树莓多糖与化疗药物制备抗肿瘤联合用药的用图
【技术领域】
[0001] 本发明属于医药科技领域，具体涉及树莓多糖与化疗药物的联合用药。 技术背景
[0002] 树莓（Rubus idaeus L.)又名山莓、悬钩子、覆盆子等，属蔷薇科悬钩子属。树莓 主要分布于北半球温带和寒带，其果实为多浆小聚合果，味甜微酸。树莓含有多糖、有机酸、 黄酮、花青素，多酚、维生素、矿质元素、挥发油、鞣质等多种活性成分，具有极高的营养价值 和医疗保健作用，被誉为"黄金水果"。
[0003] 树莓中多糖含量极高，多糖产率可高达12%，是一种理想的多糖提取原料。研宄 发现，多糖具有调节机体免疫力、抗肿瘤、抗氧化、抗菌、防辐射、抗疲劳、降血糖降血脂等多 种生理活性。目前市场上的树莓产品主要为食品，如以树莓为主要成分的果汁、果酱、果酒 等。提取树莓中极具活性价值的多糖，并将其应用于保健品的例子非常少，而以树莓多糖为 活性成分的含片研宄更少。
[0004] 恶性肿瘤仍然是严重威胁人类生命的重大疾病。最近统计资料表明，我国每年新 发现的癌症患者约2000万人，其中150万人死于癌症。癌症的死亡人数占总死亡人数的 1/5〇
[0005] 当前，治疗癌症最常用的方法依然是化疗。但是，由于化学药物非特异性的细胞毒 性，会产生骨髓抑制、黏膜炎、皮炎、腹泻等严重的副作用。此外，肿瘤患者经过多次化疗后 容易产生抗药性，从而使化疗的效果大打折扣。目前所应用的化疗方法的最大弊端在于其 抑制了机体的免疫系统，使癌细胞能轻松的逃脱机体的免疫监视从而变得更具威胁性。因 此，寻找更安全有效的治疗方法迫在眉睫。近年来，肿瘤的免疫疗法已成为肿瘤治疗新的热 点。所谓免疫治疗，广义上是指通过调动机体自身免疫系统来对抗恶性肿瘤的一种治疗方 法。目前，已有此类药物进入临床研宄阶段。
[0006] 多糖是一种广泛存在于动植物中，具有多种生理活性的生物大分子。近年来，由于 天然、无毒的特性以及良好的疗效，多糖已经成为一类极具开发潜力的新药资源。免疫调节 是多糖最主要的生理活性。研宄表明，香菇多糖、灵芝多糖、浒苔多糖、扁玉螺多糖等都具有 很好的免疫增强作用。但将多糖与化疗药物联合使用来治疗肿瘤的例子还比较少。
【发明内容】
[0007] 本发明的目的在于提供树莓多糖的新用途。
[0008] 具体地，本发明提供了树莓多糖与化疗药物在制备抗肿瘤的联合用药物中的用 途。
[0009] 其中，所述化疗药物选自紫杉醇、顺铂或/和多西他赛。
[0010] 其中，所述肿瘤选自黑色素瘤、肺癌、肝癌、胃癌、乳腺癌、肾癌、子宫内膜癌或结肠 癌。
[0011] 其中，所述化疗药物采用注射剂型。其中，所述注射剂型可以选自皮下注射、肌肉 注射或静脉注射等各种肿瘤治疗过程中的常用方式。
[0012] 其中，所述树莓多糖采用口服剂型。其中，所述口服剂型选自片剂、胶囊剂、丸剂、 颗粒剂、散剂、浸膏剂或口服液。
[0013] 进一步地，树莓多糖与化疗药物的使用剂量比为20~40 : lw/w，当然，这一比例 是以动物实验进行的确认，在人体实际使用过程中可能会出现剂量使用比例的偏差。
[0014] 其中，所述树莓多糖中，多糖纯度在50%以上；进一步地，多糖纯度在80%以上； 更进一步地，多糖纯度在85%以上；优选地，多糖纯度为85~95% w/w，如本发明中纯度为 90~92%。上述纯度是采用硫酸苯酷法测定。
[0015] 其中，所述树莓多糖采用水提醇沉法制备得到。
[0016] 进一步地，所述水提醇沉法具体操作如下：取干燥树莓，石油醚或乙醚脱脂后，用 浓度75~95% v/v乙醇提取，过滤，滤渣加水提取，取水提液浓缩后，加乙醇至含醇量达到 75%~85%，冷却、静置，取固形物即为树莓多糖。
[0017] 其中，树莓提取前去籽或不去籽。
[0018] 其中，所述树莓为蔷薇科悬钩子属植物的果实。
[0019] 进一步地，所述树莓选自红树莓或黑树莓。
[0020] 本发明研宄发现，将树莓多糖与化疗药物联合使用，用于恶性肿瘤的治疗，具有提 高机体免疫力，增强化学药物抗肿瘤效果，减少其毒副作用等优点。
【附图说明】：
[0021] 附图1化疗药物~树莓多糖联合对荷瘤小鼠肝脏组织形态的影响；
[0022] 附图2化疗药物~树莓多糖联合对荷瘤小鼠肾脏组织形态的影响；
[0023] 附图3化疗药物~树莓多糖联合对C57BL/6小鼠脾脏指数的影响；
[0024] 附图4树莓多糖对荷瘤小鼠脾淋巴细胞体外增殖的影响；
[0025] 附图5化疗药物~树莓多糖联合对荷瘤小鼠脾细胞内免疫相关酶活性的影响；
[0026] 附图6化疗药物~树莓多糖联合对荷瘤小鼠血清中⑶4、⑶8、IL~2、INF~γ以 及TNF~α含量的影响。
【具体实施方式】
[0027] 本发明【具体实施方式】中使用的树莓多糖采用常规的多糖提取、纯化方式制备得 到，在本发明中具体操作如下：
[0028] 树莓多糖制备：取干树莓，粉碎去籽后，加5倍石油醚（沸程60~90°C)脱脂，除 尽石油醚后加入75%~95% v/v乙醇于60°C回流，将过滤后的滤渣加10倍纯净水超声提 取（功率60W，温度：80°C，处理时间：IOOmin)，离心取上清，滤渣按原条件再提取两次，合并 滤液，减压浓缩至原体积的1/4,加入95%乙醇使溶液含醇量达75% v/v，于4摄氏度静置 24h，过滤收集滤渣，滤渣烘干得树莓多糖。
[0029] 经测定，本发明制备的树莓多糖得率为10. 4%~11. 6%，经硫酸苯酚法检测得到 多糖纯度为90. 8%~91. 2%。
[0030] 本发明从抑瘤作用、减毒增效和免疫调节三个方面对树莓多糖含片的主要成分树 莓多糖进行了辅助肿瘤化疗的药效学研宄，各实施例中树莓多糖剂量均以多糖计。
[0031] 实施例1
[0032] 多西他赛~树莓多糖联合对黑色素瘤B16F10小鼠异种移植肿瘤生长的抑制作用
[0033] 取对数生长期的黑色素瘤细胞B16F10,在无菌条件下制备成5X107/ml细胞悬液， 以〇. Iml接种于C57BL/6小鼠右侧腋窝皮下。5天后用游标卡尺测量小鼠移植瘤直径，待肿 瘤生长至60~90mm3后动物随机分组。使用测量瘤径的方法，动态观察被试药物的抗肿瘤 效果。肿瘤直径的测量次数为每2天1次，每次测量同时还需称量鼠重。分组及给药方式 如下：多西他赛组采用皮下注射，10mg/kg，每三天给药1次。多西他赛~树莓多糖中高联合 给药组，多西他赛采用皮下注射，l〇mg/kg，每三天给药1次，树莓多糖采用灌胃，给药剂量 分别为200mg/kg、400mg/kg，每天给药1次。阴性对照组注射等量生理盐水，每天1次。肿 瘤体积计算公式：TV = 0. 52XaXb2,其中a、b分别表示长宽。根据测量的结果计算出相对 肿瘤体积。抗肿瘤活性的评价指标为相对肿瘤增殖率T/C(% )，计算公式：T/C(% ) = Tktv/ CktvX 100%，Tktv:治疗组 RTV ;C κτν:阴性对照组 RTV0
[0034] 表1.多西他赛~树莓多糖联合用药对C57BL/6小鼠异种移植肿瘤生长的抑制作 用
[0035]
【主权项】
1. 树莓多糖与化疗药物在制备抗肿瘤的联合用药物中的用途。
2. 根据权利要求1所述的用途，其特征在于：所述化疗药物选自紫杉醇、顺铂或/和多 西他赛。
3. 根据权利要求1所述的用途，其特征在于：所述肿瘤选自黑色素瘤、肺癌、肝癌、胃 癌、乳腺癌、肾癌、子宫内膜癌或结肠癌。
4. 根据权利要求1或2所述的用途，其特征在于：所述化疗药物采用注射剂型。
5. 根据权利要求1或2所述的用途，其特征在于：所述树莓多糖采用口服剂型。
6. 根据权利要求1~5任意一项所述的用途，其特征在于：树莓多糖与化疗药物的使 用剂量比为20~40 : lw/w。
7. 根据权利要求1~6任意一项所述的用途，其特征在于：所述树莓多糖中，多糖纯 度在50%以上；进一步地，多糖纯度在80%以上；更进一步地，多糖纯度在85%以上；优选 地，多糖纯度为85~95% w/w。
8. 根据权利要求1~7任意一项所述的用途，其特征在于：所述树莓多糖采用水提醇 沉法制备得到；进一步地，所述水提醇沉法具体操作如下：取干燥树莓，石油醚或乙醚脱脂 后，用浓度75~95% v/v乙醇提取，过滤，滤渣加水提取，取水提液浓缩后，加乙醇至含醇量 达到75%~85%，冷却、静置，取固形物即为树莓多糖。
9. 根据权利要求8所述的用途，其特征在于：树莓提取前去籽或不去籽。
10. 根据权利要求1~9任意一项所述的用途，其特征在于：所述树莓为蔷薇科悬钩子 属植物的果实；进一步地，所述树莓选自红树莓或黑树莓。
【专利摘要】本发明提供了树莓多糖与化疗药物在制备抗肿瘤的联合用药物中的用途。药效学实验结果显示，树莓多糖具有提高机体免疫力，增强化学药物抗肿瘤效果，减少其毒副作用等优点。
【IPC分类】A61K33-24, A61P37-04, A61P35-00, A61K31-337, A61K31-715
【公开号】CN104857018
【申请号】CN201510169863
【发明人】索有瑞, 杨永晶, 叶英, 韩丽娟
【申请人】中国科学院西北高原生物研究所
【公开日】2015年8月26日
【申请日】2015年4月4日