面表达特异性受体IgE高亲和力受体(Fe ε RI)，该受体可与IgE高亲和力结合，当多价抗原与细胞表面的IgE结合后，多个Fe ε RI受体分子发生交联，导致细胞的活化和生物活性物质的释放，发生I型超敏反应。近年来越来越多的研宄证实，肥大细胞还参与其他多种疾病的发生和发展，如肥大细胞增多症、肿瘤、自身免疫性疾病和心血管疾病。肥大细胞和嗜碱性粒细胞凋亡可能是治疗过敏及肥大细胞相关疾病的有效手段。
[0003]雷公藤来源于植物雷公藤的根部，是临床上治疗自身免疫性疾病的有效药物。
[0004]雷公藤含有多种活性成分，如三萜类、二萜类和生物碱类。研宄表明雷公藤具有抗炎、抗神经退行性变和抗肿瘤的作用。近年来研宄发现，雷公藤及其单体成分具有肥大细胞凋亡作用，其主要作用机制是使促凋亡基因(baX、c-myc)表达增加，使抗凋亡基因(bcl_2)的表达减少。在体内，肥大细胞凋亡形成的凋亡小体可被巨噬细胞吞噬，而不引起颗粒内容物释放。因此，雷公藤及单体成分可能成为过敏性疾病或者肥大细胞相关疾病治疗的理想药物。
[0005]然而，雷公藤难溶于水，制成药物制剂有一定困难。此外，雷公藤对细胞的凋亡作用是非组织、器官和细胞特异的，这些特性导致了雷公藤体内应用时的毒副反应，特别是对生殖的抑制，使其临床应用范围受到极大限制。因此，如何克服雷公藤的水不溶性和毒性、增加生物利用度是目前亟待解决的问题。而制备靶向给药系统成了雷公藤临床应用的关键。
[0006]纳米材料在生物领域的应用为药物的研发提供了广阔的平台。纳米载体具有增溶、生物相容性好、缓释、循环时间长、靶向性等优点，在生物制药领域应用广泛，目前常用的纳米载体有脂质体、树枝状聚合物、纳米碳管和磁性纳米粒、聚合物纳米粒子。
[0007]Fe ε RI是IgE高亲和力受体，是由α、β和两个γ亚单位组成的四聚体，α链是IgE的结合部位，主要表达于肥大细胞和嗜碱性粒细胞表面，并且在疾病状态时肥大细胞膜表面的受体的表达量显著增加。Fe ε RI表达的局限性、疾病状态表达量增加的特性、Fe ε RI α为IgE结合部位的生物优越性使其成为肥大细胞有效的靶分子。
[0008]关于本发明的一种雷公藤免疫纳米粒及用途目前还未见报道，本发明以纳米材料为载体，包裹雷公藤，偶联抗Fe ε RI α抗体，构建雷公藤-纳米-抗人Fe ε RI α单抗三聚物，所形成的雷公藤免疫纳米粒既可以增加雷公藤的溶解度，提高药物的生物利用度；又能将雷公藤定向携带至表达Fe ε RI的肥大细胞或嗜碱性粒细胞使其凋亡，从而可以有效地缓解过敏性炎症和过敏症状，降低毒副作用。
【发明内容】
[0009]本发明的目的是针对现有技术中的不足，提供一种雷公藤免疫纳米粒。
[0010]本发明的再一的目的是，提供一种雷公藤免疫纳米粒的制备方法。
[0011]本发明的另一的目的是，提供一种雷公藤免疫纳米粒的用途。
[0012]为实现上述目的，本发明采取的技术方案是:一种雷公藤免疫纳米粒，所述的雷公藤免疫纳米粒为包封了细胞凋亡诱导剂的纳米粒，所述的细胞凋亡诱导剂为雷公藤或雷公藤单体成分，所述的纳米粒表面有抗体修饰。
[0013]所述的雷公藤单体成分为雷公藤红素、雷公藤酮、雷酚酮内酯、雷公藤对醌A、雷公藤三萜酸B、雷公藤内酯甲、雷公藤内酯乙、雷公藤内酯醇、雷公藤内酯二醇、雷公藤内酯酮、雷公藤喊戊、雷公藤内醋、雷公藤吉喊、雷公藤特喊、雷公藤次喊、雷公藤春喊、雷公藤晋喊、雷公藤灵碱、雷公藤增碱或雷公藤异春碱。
[0014]所述的雷公藤免疫纳米粒的载体材料为聚合物纳米粒子、脂质体、树枝状聚合物、磁性纳米粒或纳米碳管。
[0015]所述的抗体为识别并结合肥大细胞和嗜碱性粒细胞表面IgE高亲和力受体α链的抗体或者抗体Fab片段或者人源化抗体或者单链抗体。
[0016]所述的抗体为抗人Fe ε RI α抗体、抗人Fee RIa抗体Fab片段、人源化抗人Fe ε RI α抗体、抗鼠Fe ε RI α抗体、抗鼠Fe ε RI α抗体Fab片段、单链抗人Fe ε RI α抗体或单链抗鼠Fe ε RI α抗体。
[0017]所述的雷公藤免疫纳米粒通过如下方法制得:由雷公藤和羧基修饰的纳米材料反应制得羧基修饰的雷公藤纳米粒，然后与抗Fe ε RI α单抗反应制得抗Fe ε RI α单抗-纳米粒-雷公藤三聚物，即雷公藤免疫纳米粒。
[0018]为实现上述第二个目的，本发明采取的技术方案是:一种雷公藤免疫纳米粒的制备方法，所述的制备方法包括以下步骤:
[0019]a)将纳米材料包裹细胞凋亡诱导剂得到雷公藤纳米粒；
[0020]b)将抗体和雷公藤纳米粒连接得到内包裹雷公藤外连接抗体的雷公藤免疫纳米粒。
[0021]为实现上述第三个目的，本发明采取的技术方案是:所述的雷公藤免疫纳米粒在制备治疗肥大细胞或嗜碱性粒细胞相关的疾病的药物中的应用。
[0022]所述的肥大细胞相关疾病为过敏性疾病、肥大细胞增多症、器官纤维化、自身免疫病、心血管疾病或肿瘤。
[0023]本发明优点在于:
[0024]本发明中雷公藤免疫纳米粒的用途为特异地诱导表达Fe ε RI α阳性细胞凋亡，包括肥大细胞和嗜碱性粒细胞，治疗肥大细胞相关疾病包括过敏性疾病、肥大细胞增多症、肿瘤、自身免疫性疾病和心血管疾病。
【具体实施方式】
[0025]下面结合实施例对本发明提供的【具体实施方式】作详细说明。
[0026]实施例1羧基修饰的雷公藤红素胶束的制备
[0027]称取雷公藤红素和羧基修饰的Pluronic Ρ123嵌段共聚物，加入二氯甲烷搅拌至完全溶解，蒸发至有机溶剂完全蒸干，真空干燥过夜去除残留溶剂，获得干燥药膜。加入PBS重悬，去除未包封的雷公藤红素，获得羧基修饰的雷公藤红素胶束。
[0028]实施例2雷公藤红素免疫胶束的制备
[0029]取羧基修饰的雷公藤红素胶束，加入适量EDC，室温条件下活化15min ;取已活化的雷公藤红素胶束，加入抗Fe ε RI α单抗Fab，室温反应2小时，获得抗Fe ε RI α单抗Fab-胶束-雷公藤红素三聚物，即雷公藤红素免疫胶束。