一种果上叶复方制剂及其制备方法和检测方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种果上叶复方制剂及其制备方法和检测方法，属于中药技术领域。
【背景技术】
[0002] 肺痨又称肺结核，是由结核菌引起的一种慢性肺部传染病，是肺病中的常见病。是 一种由于正气虚弱，感染痨双侧虫，侵蚀肺脏所致的，以咳嗽、咯血、潮热、盗汗及身体逐渐 消瘦等症为主要临床表现、具有传染性的慢性消耗性疾病。可以分为原发性和继发性两大 类，前者为人体第一次感染结核菌引起的病变，称之为原发感染，多见于幼儿和少年，而后 者则在原发感染的基础上，残留在病灶内，淋巴结内的结核菌长期潜伏，当机体抵抗能力下 降时，结核菌又可活跃、繁殖而致病，我们称之为内源性复发，又称之为继发性肺结核。这是 成人肺结核发病的主要形式，但外界再次感染结核菌也可引起发病。
[0003] 目前，推行使用的治疗方案主要有两种：初治方案（2H3R3Z3E3/4H3R3)和复治方 案（2S3H3R3Z3E3/6H3R3E3)，分别用异烟肼、利福平、吡嗪酰胺、乙胺丁醇，复治方案加用链 霉素强化治疗2个月，然后用异烟肼、利福平，复治方案加用乙胺丁醇再分别治疗4或6个 月，两个方案均采用隔日顿服方式给药，使患者体内一次达到一个血药高峰浓度，杀死结核 菌。一般病情轻浅，早期接受治疗者，均可康复；如迀延日久，全身虚弱症状明显，如极度消 瘦，短气，咯血，面色青晦，脉小数疾等，则多属难治。
[0004] 少数民族使用的、以本民族传统医药理论和实践为指导的药物，称为民族药。各 少数民族地区有着独特的自然条件和生活习俗，长期实践形成了对某些疾病独特的治疗经 验。其中贵州省少数民族用药潷草、果上叶、白及等药材具有清热解毒，利水消肿的功效，用 于肺痨咳嗽等。选用适当的民族药，采取现代优选的提取工艺与制备工艺，制得药品，将为 结核病的治疗提供一个确有疗效的中药新品种，为该病患者提供新的治疗药物。
【发明内容】
[0005] 为解决现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种果上叶复方制剂及其制备方 法和检测方法。本发明提供的复方制剂采用贵州省少数民族用药，药材资源丰富，提取制备 工艺合理，有效成分含量稳定，从而保证了疗效的稳定，本发明提供的检测方法，测量结果 准确，可有效控制药品质量。
[0006] 为了实现上述目标，本发明采用如下的技术方案：
[0007] -种果上叶复方制剂，按重量份数计，由以下原料药制成：倒提壶220~420份、白 及60~260份、潷草100~300份和果上叶50~190份。
[0008] 前述果上叶复方制剂按重量份数计，优选由以下原料药制成：倒提壶320份、白及 160份、潷草200份和果上叶120份。
[0009] 前述制剂是以可溶性淀粉为辅料制成的胶囊剂。
[0010] 本发明果上叶复方制剂的制备方法：按重量比例称取倒提壶、白及、潷草和果上 叶，倒提壶、潷草和果上叶加6~10倍量65 %~85 %乙醇，提取1~3次，每次提取1~ 2h，合并提取液，过滤，得醇提液，备用；醇提药渣和白及加6~10倍量的水，提取1~3次， 每次提取1~2h，合并提取液，过滤，得水提液；将醇提液和水提液混合，减压浓缩，浓缩液 真空干燥，得浸膏提取物，粉碎过筛，得到药粉，再加入辅料制成各种药物制剂。
[0011] 优选的制备方法为：按重量比例称取倒提壶、白及、潷草和果上叶，倒提壶、潷草和 果上叶分别加10倍量、8倍量85%乙醇，回流提取2次，每次提取2h，合并提取液，过滤，得 醇提液，备用；醇提药渣和白及分别加9倍量、8倍量、8倍量的水，煎煮提取3次，每次提取 2h，合并提取液，过滤，得水提液；将醇提液和水提液混合，75°C减压浓缩至密度为1. 25的 浓缩液，浓缩液70°C真空干燥72h，得浸膏提取物，粉碎过4号筛，得到药粉，再加入辅料制 成各种药物制剂。
[0012] 进一步地，按药粉与辅料4 : 3的重量比例加入辅料可溶性淀粉，混匀，以85%的 乙醇作润湿剂制粒，颗粒在60°C~80°C逐渐升温中干燥，颗粒装入胶囊，即得胶囊剂。
[0013] 果上叶复方制剂（胶囊剂）的检测方法包括性状、鉴别、检查和含量测定项目；鉴 别是对白及、潷草、倒提壶、果上叶的薄层色谱鉴别；含量测定是用高效液相色谱法测定制 剂中1，4_二[4_(葡萄糖氧）苄基]-2-异丁基苹果酸酯的含量；白及的鉴别方法是以白及 对照药材为对照，以环己烷-乙酸乙酯-甲醇=6 : 2.5 : 1为展开剂的薄层色谱法，潷草 的鉴别方法是以木犀草苷对照品为对照，以乙酸乙酯-丙酮-甲酸-水=7 : 3 : 1 : 1.2 为展开剂的薄层色谱法，倒提壶的鉴别方法是以谷留醇对照品为对照，以环己烷-乙 醚-乙酸乙酯=40 : 11 : 15为展开剂的薄层色谱法，果上叶的鉴别方法是以果上叶对 照药材为对照，以三氯甲烷-甲醇-甲酸=40 : I : 1为展开剂的薄层色谱法；制剂中1， 4_二[4-(葡萄糖氧）苄基]-2-异丁基苹果酸酯的含量测定方法是以1，4_二[4-(葡萄糖 氧）苄基]-2-异丁基苹果酸酯对照品为对照，以甲醇-水=47 : 53为流动相的高效液相 色谱法。
[0014] 具体的鉴别方法包括以下项目中的一项或几项：
[0015] (1)取本制剂内容物2g，加70%甲醇20mL，超声处理30min，滤过，滤液蒸干，残渣 加水IOmL溶解，用乙醚振摇提取两次，每次20mL，合并乙醚液，浓缩至ImL作为供试品溶液； 另取白及对照药材2g，按供试品溶液制备方法制备对照药材溶液；照中国药典2010年版一 部附录VI B薄层色谱法试验，吸取供试品溶液2 μ L，对照药材溶液5 μ L，分别点于同一以 羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以环己烷-乙酸乙酯-甲醇=6 : 2.5 : 1 为展开剂，展开，取出，瞭干，l〇5°C加热数分钟，放置30min~60min，置紫外光灯365nm下检 视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相对应的位置上，显相同颜色的斑点；
[0016] (2)取本制剂内容物lg，加20mL水回流提取lh，过滤，滤液加盐酸调酸性，用乙酸 乙酯萃取三次，每次20mL，滤液挥干，加甲醇2mL稀释作供试品溶液；另取木犀草苷对照品， 加甲醇制成每ImL含2mg的对照品溶液；照中国药典2010年版一部附录VI B薄层色谱法 试验，吸取供试品溶液1 μ L，对照品溶液2 μ L，分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯 一丙酮一甲酸一水=7 : 3 : 1 : 1.2为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5%三氯化铝乙醇 溶液，供试品色谱图中，在与对照品色谱相对应的位置上，显相同颜色的斑点；
[0017] (3)取本制剂内容物2g，加三氯甲烷20mL，超声处理15min，滤过，滤液蒸干，残渣 加三氯甲烷ImL使溶解，作为供试品溶液；另取β-谷甾醇对照品适量，加三氯甲烷制成每 ImL含2mg的对照品溶液；照中国药典2010年版一部附录VI B薄层色谱法试验，吸取供试 品溶液I. 5 μ L，对照品溶液2 μ L，分别点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷-乙醚-乙酸乙 酯=40 : 11 : 15为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105°C加热至斑 点清晰，供试品色谱中，在与对照品色谱相对应的位置上，显相同颜色的斑点；
[0018] (4)取本制剂内容物0.5g，加三氯甲烷20mL，超声处理30min，过滤，滤液蒸干， 残渣加甲醇ImL使溶解作为供试品溶液；取果上叶对照药材2g，按供试品溶液制备方法 制备对照药材溶液；照中国药典2010年版一部附录VI B薄层色谱法试验，吸取供试品溶 液4 μ L，对照药材溶液2 μ L，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-甲酸= 40 : I : 1为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，IKTC加热至斑点清晰，供 试品色谱中，在与对照药材色谱相对应的位置上显相同颜色的斑点。
[0019] 具体的含量测定方法为：照中国药典2010年版一部附录VI D高效液相色谱法测 定：
[0020] 色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-水= 47 : 53为流动相；流速为lmL/min ;柱温30°C ;检测波长为221nm ;理论板数按1，4_二 [4-(葡萄糖氧）苄基]-2-异丁基苹果酸酯峰计算应不低于5000 ;
[0021] 对照品溶液的制备取1，4_二[4_(葡萄糖氧）苄基]-2-异丁基苹果酸酯对照品 适量，精密称定，加甲醇制成每ImL含1，4-二[4-(葡萄糖氧）苄基]-2-异丁基苹果酸酯 100 μ g的溶液，即得；
[0022] 供试品溶液的制备取本制剂内容物0. 2g，精密称定，加20mL甲醇回流提取1小时， 放冷过滤，挥干，加甲醇定容至10mL，过滤，即得；
[0023] 测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5 μ L，注入高效液相色谱仪，测 定，即得。
[0024] 前述检测方法包括：
[0025] 性状：本制剂为胶囊剂，内容物为棕褐色粉末，气微，味微苦；
[0026] 鉴别：⑴取本制剂内容物2g，加70%甲醇2〇1^，超声处理3〇11^11，滤过，滤液蒸 干，残渣加水IOmL溶解，用乙醚振摇提取两次，每次20mL，合并乙醚液，浓缩至ImL作为供 试品溶液；另取白及对照药材2g，按供试品溶液制备方法制备对照药材溶液；照中国药典 2010年版一部附录VI B薄层色谱法试验，吸取供试品溶液2 μ L，对照药材溶液5 μ L，分 别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以环己烷-乙酸乙酯-甲醇= 6 : 2. 5 : 1为展开剂，展开，取出，晾干，105°C加热数分钟，放置30min-60min，置紫外光灯 365nm下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相对应的位置上，显相同颜色的斑点；
[0027] (2)取本制剂内容物lg，加20mL水回流提取lh，过滤，滤液加盐酸调酸性，用乙 酸乙酯萃取三次，每次20mL，滤液挥干，加甲醇2mL稀释作供试品溶液；另取木犀草苷对照 品，加甲醇制成每ImL含2mg的对照品溶液；照中国药典2010年版一部附录VI B薄层色谱 法试验，吸取供试品溶液1 μ L，对照品溶液2 μ L，分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙 酯-丙酮-甲酸-水=7 : 3 : 1 : 1.2为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5%三氯化铝乙 醇溶液，供试品色谱图中，在与对照品色谱相对应的位置上，显相同颜色的斑点；
[0028] (3)取本制剂内容物2g，加三氯甲烷20mL，超声处理15min，滤过，滤液蒸干，残渣 加三氯甲烷ImL使溶解，作为供试品溶液；另取β-谷甾醇对照品适量，加三氯甲烷制成每 ImL含2mg的对照品溶液；照中国药典2010年版一部附录VI B薄层色谱法试验，吸取供试 品溶液I. 5 μ L，对照品溶液2 μ L，分别点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷-乙醚-乙酸乙 酯=40 : 11 : 15为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105°C加热至斑 点清晰，供试品色谱中，在与对照品色谱相对应的位置上，显相同颜色的斑点；
[0029] (4)取本制剂内容物0· 5g，加三氯甲烧20mL，超声处理30min，过滤，滤液蒸干， 残渣加甲醇ImL使溶解作为供试品溶液；取果上叶对照药材2g，按供试品溶液制备方法 制备对照药材溶液；照中国药典2010年版一部附录VI B薄层色谱法试验，吸取供试品溶 液4 μ L，对照药材溶液2 μ L，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-甲酸= 40 : I : 1为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，IKTC加热至斑点清晰，供 试品色谱中，在与对照药材色谱相对应的位置上显相同颜色的斑点；
[0030] 检查：应符合《中国药典》2010年版一部附录I C胶囊剂项下有关的各项规定；
[0031] 含量测定：照中国药典2010年版一部附录VI D高效液相色谱法测定：
[0032] 色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-水= 47 : 53为流动相；流速为lmL/min ;柱温30°C ;检测波长为221nm，理论板数按1，4_二 [4-(葡萄糖氧）苄基]-2-异丁基苹果酸酯峰计算应不低于5000 ;
[0033] 对照品溶液的制备取1，4_二[4_(葡萄糖氧）苄基]-2-异丁基苹果酸酯对照品 适量，精密称定，加甲醇制成每ImL含1，4-二[4-(葡萄糖氧）苄基]-2-异丁基苹果酸酯 100 μ g的溶液，即得；
[0034] 供试品溶液的制备取本制剂内容物0. 2g，精密称定，加20mL甲醇回流提取1小时， 放冷过滤，挥干，加甲醇定容至10mL，过滤，即得；
[0035] 测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5 μ L，注入高效液相色谱仪，测 定，即得。
[0036] 本发明制剂是由潷草、果上叶、倒提壶和白及药材组成的复方制剂，能够治疗肺痨 咳嗽、肺热咳嗽、疮疡肿毒等多种疾病。
[0037] 薄草为桑科植物薄草Humulus scandens(Lour)Merrr.的干燥全草，为贵州省少数 民族用药；具有清热解毒，利水消肿的功效，用于肺痨咳嗽，潮热，小便不利等。潷草化学成 分比较复杂，但主要有效成分为黄酮类化合物，此外还含有挥发油类、萜类、生物碱类、氨基 酸及微量元素等；黄酮类化合物具有