金石蚕苷在抑制皮肤色素沉着及增白美容中的应用
【技术领域】
[0001]本发明涉及金石蚕苷的应用技术领域，是一种金石蚕苷在抑制皮肤色素沉着及增白美容中的应用。
【背景技术】
[0002]黑素是决定人体肤色最重要的因素，黑素合成过多可引起雀斑、黄褐斑、老年斑和黑色素瘤等色素增加性皮肤病的形成。另外，色素代谢障碍性疾病为临床常见的皮肤顽疾，皮肤黑色素细胞黑素合成的异常是此类疾病发病的主因。黑素合成主要发生在黑色素细胞的特化细胞器一黑素小体内，以酪氨酸(Tyrosine)为底物，在酪氨酸酶(Tyrosinase)的作用下合成黑素。正常黑素的合成和沉着，具有保护皮肤、抵御紫外线辐射和防止机体内部组织过热等作用，而任一环节的缺陷或受某一因素的影响引起的黑素合成或运输过程的紊乱，都将发生皮肤黑素沉着过多、过少或缺乏等异常改变，从而导致一系列色素代谢障碍性疾病的发生。此类疾病易诊难治，给患者的身体和心理带来严重的痛苦和伤害。因此，减少黑色素细胞中黑素的含量可以发挥缓解和治疗色素增加性疾病的作用，对皮肤的健康和美观也具有重要的意义。金石蚕苷可以是合成的或天然来源的，具体包括从马鞭草科、列当科、玄参科、唇形科、车前科和鹿蹄草科等科的植物中提取分离得到。金石蚕苷(Poliumoside)的分子式:C35H46019,分子量:770.73，CAS 登录号:94079-81_9。金石蚕苷是一种苯乙醇苷类化合物，文献报道其有抗氧化活性及神经保护作用。申请号为201110117897.2的中国专利文献公开了一种从广东紫珠中提取分离金石蚕苷的方法；申请号为201110303899.0的中国专利文献公开了一种高纯度金石蚕苷的制备方法；申请号为201310168868.8的中国专利文献公开了金石蚕苷在治疗老年痴呆症中的应用，但均未涉及金石蚕苷应用于抑制皮肤色素沉着和增白美容。
【发明内容】
[0003]本发明提供了一种金石蚕苷在抑制皮肤色素沉着及增白美容中的应用，首次提出金石蚕苷在抑制皮肤色素沉着及增白美容中的应用。
[0004]本发明的技术方案是通过以下措施来实现的:一种金石蚕苷在抑制皮肤色素沉着及增白美容中的应用。
[0005]本发明首次提出金石蚕苷在抑制皮肤色素沉着及增白美容中的应用，金石蚕苷对黑色素细胞中的黑素的合成的抑制作用优于熊果苷以及肉苁蓉苯乙醇总苷对黑色素细胞中的黑素的合成的抑制作用，从而为开发具有抑制皮肤色素沉着及增白美容的药物提供了新途径，对色素增加性皮肤病的预防提供了新的研宄方向。
【附图说明】
[0006]附图1为金石蚕苷的结构式。
【具体实施方式】
[0007]本发明不受下述实施例的限制，可根据本发明的技术方案与实际情况来确定具体的实施方式。
[0008]下面结合实施例对本发明作进一步描述:
实施例:金石蚕苷在抑制皮肤色素沉着及增白美容中的应用。金石蚕苷的结构式如附图1所示。
[0009]下面为根据本发明中上述实施例的金石蚕苷在抑制皮肤色素沉着及增白美容中的应用的具体药理试验:
1.原代正常黑色素细胞的分离培养
将外科手术环切下的幼儿新鲜包皮用含10(^/1^青霉素、1001^/1^链霉素的0.01mol/L的PBS缓冲液彻底清洗2次至3次，在无菌的条件下去除幼儿新鲜包皮的皮下脂肪和结缔组织，37 °C下用0.25%的裂解酶分离表皮和真皮，并用吸头反复吹打3分钟，加入血清终止消化后得到表皮组织混悬液，将所得的表皮组织混悬液通过100目的过滤器进行过滤，去除未消化的组织细胞后得到细胞悬液，将得到的细胞悬液进行离心后得到沉淀，得到的沉淀即为多种表皮细胞，用254培养液清表皮细胞洗一次后，将清洗后的表皮细胞接种到细胞培养瓶中进行培养，培养约10天至14天，黑色素细胞即可长满培养瓶。
[0010]黑色素细胞的鉴定
采用DOPA染色法对上述分离培养得到的黑色素细胞进行鉴定。其原理为黑色素的合成是以酪氨酸为底物，在酪氨酸酶的作用下酪氨酸羟化成多巴，多巴在活性氧的参与下，在培养的黑色素细胞中加入外源性左旋多巴，在酪氨酸酶作用下合成较多的黑素颗粒使细胞在显微镜下呈现黑色。通过鉴定，上述分离培养得到的细胞为黑色素细胞。
[0011]金石蚕苷抑制细胞增殖的IC5tl的测定
选取处于对数生长期的黑色素细胞，记数以1VmL的细胞浓度接种于10PL孔的96孔板中，将接种后的黑色素细胞在培养箱(37°C，5%C02)内培养24h，将经过接种和培养后的黑色素细胞分为2组，以加入培养液的黑色素细胞作为空白对照组，以加入不同浓度(5(^g/mL至lOOOPg/mL)的金石蚕苷的黑色素细胞作为实验组，以上2组经过24h后，每孔加入MTT(5mg/mL)2(^L，继续培养4h，弃去上清液，每孔加入15(^LDMS0，于酶标仪A49(lnm处测定吸光度值，然后计算金石蚕苷干预后的黑色素细胞的细胞增殖抑制率，细胞增殖抑制率=(1-实验组A49tl/空白对照组A 49(|) X 100%。将金石蚕苷浓度与细胞增殖抑制率导入SPSS (统计产品与服务解决方案)，以金石蚕苷浓度与相应的抑制百分数(细胞增殖抑制率)作散点图，得到金石蚕苷浓度一抑制率拟合曲线，求出50%的抑制浓度，即IC5(I。实验重复3次，IC5tl取平均值。得到IC5tl为659.48Pg/mL，由IC 5(|表明金石蚕苷对黑色素细胞的细胞毒性较低，另夕卜，IC5tl的测定为后续选择金石蚕苷对黑色素细胞的干预浓度提供依据。
[0012]细胞活力的测定
根据金石蚕苷的ic5(l，选择40(^g/mL作为金石蚕苷对黑色素细胞的干预浓度，并对其进行细胞活力测定。取对数生长期的黑色素细胞，记数以105/mL的细胞浓度接种于10PL/孔的96孔板中，在培养箱(37°0，5%0)2)内培养24h，将经过接种和培养的黑色素细胞分为2组，以加入200μ?的254培养液的黑色素细胞作为空白对照组，以每孔加入40(^g/mL的金石蚕苷的黑色素细胞作为实验组，空白对照组和实验组经过24h后，每孔加入MTT (5mg/rnim^L,继续培养4h，弃去上清液，每孔加入15(^LDMS0，于酶标仪A49(lnm处测定吸光度值，计算经过金石蚕苷干预后的黑色素细胞的细胞增殖抑制率。细胞增殖抑制率=(1-实验组A49tl/空白对照组A49tl) X 100%。结果显示，浓度为40(^g/mL的金石蚕苷干预黑色素细胞后，细胞增殖抑制率为26.81%，由细胞增殖抑制率可以表明40(^g/mL的金石蚕苷对黑色素细胞的生长表现出一定的抑制作用且细胞毒性较低，可以作为为黑素含量抑制率的测定的药物干预浓度。
[0013]黑素含量抑制率的比较
将培养的黑色素细胞调至浓度为2 X 105/mL，以每孔2mL铺于6孔板中24h，当细胞贴壁后，将该黑色素细胞分为4组，以加入培养液的黑色素细胞作为空白对照组，以向黑色素细胞中加入40(^g/mL的金石蚕苷作为第一实验组(实验组)，以向黑色素细胞中加入400μ8/mL的熊果苷作为第一阳性对照组，以向黑色素细胞中加入400Pg/mL的肉灰蓉苯乙醇总苷作为第二阳性对照组，空白对照组、实验组、第一阳性对照组和第二阳性对照组经过48h后，用0.25%的胰蛋白酶进行消化，将消化后的培养液收集入离心管，转速为100rpm的条件下离心5min，弃去上清液得到沉淀物，再用PBS液洗沉淀物两次，然后加入ΙΟΟμ?浓度为lmol/L的NaOH，37°C水浴作用8h充分碱裂解和溶解黑色素颗粒得到反应体系溶液，再将反应体系溶液以ΙΟΟμ?ν孔加入96孔板中，以酶标仪检测黑素特异性吸光度A 47(|，计算第一实验组(实验组)、第一阳性对照组(实验组)和第二阳性对照组(实验组)的黑素含量抑制率，实验重复6次，黑素含量抑制率取平均值。黑素含量抑制率=(1-实验组A ■/空白对照组A470) Χ100%。通过计算可得，第一实验组的黑素含量抑制率的平均值为42.16%，第一阳性对照组的黑素含量抑制率的平均值为32.65%，第二阳性对照组的黑素含量抑制率为的平均值为31.43%，由各组的黑素含量抑制率的平均值的数据可知，金石蚕苷对黑色素细胞中的黑素的合成的抑制作用优于熊果苷以及肉苁蓉苯乙醇总苷对黑色素细胞中的黑素的合成的抑制作用，说明金石蚕苷具有抑制皮肤色素沉着和增白美容的作用。二十世纪九十年代日本资生堂化妆品株式会社开发了高效、低毒的黑素合成抑制剂-熊果苷，熊果苷已被作为抗色素沉着活性成分并广泛应用于化工及医药领域，因此，选择熊果苷作为第一阳性对照组的干预药物；肉苁蓉苯乙醇总苷具有抑制皮肤色素沉着及增白美容的作用，因此，选择肉苁蓉苯乙醇总苷作为第二阳性对照组的干预药物。采用SPSS13.0统计软件检验黑素含量抑制率的统计学意义，黑素含量抑制率以(土s)表示，第一实验组、第一阳性对照组和第二阳性对照组组间的比较采用?检验，比较结果表明金石蚕苷对黑色素细胞的黑素合成的抑制作用明显优于熊果苷对黑色素细胞的黑素合成的抑制作用(Κ0.01)，金石蚕苷对黑色素细胞的黑素合成的抑制作用优于肉苁蓉苯乙醇总苷对黑色素细胞的黑素合成的抑制作用(Zmoi)0
[0014]综上所述，本发明首次提出金石蚕苷在抑制皮肤色素沉着及增白美容中的应用，金石蚕苷对黑色素细胞中的黑素的合成的抑制作用优于熊果苷以及肉苁蓉苯乙醇总苷对黑色素细胞中的黑素的合成的抑制作用，从而为开发具有抑制皮肤色素沉着及增白美容的药物提供了新途径，对色素增加性皮肤病的预防提供了新的研宄方向。
[0015]以上技术特征构成了本发明的实施例，其具有较强的适应性和实施效果，可根据实际需要增减非必要的技术特征，来满足不同情况的需求。
【主权项】
1.一种金石蚕苷在抑制皮肤色素沉着及增白美容中的应用。
【专利摘要】本发明涉及金石蚕苷的应用技术领域，是一种金石蚕苷在抑制皮肤色素沉着及增白美容中的应用。本发明首次提出金石蚕苷在抑制皮肤色素沉着及增白美容中的应用，金石蚕苷对黑色素细胞中的黑素的合成的抑制作用优于熊果苷以及肉苁蓉苯乙醇总苷对黑色素细胞中的黑素的合成的抑制作用，从而为开发具有抑制皮肤色素沉着及增白美容的药物提供了新途径，对色素增加性皮肤病的预防提供了新的研究方向。
【IPC分类】A61K31/7032, A61P17/00, A61Q19/02, A61K8/60
【公开号】CN104983598
【申请号】CN201510336526
【发明人】杨建华, 胡君萍, 吴姗姗, 许欢欢, 居博伟, 朱丹丹, 梁新谦, 孟新源
【申请人】新疆医科大学第一附属医院
【公开日】2015年10月21日
【申请日】2015年6月17日