抑制活化的t-细胞中il-22表达的方法
【专利说明】抑制活化的T-细胞中IL-22表达的方法 发明领域
[0001] 本发明涉及抑制活化和分化的人T-细胞中白介素-22表达的方法以及该方法中 所用的药物组合物。
[0002] 发明背景
[0003] 磷酸二酯酶是在细胞中催化环AMP和/或环GMP分别水解成5-AMP和5-GMP 的酶，因此它们对细胞调节cAMP或cGMP水平至关重要。在目前鉴定的11种磷酸二酯 酶中，磷酸二酯酶（PDE)4、TOE7和TOE8是选择性作用于cAMP。TOE4是cAMP在免疫和 炎性细胞例如中性粒细胞、巨噬细胞和T-淋巴细胞中表达的最重要调节剂（Z. Huang和 J.A. Mancini, Current MedChem. 13,2006,第 3253-3262 页）。由于 cAMP是调节炎性应 答的一个重要的第二信使，发现TOE4通过调节促炎细胞因子例如TNFa、IL-2、IFN-γ、 GM-CSF和LTB4而调节炎性细胞的炎性应答。因此，抑制TOE4成为治疗炎性疾病例如哮喘、 慢性阻塞性肺病（COPD)、类风湿性关节炎、特应性皮炎、克隆病等的一个具有吸引力的靶标 (M.D. Houslay 等人，Drug Discovery Today 10(22),2005,第 1503-1519 页；N.Press&K. H. Banner, Progress in Medicinal Chemistry 47,2009，第 37-74 页）。由于特应性皮 炎（AD)患者具有升高的PDE活性，TOE4抑制也成为AD的一种可行的治疗（Journal of Investigative Dermatology(1986)，87(3)，372-6 ;Ν·Ishii 等人，J. Pharmacol. Exper. Ter.346, 2013,第 105-112 页）。
[0004] H)E4基因家族至少由4种基因 A、B、C和D组成，其具有高度的同源性（V. Boswell Smith和D.Spina，Cur:r.0pinion Investig.Drugs 6(11),2006,第 1136-1141 页）。这4 种TOE4同种型在不同组织和细胞类型中差异表达。因此，PDE4B主要在单核细胞和中性 粒细胞中表达，但在皮质和上皮细胞中不表达，而TOE4D在肺、皮质、小脑和T-细胞中表达 (C. Kroegel 和 M. Foerster，Exp.Opinion Investig.Drugs 16 (1) ,2007，第 109-124 页）〇 [0005] 很多TOE4抑制剂已经在炎性疾病、严重的哮喘、炎性肠病和COPD上研宄它们的治 疗效果。首先，茶碱是一种较弱的非选择性磷酸二酯酶抑制剂，用于治疗呼吸疾病，例如哮 喘和C0PD。然而，茶碱治疗会产生轻度和重度副作用，例如心律失常和惊厥，从而限制了茶 碱的临床应用（Kroegel和Foerster,同上）。由于磷酸二醋酶4仍是抗炎治疗的一个具 有吸引力的靶标，开发了数种更具选择性的TOE4抑制剂，并且在临床进行研宄。由于剂量 限制的副作用、严重的恶心和呕吐，临床开发的很多第一代TOE4抑制剂例如咯利普兰已停 用。具有明显较少副作用的第二代TOE4抑制剂目前用于临床试验（Houslay，同上）。
[0006] 表现出TOE4抑制活性的化合物被用作治疗剂，用于全身治疗炎性变应性疾病例 如支气管哮喘、C0PD、变应性鼻炎和肾炎；自身免疫疾病例如类风湿性关节炎、多发性硬化、 克隆病和系统性红斑狼疮；中枢神经系统疾病例如抑郁、遗忘症和痴呆；与心力衰竭、休克 和脑血管疾病等引起的缺血回流相关的器官病；胰岛素抵抗性糖尿病；创伤；和其它其中 炎症在疾病的病因或进程中发挥作用的疾病。
[0007] 表现出TOE4抑制活性的化合物还可以有益于预防、治疗或改善多种皮肤疾病或 病症，例如增生性和炎性皮肤障碍，并且特别是银肩病、表皮炎症、脱发、皮肤萎缩、类固醇 诱导的皮肤萎缩、皮肤老化、光皮肤老化、痤疮、皮炎、特应性皮炎、脂溢性皮炎、接触性皮 炎、荨麻瘆、瘙痒症和湿瘆。
[0008] 发生银肩病的一个病因是活化的免疫细胞例如Thl和Thl7细胞的皮肤渗透，所述 的细胞表达细胞因子，其在银肩病斑块中诱导自身永久存在的炎性循环。特别是，细胞因子 TNFa、IL-17和IL-22表现出对银肩病发生和进程至关重要。使用已经活化和分化成Thl/ Thl7表型的人外周血T-细胞的体外分析被开发用于评价试验化合物的抗炎作用，通过测 量它们对细胞因子表达的作用。
[0009] 在进行本发明研宄的过程中，令人惊讶地发现当在Thl/Thl7分析中试验TOE4抑 制剂时，它们上调促炎细胞因子IL-22的表达，在较小程度上上调IL-17的表达。在银肩病 和特应性皮炎的患者中IL-22的表达上调很高，强化了它在慢性皮肤炎性病症中的作用。 通过非造血源细胞例如上皮细胞（包括角质细胞、内皮细胞和成纤维细胞）表达的受体， IL-22在诱导角质细胞的修饰的增殖和分化以及炎性分子例如MCH I类、IL-6和IL-8的表 达中发挥重要作用，从而促进皮肤炎症。化合物（作为抗炎药物，具有治疗功效）引起促炎 细胞因子预料不到的上调为与另一种能下调IL-22表达的治疗活性化合物的同时治疗提 供了基本原理。
[0010] 发明概述
[0011] 使用活化的人T-细胞分化成Thl/Thl7细胞的体外分析发现维生素 D受体激动 剂卡泊三醇能强烈抑制IL-22的表达。当卡泊三醇与一系列TOE4抑制剂一起在该分析中 试验时，PDE4抑制剂介导的IL-22上调被抵消，而TOE4抑制剂对其它促炎细胞因子特别是 TNFa的抑制作用被预料不到地保留。
[0012] 因此，一方面，本发明涉及在活化的和分化的人T-细胞中抑制促炎细胞因子白 介素-22 (IL-22)的表达上调的方法，所述的上调是通过施用治疗有效量的磷酸二酯酶 4(PDE4)抑制剂诱导，该方法包括与TOE4抑制剂的施用依次或同时施用足以抑制IL-22表 达上调的量的维生素 D受体激动剂。
[0013] 另一方面，本发明涉及用于治疗炎性疾病或病症的药物组合物，其包含治疗有效 量的TOE4抑制剂和足以抑制施用TOE4抑制剂诱导的促炎细胞因子IL-22的表达上调的量 的维生素 D受体激动剂，以及可药用载体或介质。
[0014] 附图简述
[0015] 图1是显示浓度为1 μΜ的7种TOE4抑制剂在临床开发中上调Thl/Thl7细胞中 IL-22表达的图。
[0016] 图2是显示在Thl/Thl7细胞中化合物A剂量依赖上调IL-22表达的图。
[0017] 图3是