一种曲妥珠单抗介导的顺铂靶向偶联物及其制备方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及生物医药技术和纳米医药领域的药品及其制备方法，具体是一种曲妥珠单抗介导的顺铂靶向偶联物的制备及其应用。
【背景技术】
[0002]乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤之一，其发病率呈逐年上升的趋势，并且发病年龄有下降的趋势，严重危及妇女的身心健康甚至生命。乳腺癌的治疗一般通过手术、化疗及放疗等治疗手段，然而这些治疗有些病人是没有明显的效果的，部分癌症仍会复发、转移。寻求更好的治疗方案仍是迫切需要解决的问题。
[0003]随着医学科学的发展，人们对恶性肿瘤的发病原因进行了深入的研宄，基因致癌的机理慢慢清晰起来，针对致癌基因的高端生物技术不断被应用于医学临床，一种新的治疗方法逐渐兴起，这就是分子靶向治疗。靶向治疗通过作用于肿瘤细胞特有的靶点特异性地杀伤肿瘤细胞，毒副反应相对较小，因此受到越来越多的关注。
[0004]乳腺癌靶向治疗通过对细胞增殖、细胞凋亡、信号传导通路和新生血管形成等多个靶点作用于肿瘤细胞，其中信号传导通路又以EGFR通路为常见。研宄发现，有20%至30%的乳腺癌患者HER2蛋白表达增加，HER2阳性乳腺癌患者的肿瘤细胞有编码HER2的基因扩增，导致细胞表面HER2蛋白过度表达，刺激癌细胞疯狂增殖。因此抑制HER2就能抑制乳腺癌细胞的生长，HER2成为乳腺癌特异性治疗的重要靶分子之一。
[0005]曲妥珠单抗(赫赛汀)是第I个以HER2为靶点的分子靶向治疗药物，它能特异性地与肿瘤细胞表面表达的HER2受体结合，引发细胞内多种生物效应，从而抑制肿瘤细胞的增殖。大量临床研宄数据显示，无论是复发转移乳腺癌一线治疗、可手术乳腺癌的辅助治疗，还是近年来的新辅助治疗，曲妥珠单抗与多种药物联合均显示可改变HER2阳性乳腺癌患者的预后。曲妥珠单抗因疗效和安全性俱佳，已成为HER2阳性乳腺癌治疗的“金标准”药物。曲妥珠单抗联合化疗能为早期乳腺癌患者争取最佳治愈机会，使晚期乳腺癌患者获得最优生存。
[0006]化疗是乳腺癌综合治疗的重要组成部分。由于化疗药物细胞毒性作用没有选择性，所以这些药物往往毒副作用比较大，耐受性差。顺铂是目前临床最常用的广谱抗肿瘤药物之一，但是顺铂具有多种副作用，包括肾毒性、消化道毒性、骨髓抑制等。为了能够使顺铂更好的发挥疗效并降低毒性，出现了一些新的铂药给药系统，如顺铂-白蛋白微球、脂质体、顺铂-PLGA微球等。在众多的药物载体中，高分子纳米载体可以显著改变药物的分布和代谢，提高疗效、降低毒性，特别是可降解的安全无毒的天然高分子材料。例如:景遐斌等人报道了生物降解高分子键合Pt (IV)类抗癌药物纳米胶束及其制备方法(CN 102120036A)；马光辉等人报道了一种装载难溶性抗肿瘤药物的壳聚糖-羧化壳聚糖纳米球、制备方法及其应用(CN 102389572A)。这些方法制备的药物可以有效的降低毒副作用，增加药物体内循环的时间，但是仍存在靶向性不强的问题。
[0007]本发明曲妥珠单抗介导的顺铂靶向偶联物可以有效的解决这些问题。本发明采用生物相容性好、生物可降解的mPEG-PGA作为药物载体，将顺铂包裹在纳米粒内部，用曲妥珠单抗修饰纳米球表面。曲妥珠单抗本身是一种乳腺癌靶向治疗药物，能够特异性识别EGFR靶标，将负载顺铂的偶联物直接运输到肿瘤部位。可降解的高分子偶联物在在肿瘤部位逐步释放化疗药物，延长了药物作用时间，提高了药效，并大大降低了顺铂的全身毒副作用，同时实施了曲妥珠单抗对HER2阳性乳腺癌患者的靶向治疗。可以预期多种新辅助化疗方案联合曲妥珠单抗治疗可用本发明的制备方法获得高效低毒的双靶向偶联药物，达到了减毒增效的目的，并最大化影响HER2阳性乳腺癌的病程。这种给药方式展现的联合新辅助治疗的疗效更具优势。
【发明内容】
[0008]技术问题:本发明的目的是提供一种曲妥珠单抗介导的顺铂靶向偶联物及制备方法，以提高曲妥珠单抗联合化疗HER2阳性乳腺癌的治疗效果和降低化疗药物的毒性。
[0009]技术方案:本发明是一种曲妥珠单抗介导的顺铂靶向偶联物，该偶联物具体是一种曲妥珠单抗修饰的载顺铂高分子纳米球，所述的高分子纳米球是以甲氧基聚乙二醇-聚谷氨酸(mPEG-PGA)为基材；所述的曲妥珠单抗对负载顺铂高分子纳米球的修饰，是通过与高分子载药纳米粒表面的羧基进行偶联，纳米球中载有顺铂；所述的mPEG-PGA、顺铂、曲妥珠单抗的摩尔比为1: (I?50): (0.01?0.05) ο
[0010]所述的高分子纳米球的粒径在35?300nm。
[0011]所述的高分子纳米球的粒径多分散指数PDI在0.25?I之间。
[0012]本发明的曲妥珠单抗介导的顺铂靶向偶联物的制备方法包括以下几个步骤:
[0013]步骤一:室温下，将甲氧基-聚乙二醇-氨基(mPEG-NH2)的四氢呋喃(THF)溶液滴加到谷氨酸5-苄酯N-羧基环内酸酐(L-Glu-NCA)的THF溶液中，在氮气保护下反应3?4天，然后将反应液倒入到大量冰乙醚中，冰箱静置过夜，过滤，得到聚乙二醇-聚谷氨酸(mPEG-PGA)；
[0014]步骤二:将mPEG-PGA溶解在二甲基甲酰胺(DMF)中，再加入少量去离子水，在搅拌下滴入顺铂的DMF溶液，搅拌0.5?5小时，然后装入透析袋透析，经冷冻干燥得到负载顺钼的高分子纳米球；
[0015]步骤三:冰浴条件下，用去离子水溶解负载顺铂的聚乙二醇-聚谷氨酸纳米球，加入催化剂1-(3- 二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(EDAC)和N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)，再加入曲妥珠单抗水溶液反应一段时间，直接透析3?4天，冷冻干燥，制得曲妥珠单抗介导的顺铂靶向偶联物。
[0016]其中:
[0017]步骤一中所用的溶剂THF是DCM或DMF中的一种。
[0018]步骤一中所用的mPEG-NH2*子量为1000?20000。
[0019]步骤一中L-Glu-NCA 与 mPEG-PGA 摩尔比为(5:1)?(100:1)。
[0020]步骤二中溶剂DMF是DMSO或THF中的一种。
[0021]步骤二中，顺铂是其它抗肿瘤药物，如卡铂、洛铂、奥沙利铂、多西紫杉醇、阿霉素或长春瑞滨。
[0022]本发明的一种曲妥珠单抗介导的顺铂靶向偶联物的用途在于制备抗乳腺癌药物中的应用。
[0023]有益效果:本发明制备的曲妥珠单抗介导的顺铂靶向偶联物的制备工艺简单，稳定性好，可以用于制备靶向抗肿瘤药物。
[0024]本发明的一种曲妥珠单抗介导的顺铂靶向偶联物，既可以使化疗药物靶向富集在肿瘤部位，直接杀死肿瘤细胞，减低传统抗肿瘤药物的毒副作用，同时又实施了曲妥珠单抗对HER2阳性乳腺癌患者的靶向治疗。本发明巧妙实现了曲妥珠单抗和顺铂联合靶向给药方式，在曲妥珠单抗联合化疗乳腺癌方面有很好的应用前景。
【具体实施方式】
[0025]一种曲妥珠单抗介导的顺铂靶向偶联物的制备
[0026]步骤一:室温下，将甲氧基-聚乙二醇-氨基(mPEG-NH2)的四氢呋喃(THF)溶液滴加到谷氨酸5-苄酯N-羧基环内酸酐(L-Glu-NCA)的THF溶液中，在氮气保护下反应3天，然后将反应液倒入到大量冰乙醚中，冰箱静置过夜，过滤，制得聚乙二醇-聚谷氨酸mPEG-PGAο
[0027]步骤二:将mPEG-PGA溶解在二甲基甲酰胺(DMF)中，再加入少量去离子水，在搅拌下滴入顺铂的DMF溶液，然后装入透析袋透析3天，过滤，滤液经冷冻干燥得到负载顺铂的高分子纳米球。
[0028]步骤三:冰浴条件下，用去离子水溶解负载顺铂的mPEG-PGA纳米粒，加入催化剂EDAC/NHS，再加入曲妥珠单抗水溶液反应一段时间，直接透析3天，然后经冷冻干燥制得曲妥珠单抗介导的顺铂靶向偶联物。
[0029]下面结合实施例对本发明做更进一步地解释。下列实施例仅用于说明本发明，但并不用来限定本发明的实施范围。
[0030]实例I
[0031]甲氧基-聚乙二醇-聚谷氨酸(mPEG-PGA)的制备
[0032]将mPEG-NH2 (5000Da，1.00g，0.2mmol)用 1ml 无水 THF 溶剂溶解后，转入 50ml 三口烧瓶，用5ml无水THF溶解Glu-NCA(1.08g，4mmol)置于恒压滴定漏斗中。氮气保护下，缓慢滴入Glu-NCA的THF溶液，室温下反应3d，TLC跟踪(MeOH:DCM -NH3.H2O = 10:89:I ；Rf = 0.3)。反应结束后，将反应液缓慢倾入150ml冰乙醚中，并剧烈搅拌。冷冻过夜，过滤，滤饼用冰乙醚洗涤3次，得到白色沉淀1.83g，产率88.0%。1H NMR(300HMz，⑶Cl3