高温死端抗体过滤的制作方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及浓缩的含有蛋白的溶液，具体涉及浓缩的含有抗体的溶液，尤其是这些浓缩的含有抗体的溶液的过滤。
【背景技术】
[0002]多种含有可注射蛋白的溶液尤其是含有抗体的溶液供应到市场上。用那些溶液进行皮下注射，导致了由于注射体积的限制而产生的对溶液中高浓度蛋白的需求。
[0003]尤其对于高度浓缩的蛋白溶液而言，因为溶液粘度高，通过将溶液泵过过滤器诸如0.22 μ的过滤器进行除菌/微生物过滤可能非常繁琐或是不可能的，并且可导致非常低的产率和极低的过滤能力。其还经常导致滤液中蛋白含量的降低以及低过滤能力。结果是可能需要使用高压来保持流动。这种高压向蛋白施加应激并可导致更高的杂质率。
[0004]大多数蛋白在高温下不稳定，并因此在高于+30 °C的升高的温度下可能变性和失去活性。这限制了在过滤时使用升高高度浓缩蛋白溶液的温度来降低粘度。然而，出乎意料地，抗体似乎在较高的温度下(高达50-70 0C )非常稳定，使得在较高的温度下过滤抗体可行。
[0005]发明概述
本发明提供一种高度浓缩的抗体和/或片段溶液过滤的方法。本发明还提供一种包含浓度高于100 g/L的抗体或/和其片段的高度浓缩的溶液过滤的方法，其中所述溶液在过滤过程中被加热到高于30 °0的温度。
[0006]本发明还提供一种高度浓缩的抗体溶液过滤的方法，其中所述抗体或其片段以高于200 g/L的浓度存在，其中所述溶液在过滤过程中被加热到高于30 °C的温度。本发明还提供了一种在高度浓缩的抗体溶液过滤的过程中增加过滤产率的方法。本发明还提供一种在高度浓缩的抗体溶液过滤的过程中保持过滤器流速恒定的方法。此外，本发明提供一种在高度浓缩的抗体溶液过滤的过程中增加过滤器流速的方法。
【具体实施方式】
[0007]如上文解释的，在室温过滤高度浓缩的蛋白溶液很慢，可能导致蛋白的低回收或产率，并且还可能显示滤液中蛋白含量的降低，同时显示低的过滤能力。一种传统的解决方法是在过滤过程中施加高压以保持流动。这种使用高压向蛋白施加了应激，可导致蛋白变性并增加其他产物相关的杂质。
[0008]令人惊讶地发现抗体在较高的温度(高于30 °C)下比预期的更稳定，因此可适当地在比预期更高的温度下进行高度浓缩的抗体溶液的过滤。这种在升高的温度下过滤高度浓缩的抗体溶液显著提高了过滤速度和过滤能力而没有蛋白变性。此外，提高了蛋白回收或产率，维持了滤液中的蛋白含量。
[0009]如所证明的，刚好位于过滤器之前以加热泵过过滤器的溶液的内置(inline)换热器显著减少了过滤时间并增加了过滤的产率，或者可用其他方式进行溶液加热，即通过将过滤器置于适当温度下的烤箱/水浴中。
[0010]如本文所用的术语“蛋白”、“多肽”和“肽”指由通过肽键连接的至少5个组分氨基酸组成的化合物。该组分氨基酸可以来自由遗传密码编码的氨基酸组，它们也可以为不是由遗传密码编码的天然氨基酸，以及合成氨基酸。不是由遗传密码编码的天然氨基酸是例如，羟脯氨酸，y_羧基谷氨酸(y-carboxylglutamate)，鸟氨酸，磷酸丝氨酸，D-丙氨酸和D-谷氨酰胺。合成氨基酸包括通过化学合成制备的氨基酸，即遗传密码编码的氨基酸的D-异构体，诸如D-丙氨酸和D-亮氨酸，Aib (a-氨基异丁酸)，Abu (α-氨基丁酸)，Tle(叔丁基甘氨酸)，β -丙氨酸，3-氨基甲基苯甲酸和邻氨基苯甲酸。
[0011]术语“抗体”涵盖了单克隆抗体(包括具有免疫球蛋白Fe区的全长抗体)，具有多表位特异性的抗体组合物，双特异性抗体，双体，和单链分子，以及抗体片段(例如，Fab,F(ab’)2，和 Fv)。
[0012]如本文所用的术语“单克隆抗体”指从实质上均质的抗体群获得的抗体，S卩，除了可少量存在的可能的天然发生的突变之外，组成该群体的个体抗体是相同的。单克隆抗体是高度特异性的，针对单个抗原位点。此外，与通常包括针对不同决定簇(表位)的不同抗体的传统(多克隆)抗体制备物相反，各单克隆抗体针对抗原上的单个决定簇。除了它们的特异性之外，单克隆抗体的优势还在于它们是通过杂交瘤培养而合成的，未被其他免疫球蛋白污染。修饰语“单克隆”表明抗体的特征是从实质上均质的抗体群获得的，不解释为需要通过任何特定的方法来生产抗体。例如，根据本发明使用的单克隆抗体可通过由Kohler等人，Nature, 256: 495 (1975)首先描述的杂交瘤方法制备，或可通过重组DNA方法制备(参见，例如美国专利N0.4，816，567)。“单克隆抗体”还可用例如Clackson等人，Nature, 352: 624-628 (1991)和 Marks 等人，J.Mol.B1l., 222: 581-597 (1991)所述的技术从噬菌体抗体文库分离。
[0013]本文的单克隆抗体可扩展到包括“嵌合”抗体(免疫球蛋白)，在所述“嵌合”抗体中，重链和/或轻链的一部分与衍生自特定物种的抗体中的相应序列相同或同源或属于特定的抗体类别或亚类，而所述链的剩余部分与衍生自另一个物种的抗体中的相应序列相同或同源或属于另一个抗体类别或亚类；以及这种抗体的片段，只要它们显示出所需的生物学活性(美国专利 N0.4,816, 567; Morrison 等人，Proc.Natl.Acad.Sc1.USA, 81:6851-6855 (1984))。
[0014]可配制在本发明稳定组合物中的合适抗体的例子包括:3F8、阿巴伏单抗(Abagovomab)、阿昔单抗(Abciximab)、ACZ885 (卡那单抗(canakinumab))、阿达木单抗(Adalimumab)、阿德木单抗(Adecatumumab)、阿非莫单抗(Afelimomab)、阿福图珠单抗(Afutuzumab)、培化阿珠单抗(Alacizumab pegol)、阿仑单抗(Alemtuzumab)、喷替酸阿妥莫单抗(AItumomab pentetate)、马安那莫单抗(Anatumomab mafenatox)、安芦珠单抗(Anrukinzumab) (IMA-638)、阿泊珠单抗(Apolizumab)、阿西莫单抗(Arcitumomab)、阿塞珠单抗(Aselizumab)、阿利珠单抗(Atlizumab)(托珠单抗(tocilizumab))、阿托木单抗(Atorolimumab)、巴匹珠单抗(Bapineuzumab)、巴利昔单抗(Basiliximab)、巴土昔单抗(Bavituximab)、贝妥莫单抗(Bectumomab)、贝利木单抗(Belimumab)、柏替莫单抗(Bertilimumab)、贝索单抗(Besilesomab)、贝伐单抗(Bevacizumab)、比西单抗(Biciromab)、比伐单抗美登素(Bivatuzumab mertansine)、兰妥莫单抗(Blinatumomab)、布仁妥昔单抗维度丁(Brentuximab vedotin)、布奇努单抗(Briakinumab)、卡那单抗(Canakinumab)、莫坎妥珠单抗美登素(Cantuzumab mertansine)、卡罗单抗喷地肽(Capromab pendetide)、卡妥索单抗(Catumaxomab)、西利珠单抗(Cedelizumab)、赛妥珠单抗(Certolizumab pegol)、西妥昔单抗(Cetuximab)、泊西他珠单抗(Citatuzumabbogatox)、西妥木单抗(Cixutumumab)、克立昔单抗(Clenoliximab)、克利伐珠单抗(Clivatuzumab tetraxetan)、CNT0148 (戈利木单抗(golimumab))、CNTO 1275 (优特克单抗(ustekinumab))、可那木单抗(Conatumumab)、达西珠单抗(Dacetuzumab)、达克珠单抗(Daclizumab)、地舒单抗(Denosumab)、地莫单抗(Detumomab)、阿托度单抗(Dorlimomab aritox)、多利昔珠单抗(Dorlixizumab)、依美昔单抗(Ecromeximab)、依库珠单抗(Eculizumab)、埃巴单抗(Edobacomab)、依决洛单抗(Edrecolomab)、依法珠单抗(Efalizumab)、依夫单抗(Efungumab)、艾西莫单抗(Elsilimomab)、培戈赖莫单抗(Enlimomab pegol)、西依匹莫单抗(Epitumomab cituxetan)、依帕珠单抗(Epratuzumab)、厄利珠单抗(Erl izumab)、厄马索单抗(Ertumaxomab)、埃达珠单抗(Etaracizumab)、艾韦单抗(Exbivirumab)、法索单抗(Fanolesomab)、法拉莫单抗(Faralimomab)、非维珠单抗(Felvizumab)、非扎奴单抗(Fezakinumab)、芬妥木单抗(Figitumumab)、芳妥珠单抗(Fontolizumab)、福拉韦单抗(Foravirumab)、夫苏木单抗(Fresolimumab)、加利昔单抗(Galiximab)、甘藤如单抗(Gantenerumab)、加维莫单抗(Gavilimomab)、吉妥珠单抗奥佐米星(Gemtuzumab ozogamicin)、戈利木单抗(Golimumab)、戈利昔单抗(Gomiliximab)、伊巴珠单抗(Ibalizumab)、替伊莫单抗(Ibritumomab tiuxetan)、伊戈伏单抗(Igovomab)、英西单抗(Imciromab)、英利昔单抗(Infliximab)、英妥木单抗(Intetumumab)、伊诺莫单抗(Inolimomab)、伊珠单抗奥佐米星(Inotuzumab ozogamicin)、伊匹木单抗(Ipilimumab)、伊妥木单抗(Iratumumab)、凯利昔单抗(Keliximab)、拉贝珠单抗(Labetuzumab)、来金珠单抗(Lebrikizumab)、来马索单抗(Lemalesomab)、乐地单抗(Lerdelimumab)、来沙木单抗(Lexatumumab)、利韦单抗(Libivirumab)、林妥珠单抗(Lintuzumab)、鲁卡木单抗(Lucatumumab)、鲁昔单抗(Lumiliximab)、马帕木单抗(Mapatumumab)、马司莫单抗(Maslimomab)、马妥珠单抗(Matuzumab)、美泊利单抗(Mepolizumab)、美替木单抗(Metelimumab)、米拉珠单抗(Milatuzumab)、明瑞莫单抗(Minretumomab)、米妥莫单抗(Mitumomab)、莫罗木单抗(Morolimumab)、莫他珠单抗(Motavizumab)、莫罗单抗-CD3 (Muromonab_CD3)、MY0-029 (司他莫单抗(stamulumab))、他那可单抗(Nacolomab tafenatox)、他那莫单抗(Naptumomab estafenatox)、那他珠单抗(Natalizumab)、奈巴库单抗(Nebacumab)、奈昔木单抗(Necitumumab)、奈瑞莫单抗(Nerelimomab)、尼妥珠单抗(Nimotuzumab)、疏诺莫单抗(Nofetumomab merpentan)、奥瑞珠单抗(Ocrelizumab)、奥度莫单抗(Odulimomab)、奥法木单抗(Ofatumumab)、奥马珠单抗(Omalizumab)、莫奥珠单抗(Oportuzum