治疗眼部疾病的方法
【专利说明】
[0001] 本申请是申请日为2009年10月22日、申请号为201210278029. 7、发明名称为"治 疗眼部疾病的方法"的发明专利申请的分案申请。
[0002] 相关申请
[0003] 本申请要求于2008年10月22日提交的美国临时专利申请第61/196995号和2008 年11月11日提交的美国临时专利申请第61/198931号、以及于2009年2月15日提交的 国际专利申请第PCT/IL2009/000179号的优先权，它们的全部内容通过引用并入本文。参 考序列列表
[0004] 说明书中所述的序列（SEQ ID NO: 1-33, 596)是通过USPTO电子文件系统（EFS) 以文本文件形式提交，其标题为" 188-PCT2. ST25. txt"，于2009年10月20日生成，文件大 小为5952KB，它们的全部内容通过引用并入本文。
技术领域
[0005] 本发明涉及一种治疗需要的受试者的眼部障碍的无创伤性方法，包括向所需受试 者眼睛表面局部施用药物组合物的步骤，所述药物组合物包含与受试者视网膜中视网膜神 经节细胞缺失相关的目标基因的治疗型寡核苷酸。此外，本发明涉及一种提高患有眼部疾 病、障碍或损伤的受试者视网膜神经节细胞存活的无创伤性方法。
【背景技术】
[0006] 向视网膜组织传输核酸化合物，特别是向视网膜神经节细胞是一个很大的给药 挑战。迄今为止，滴眼剂被认为主要用于治疗眼前段疾病是有效的，就是因为其已经表 明，核酸不通过角膜，且不充足的药物浓度达到眼后段组织（reviewed in del Amo and Urtti,2008. Drug Discov Today 13 (3/4):135-143 ；Fattal and Bochot, 2006. Adv Drug Del Rev 56:1203-1223)。
[0007] 视网膜神经节细胞（RGC)是一种靠近眼睛视网膜内表面位置的神经细胞。视网膜 神经节细胞由感光细胞接收视觉信息，并统一传送视网膜视觉信息至大脑中的几个区域。
[0008] 此外，同时仍然需要有抑制受试者视网膜神经节细胞缺失的无创伤性方法。各种 眼部疾病和障碍是以视网膜神经节细胞（RGC)死亡为特征。因此，仍然需要有一种抑制患 有眼部疾病、眼部障碍或眼部损伤或以存在感染眼部疾病、眼部障碍或眼部损伤的风险为 特征和/或以视网膜神经节细胞（RGC)变性或死亡介导的受试者视网膜神经节细胞（RGC) 缺失的无创伤性方法。
[0009] 发明概述
[0010] 本发明涉及一种与视网膜神经节细胞（RGC)变性或死亡相关的眼部疾病、眼部障 碍或眼部损伤的无创伤性治疗方法及其使用的组合物。本发明的方法包括向受试者眼睛表 面局部施用可用于提高受试者视网膜神经节细胞存活的治疗型寡核苷酸组合物。迄今为 止，寡核苷酸已通过系统传输或玻璃体内注射，与有害副作用和患者依从性差相关的方法 分别传输到眼部视网膜组织。本发明提供了包含寡核苷酸的局部眼科药物组合物，及其用 于下调与受试者视网膜的视网膜神经节细胞缺失相关的目标基因表达的无创伤性方法，以 挽救视网膜神经节细胞的凋亡并治疗眼部障碍。
[0011] 因此，一方面，本发明提供一种向患有眼部疾病、眼部障碍或眼部损伤的受试者视 网膜组织传输寡核苷酸的无创伤性方法，其中包括向受试者眼睛表面局部施用包含寡核苷 酸的眼科组合物。
[0012] 另一方面，本发明提供一种向患有眼部障碍的受试者视网膜神经节细胞传输寡核 苷酸的无创伤性方法，其中包括向受试者眼睛表面局部施用包含寡核苷酸的眼科组合物。
[0013] 另一方面，本发明提供了一种减弱与患有眼部疾病、眼部障碍或眼部损伤的受试 者视网膜的视网膜神经节细胞缺失相关的目标基因表达的方法，其中包括向受试者眼睛表 面局部（无创伤性）施用药物组合物，所述药物组合物包含目标基因的mRNA产物的至少一 种寡核苷酸，以一定用量经过一段时间能有效减弱受试者视网膜基因的表达。
[0014] 另一方面，本发明提供一种治疗受试者患有视网膜神经节细胞缺失或视网膜神经 节细胞损伤的方法，并提供神经保护剂给患有或者存在感染眼部疾病、眼部障碍或眼部损 伤风险的受试者。该方法包括向受试者眼睛表面局部施用眼科药物组合物，所述眼科药物 组合物包括受试者视网膜目标基因靶向的至少一种寡核苷酸，以一定用量经过一段时间能 有效抑制视网膜神经节细胞缺失或视网膜神经节细胞损伤。
[0015] 在不同实施例中，眼科药物组合物被配制为霜、泡沫、膏、软膏、乳剂、包括滴眼剂、 凝胶、喷雾、悬浮液、微乳液、微球、微囊剂、纳米球、纳米粒子、脂质囊泡、脂质体、聚合物囊 泡、眼罩或隐形眼镜的液体溶液。在一些实施例中，药物组合物被配制为滴眼剂。在优选实 施例中，向眼睛施用眼科组合物，例如，是通过滴眼剂滴注或通过施用薄雾。
[0016] 在某些实施例中，至少一种目标眼部mRNA基因是选自任一 SEQ ID N0:l-58所述 mRNA多核苷酸。在某些实施例中，至少一种目标基因是选自被转录为任一 SEQ ID N0:l-58 所示mRNA多核苷酸的基因。
[0017] 在一些实施例中，至少一种寡核苷酸是选自化学修饰的siRNA、未修饰的RNA、反 义、核酶、miRNA和shRNA。在优选实施例中，至少一种寡核苷酸是化学修饰的siRNA。在一 些实施例中，siRNA正义和反义寡核苷酸均是选自显示于表B1-B36中的正义和相应的反义 寡核苷酸对，如SEQ ID NO:59-33, 596所述。
[0018] 在一些实施例中，眼部障碍、疾病或损伤是选自青光眼、干眼症、糖尿病视网膜病 变（DR)、糖尿病性黄斑水肿（DME)或老年性黄斑变性（AMD)。在其他实施例中，眼部障碍、 疾病或损伤是视神经炎、视网膜中央静脉阻塞、视网膜分枝静脉阻塞（BRVO)。在进一步实施 例中，眼部障碍、疾病或损伤是色素性视网膜炎（RP)、缺血性视神经病变或视神经损伤。在 进一步的实施例中，眼部障碍、疾病或损伤是早产儿视网膜神经节的视网膜病变（ROP)、黄 斑变性、遗传性视神经病变、代谢性视神经病变，以及由于毒剂或药物不良反应或维生素缺 乏症引起的视神经病变。在另一个实施例中，该障碍是与肿瘤疾病相关的视力丧失。
[0019] 在不同实施例中，至少一种SiRNA化合物被传输到受试者眼睛作为液体溶液，其 中包括滴眼剂。在不同实施例中，本发明提供了一种减弱与患有眼部疾病、障碍或损伤的受 试者的视网膜神经节细胞缺失相关的目标眼部基因表达的方法，其中包括向受试者眼睛表 面局部施用以滴眼剂为配方的眼科药物组合物。
[0020] 在不同实施例中，目标眼部mRNA的表达在患有眼部疾病、障碍或损伤的受试者视 网膜眼部细胞中减弱。在不同实施例中，眼部细胞包括但不仅限于泪腺腺泡细胞、泪腺导管 细胞、视网膜神经节细胞（RGC)、视网膜色素上皮（RPE)细胞、脉络膜细胞、角膜细胞、睫状 突细胞或小梁网细胞或其组合。
[0021] 本发明提供了一种抑制受试者视网膜神经节细胞缺失的方法，其中包括无创伤性 地向受试者眼睛表面施用眼科组合物，所述眼科组合物包括至少一种SiRNA的治疗有效 量，所述SiRNA下调与受试者视网膜的视网膜神经节细胞缺失相关的目标基因表达，从而 抑制视网膜神经节细胞的丧失。在某些实施例中，两种或多种目标基因根据本发明方法被 下调。至少一种与受试者视网膜的视网膜神经节细胞缺失相关的目标基因（眼部mRNA)的 减弱表达赋予眼部神经保护特性。在不同实施例中，至少一种眼部目标基因是选自表Al至 A4的列表，如SEQ ID NO: 1-58所述。
[0022] 在一个实施例中，所述眼部障碍是青光眼。因此，本发明提供了一种抑制患有青光 眼受试者的视网膜神经节细胞缺失的方法，其中包括局部（无创伤性）向受试者眼睛表面 施用眼科组合物，所述眼科组合物包括包括至少一种SiRNA的治疗有效量，所述SiRNA下调 与受试者视网膜的视网膜神经节细胞缺失相关的目标基因表达，从而抑制受试者眼睛视网 膜神经节细胞的缺失。在优选实施例中，siRNA是化学修饰的。在一些实施例中，化学修饰的 SiRNA减弱基因在受试者眼睛视网膜（目标眼部mRNA)的表达。在其他实施例中，化学修饰 的siRNA减弱目标mRNA在受试者眼睛视神经中的表达。在某些实施例中，减弱与受试者视 网膜神经节细胞缺失相关的至少一种目标基因的表达是青光眼的有效治疗方法。在某些实 施例中，至少一种目标基因是选自表Al，如SEQ ID NO:1-35所述。在某些优选实施例中，该 目标基因是选自 CASP2(SEQ ID N0:1-2)、ASPP1(SEQ ID N0:4)、TP53BP2(SEQ ID N0:6-7)、 BNIP3(SEQ ID NO: 12), RTP801L (SEQ ID NO: 14), ACHE (SEQ ID NO: 19-20), ADRBl (SEQ ID NO: 21)和CAPNSl (SEQ ID NO: 28-29)。在不同实施例中，该基因如SEQ ID NO: 1-2所述。在 一些实施例中，siRNA正义和反义链均是选自SEQ ID N0:8515-9516所述的寡核苷酸序列 对。
[0023] 在另一个实施例中，所述眼部障碍是干眼症。因此，本发明提供了一种抑制患有 干眼症受试者的