2-羟丙基-β-环化糊精在制备治疗X-连锁肾上腺脑白质退化症的药物中的应用
【技术领域】
[0001 ] 本发明属于生物医药领域，具体涉及2-羟丙基-β -环化糊精在制备治疗X-连锁肾上腺脑白质退化症的药物中的应用。
【背景技术】
[0002]X-连锁肾上腺脑白质退化症(X-ALD)是一种X连锁隐形遗传的脂质代谢类疾病。目前认为，由于细胞中过氧化物酶体对极长链脂肪酸(VLCFA)，主要是C23?C30脂肪酸，尤其C26的氧化发生障碍，以致VLCFA在血、脑白质、肾上腺皮质等器官和组织内大量聚集，引发中枢神经系统脱髓鞘和肾上腺皮质萎缩或发育不良。每10万人约有0.5-1人患有该病，其中95%是男性，5%为女性杂合子。X-ALD致病基因ABCDl(Sarde et al.，1994)编码过氧化物酶体膜蛋白ALDP (adrenoleukodystrophy protein)，其含有745个氨基酸。ALDP和另外3个位于过氧化物酶体膜上的蛋白结合，形成二聚体，能将饱和的VLCFA转运至过氧化物酶体中进行氧化。由于ABCDl基因突变，导致ALDP功能异常，使得VLCFA的氧化受阻，进而引起VLCFA聚集。VLCFA在神经系统中聚集可破坏髓鞘的稳定性和髓鞘的正常形成，而在肾上腺皮质细胞中聚集会降低肾上腺皮质细胞膜表面的ACTH受体功能，使细胞内类固醇合成受抑制，而至肾上腺功能减退。
[0003]目前尚无有效的X-ALD疾病治疗方案，目前治疗的治疗方法包括肾上腺皮质激素替代疗法和饮食疗法等。发生肾上腺皮质功能不全时，可用激素替代疗法，给以类固醇激素可显著改善患者的内分泌状态，但不能改善神经系统症状；低脂饮食配合Lorenzo’ soil (三芥酸甘油酸:三油酸甘油酯=4:1)可能对一些患者血浆中VLCFA水平降低有一定疗效，但无法阻止脑的脱髓鞘化；基因治疗前景广阔但近期尚不可行；造血干细胞移植可有效治疗疾病早期的脑型患者，但不适于疾病快速进展阶段的脑型患者；药物诱导基因治疗如洛伐他汀的使用和疗效目前还停留在实验水平。
[0004]目前治疗X-ALD使用最广的Lorenzo’s oil可以降低部分患者血浆中的VLCFA水平，但不能改善X-ALD导致的脑部病变和行为学异常。另一用于试验的小分子4-PBA在患者中有较好的耐受性，却无法降低体内VLCFA水平。
[0005]X-ALD通常被认为是VLCFA在组织内聚集引发的脂质代谢类疾病。本发明发现HPCD作用于X-ALD小鼠，不仅使血浆、小脑、肾上腺的胆固醇水平降到正常范围之内，而且降低了 VLCFA水平，减轻了 X-ALD小鼠神经退行性病变造成的行为学异常。
【发明内容】
[0006]本发明的目的在于提供一种2-羟丙基-β -环化糊精(HP⑶)在制备治疗X-连锁肾上腺脑白质退化症(X-ALD)的药物中的应用。
[0007]本发明的目的通过下述技术方案实现:
[0008]本发明通过对野生型(WT)和X-ALD模型小鼠(AB⑶I基因敲除小鼠，AB⑶1+小鼠)注射HPCD，6月龄至7月龄小鼠每周注射4次，在7月龄时进行细胞Filipin染色、肾上腺和小脑组织切片Filipin染色以及血浆总胆固醇与极长链脂肪酸的测量；7月龄至12月龄每月注射5次，在12月龄时进行体重的测量；小鼠12月龄后每月注射8次，在20月龄时进行行为学检测。结果发现，HPCD能使血浆、小脑、肾上腺的胆固醇水平降到正常范围之内，而且降低了 VLCFA水平，减轻了 X-ALD小鼠神经退行性病变造成的行为学异常。基于该结果表明HPCD能够治疗X-ALD，其可以用于制备治疗X-ALD的药物。
[0009]本发明具有如下有益效果:相较于已有的治疗药物Lorenzo’s oil和4_PBA，HP⑶不仅降低了 X-ALD小鼠体内VLCFA水平，而且减轻了 X-ALD小鼠的行为学异常症状。HP⑶将会是一种新的有效的治疗X-ALD疾病的化合物。
【附图说明】
[0010]图1是HPCD注射X-ALD小鼠程序图。
[0011]图2是7月龄WT和AB⑶1+小鼠尾尖成纤维细胞Fi I ip in染色的共聚焦显微图。
[0012]图3是7月龄WT和AB⑶1+小鼠肾上腺和小脑组织切片Filipin染色的荧光显微镜图。
[0013]图4是7月龄WT和AB⑶1+小鼠的血浆总胆固醇含量的统计结果图；NS:无显著差异；*:有显著差异，P〈0.05。
[0014]图5是7月龄WT和AB⑶1+小鼠肾上腺或脑组织的VLCFA含量的统计结果图；NS:无显著差异；*:有显著差异，P〈0.05 ; * *:有显著差异，P〈0.01。
[0015]图6是12月龄WT和AB⑶1+小鼠的体重图；NS:无显著差异；*:有显著差异，Ρ〈0.05 ; * *:有显著差异，P〈0.0lo
[0016]图7是20月龄WT和AB⑶1+小鼠转杆实验结果的统计结果图；NS:无显著差异；*:有显著差异，P〈0.05 ; * *:有显著差异，P〈0.01。
[0017]图8是20月龄WT和ABCDl+小鼠旷场实验中小鼠前肢离地次数的统计结果图；NS:无显著差异；* *:有显著差异，P〈0.01。
[0018]图9是20月龄WT和AB⑶1+小鼠旷场实验中小鼠15分钟内移动总距离的统计结果图；NS:无显著差异；*:有显著差异，P〈0.05 ; * *:有显著差异，P〈0.01。
[0019]图10是20月龄WT和AB⑶1+小鼠旷场实验中小鼠15分钟内的移动轨迹如图。
【具体实施方式】
[0020]下面结合实施例对本发明做进一步详细的描述，但不应理解为对本发明的限制，在不背离本发明精神和实质的情况下，对本发明方法、步骤或条件所作的修改或替换均属于本发明的范围。若未特别指明，实施例中所用的技术手段为本领域技术人员所熟知的常规手段。
[0021 ] 实施例1HPCD注射X-ALD小鼠程序
[0022]本实施例中所用的材料:2_羟丙基-β-环化糊精(2-hydroxypropy1-β-cyclodextrin)HPCD 购于 Cyclodextrin TechnologiesDevelopment, Inc.，ABCDl 基因敲除小鼠购于 Jackson Laboratory。
[0023]按照图1所示的程序对野生型(WT)和X-ALD模型小鼠(AB⑶I基因敲除小鼠，AB⑶1+小鼠)颈背部注射HP⑶，注射剂量为4000mg HP⑶每kg小鼠体重，具体如下:用
0.9%生理盐水配制20% HP⑶(W/V)，6月龄至7月龄小鼠每周注射4次20% HP⑶，对照组注射同体积生理盐水，在7月龄时进行细胞Filipin染色、肾上腺和小脑组织切片Filipin染色以及