一种植物源杀菌、抗病毒制剂及其制备方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于生物技术领域，更具体涉及药用植物杀菌、抗病毒成分提取及制剂的 研制。
【背景技术】
[0002] 化学杀菌剂的广泛使用带来了环境污染、残毒危害、病毒抗药、人畜安全受到威胁 等一系列问题。从植物中寻找抗病毒活性物质是开发无公害生物抗病毒制剂的一条有效途 径，以此来缓解当前化学药物严重污染问题。中国药用植物资源十分丰富，其中许多植物具 有强大的杀菌抗病毒功能，为人类开发利用这些药用植物资源提供了便利的条件。
[0003] 据统计，地球上的植物至少有50万种，而植物产生的次生代谢物质种类繁多，已 超过40万种。Wilkins等曾报道有1389种植物有可能作为杀菌剂的原材料，Grange和 Ahmed报道约有2400种植物具有防治有害生物的活性。目前人们认为具有抑菌、杀菌抗病 毒活性的植物，大部分资源集中在菊科、唇形科、木兰科、马兜铃科、寥科、木犀科、百合科、 萌芦科、莎草科、豆科、十字花科等植物中，除此之外还有樟科的肉桂、香叶树、暴马丁香、 Thymbra spicata、Satureja thymbra、白桂等。
[0004] 有关植物及其提取物的抗菌、抑菌作用已有相关的文献报道，主要集中在对人、动 物的杀菌治疗和作为农作物杀菌剂的试验及应用研究。张薇等（2007)对植物挥发性物质 的化学成分及其抵抗微生物的能力以及与生态学相关可能产生的增效作用进行了研究；索 菲娅等（2006)对孜然挥发油、孜然醇提物、孜然水提物、孜然醇后水提物，用Bauer-Kirby 法实验探讨了各提取物对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌等7种细菌和酵母菌的抑菌效果；司 红彬等（2006)测定了黄连、鱼腥草、大青叶和苦参4味中药及其相互配比（I : 1)对标准 大肠杆菌的最小抑菌浓度MIC值介于3. 91~62. 50mg/mL之间；陈枝M等（2006)测定了 黄连、黄柏、虎杖、丁香、石榴皮、七叶一枝花、五倍子、白头翁、仙鹤草、连翘、金银花、苦参、 蛇床子、诃子等14味中药对白色念珠菌的抗菌作用，黄连的最小抑菌浓度为6. 25mg/mL，黄 柏、虎杖的最小抑菌浓度为25. 00mg/mL，丁香、石植皮、七叶一枝花、五倍子的最小抑菌浓度 为50.0 Omg/mL ;蔡金等（2006)测定了 20种具有抗菌消炎作用的中药水提物对啤酒酵母、 假丝酵母、黑曲霉及拟青霉的抗菌活性，其中苦参总碱，黄芩提取物具有较强的抑菌活性， 对假丝酵母的抑菌浓度小于0. 〇〇625g/mL ;王德海等（2005)采用试管法和平板法，分别测 定了 10种中草药对临床分离的一株鸡关节炎源性金黄色葡萄球菌的最小抑菌浓度（MIC)， 发现黄连、大青叶、艾叶、连翘4种中草药体外抗菌效果更明显；陈文伟等（2005)检测了 8 种中草药对耐药金葡菌的最小抑菌浓度分别为：九节茶、白芍、黄芩为62. 5mg/mL，丹皮、黄 连、厚朴为15. 6mg/mL，夏枯草为7. 8mg/mL，诃子为1.0 mg/mL ;王兴华等（2005)测定了多种 药用植物及不同复方对4种植物病原菌的MIC，复方药物的最佳组方为：雷公藤5g、蛇床子 l〇g、大黄5g、苦参10g、马齿苋10g、黄柏10g、黄芩10g，对4种植物病原菌的MIC分别为： 黄瓜黑斑病菌3. 2 %，青椒枯萎病菌5. 0 %，黄瓜枯萎病菌4. 4%，禾谷类作物病菌3. 0 %;刘 志春等（2004)测定了五味子等29种中草药对金黄色葡萄球菌、痢疾杆菌、绿脓杆菌的抑菌 作用，其中五味子的抑菌作用最强，抑菌圈最大者达40mm，MIC为6. 25-10.0 Omg/mL ;王理达 等（2001)对13种生药的醇提物及13种单体化合物进行啤酒酵母突变性GL7和威克海姆 原藻的敏感性测试，结果发现黄柏、丁香、乌梅、黄连、山豆根对二者均有强烈抑制作用。
【发明内容】
[0005] 本发明提供了一种植物源杀菌、抗病毒制剂及其制备方法，以虎杖、千里光、鱼腥 草、仙人掌、苦参等植物为原材料，通过独特的配方工艺，研发出杀菌力强、无毒副作用的纯 植物天然杀菌、抗病毒制剂产品。
[0006] 该产品为纯植物天然杀菌、抗病毒制剂，具有无刺激性、无毒副作用、无残留、稳定 和安全高效的特点。
[0007] 本发明植物源杀菌、抗病毒制剂，包括组分为下列原料的水提物：虎杖、千里光、鱼 腥草、仙人掌和苦参；各原料水提物的体积百分比为：虎杖液15-60%，鱼腥草液10-40%， 千里光液5-60 %，仙人掌液5-40 %，苦参液5-40 %。
[0008] 进一步的，本发明植物源杀菌、抗病毒制剂，包括组分为下列原料的水提物：虎杖、 千里光、鱼腥草、仙人掌和苦参；各原料水提物的体积百分比为：虎杖液35-55%，鱼腥草液 10-30 %，千里光液5-25 %，仙人掌液5-30 %，苦参液5-30 %。
[0009] 进一步的，一种植物源杀菌、抗病毒剂，所述杀菌剂的组分为下列原料的水提物的 重量百分比：虎杖液45%，鱼腥草液20%，千里光液15%，仙人掌液10%，苦参液10%。
[0010] 所述原料的水提物是在原料中加入10~30倍原料重量（w/v)的水，在60_100°C 下水提1~3h，提取1~3次，合并提取液，得到原料的水提物。
[0011] 所述虎杖液的制备为虎杖和水按重量体积比为1 : 10-20,在60-100°C下水 提l_3h，提取1_3次；所述千里光液的制备为千里光和水按重量体积比为1 : 10-30,在 60-100°(：下水提2-411，提取1-3次；
[0012] 所述鱼腥草液的制备为：将有机溶剂和水按1:3的比例混合为提取溶剂，加入鱼 腥草于提取溶液中，鱼腥草和提取溶液的料液比按重量体积为1 : 5-30,在40-70°C下提 2_3h，提取过滤2-3次，合并过滤后的滤液，升温至80-KKTC，回收有机溶剂，剩余滤液即为 鱼腥草液。
[0013] 所述的有机溶剂为甲醇和石油醚中的任意一种。
[0014] 所述仙人掌液的制备为仙人掌：将仙人掌杀菌粉碎后，仙人掌：加水比1 : 10-30 (w/v)，提取温度为50-70 °C，提取1-3次；
[0015] 所述苦参液的制备为苦参和水按重量体积比为1 : 5-15,在80-100°C下水提 l-2h，提取1-3次。
[0016] 进一步的，所述虎杖液的制备：虎杖和水按重量体积比为1 : 10,在100°C下水提 2h，提取3次；所述千里光液的制备为千里光和水按重量体积比为1 : 30,在KKTC下水提 2h，提取1次；
[0017] 所述鱼腥草液的制备为鱼腥草：将有机溶剂和水按1:3的比例混合为提取溶剂， 加入鱼腥草于提取溶液中，鱼腥草和提取溶液的料液比按重量体积比为1 : 25,在50°C下 提4h，提取过滤1-3次，合并过滤后的滤液，升温至80-KKTC，回收有机溶剂，剩余滤液即为 鱼腥草液；
[0018] 所述仙人掌液的制备为将仙人掌杀菌粉碎后，仙人掌和水按重量体积比为I : 10-30,在100°C的温度下提取I. 5h，提取3次；
[0019] 所述苦参液的制备为苦参和水按重量体积比为1 : 5-15,在100°C下水提2h，提取 1次。
[0020] 所述的植物源杀菌、抗病毒剂的制备方法是将虎杖、鱼腥草、千里光、仙人掌和苦 参的水提物分别配制成含生药浓度lg/L的溶液，按比例混合，即得到植物源杀菌、抗病毒 剂。
[0021] 鱼腥草中含有大量的蛋白质，脂肪，糖类，黄酮和挥发油，其中黄酮和挥发油具有 很好的药用价值，具有抗病原微生物作用，抑制金黄色葡萄球菌、大肠杆菌，枯草杆菌，卡他 球菌，痢疾杆菌，流感杆菌、肺炎双球菌，具有强性杀菌作用，同时鱼腥草提取物的抑菌作用 有较强的热稳定性。
[0022] 仙人掌中含有大量的氨基酸，同时还含有生物碱，黄酮甙，强心甙和皂甙等活性成 分，能够抑制破坏菌体内部蛋白质，同时抑制蛋白质的合成，从而抑制细菌。
[0023] 本发明植物源杀菌、抗病毒制剂的制备方法为将虎杖、鱼腥草、千里光、仙人掌和 苦参的水提物分别配制成含生药浓度lg/L的溶液，按比例混合，即得到植物源杀菌、抗病 毒剂。
[0024] 本发明植物源抗病毒制剂的主要技术指标如下：
[0025] (1)棕色半透明液体，并有微量不溶物沉淀；略带酸味，无其他杂味；
[0026] (2)pH值（I : 10 溶液）7.0-8.5,总固体含量 0· 1-2%，汞彡 lmg/kg，砷彡 IOmg/ kg，铅彡 40mg/kg ;
[0027] (3)对流感病毒及大肠杆菌，枯草杆菌，卡他球菌，痢疾杆菌，流感杆菌、肺炎双球 菌，金黄色葡萄球菌、白色念珠菌和淋球菌均具有抑制性，抑菌率达100%，具有强力的杀菌 抗病毒作用；
[0028] (4)小鼠急性经口毒性试验、家兔皮肤刺激试验和皮肤变态反应试验表明，"植物 源杀菌剂"稳定、安全、无毒副作用；
[0029] (5)可用于公共场所的消毒及垃圾、污水的杀菌、除臭。
[0030] 本发明的特点：
[0031] 1.纯植物制剂：以虎杖、千里光、鱼腥草、仙人掌、苦参等植物为原材料，产品稳 定、安全、无残留、无毒副作用。
[0032] 2.杀菌抗病毒效果显著：对流感病毒及大肠杆菌，枯草杆菌，卡他球菌，痢疾杆 菌，流感杆菌、肺炎双球菌，金黄色葡萄球菌、白色念珠菌和淋球菌的抑菌率达100% ;对生 活垃圾和污水中细菌的杀菌效果显著。
[0033] 3.植物源杀菌抗病毒制剂除可应用于外科抗菌消炎外，还可广泛应用于对生活垃 圾、粪便、污水、公共厕所的杀菌除臭，达到杀菌、防病和改善生态环境的作用，提高人们的 生活质量。且用量少，每吨垃圾只需用本产品10公斤，每m3污水只需用本产品50mL，就可 有效杀灭其中存在的病毒及细菌，达到除臭的目的。
[0034] 本发明的显著优点：
[0035] 植物源杀菌抗病毒制剂的优势特色与抗生素等的比较，主要体现在药效的整体性 和药源的天然性两方面。其一，西药大多数是化学合成的，成分单一；而植物药来源于天然， 大多含有复杂的化学成分，由多味植物药配伍组成的复方，其化学成分就更复杂；多种化学 成分作用于动物体，往往会产生多元组合效应。其二，由于植物药绝大多数来自天然，因而 具有许多天然的属性，如化学成分组合的天然合理性，功效的整体性和双向性，以及毒副作 用小，不易导致病原微生物产生抗耐药性，很少在动物体内形成有害残留等。植物药的这些 天然属性是许多西药所没有的。
【具体实施方式】
[0036] 下面结合具体实施例来进一步详细说明本发明。
[0037] 实施例1
[0038] 植物源杀菌抗病毒制剂配方优化
[0039] 1.药用植物的筛选
[0040] 通过市场调查和查阅相关文献资料，选取药理作用比较接近、并在药理上有互补 性的虎杖、千里光、鱼腥草、仙人掌、苦参等植物作为原材料。
[0041] 2.药用植物的浸提条件研究
[0042] 以浸膏得率为指标，采用L9(34)正交表设计正交实验，研究提取温度、提取时间、 提取次数、原料加水比对浸膏得率的影响。
[0043] (1)虎杖
[0044] 表1-1因素水平表
[0052] F0.05 (2, 4) = 6. 94 ；F0.01(2,4) =18.00
[0053] 方差分析结果表明，因素 A(提取温度）和因素 D(原料加水比）影响显著，因素作 用的主次顺序D -A -C