用于瘤形成治疗的组合疗法
【专利说明】用于瘤形成治疗的组合疗法
[0001] 本发明涉及瘤形成（neoplasia)(包括良性及恶性肿瘤）的医药治疗。
[0002] 发明背景
[0003] 前列腺癌为男性中所诊断出的最常见恶性疾病且为西方国家中的死亡主因 (American Cancer Society, 2010(http://www. cancer, org/acs/groups/content/i epidemiologysurveilance/documents/document/acspc-〇 26238· pdf))。雄激素及其受体 (雄激素受体（AR))的刺激作用对正常前列腺的发育及功能以及前列腺癌的发生及发展而 言是必需的（综述于 Basu S 等人，Horm Cancer. 2010 年 10 月；1 (5) :223-8 ;Yadav N 等人， Minerva Urol Nefrol. 2012年3月；64(1) :35-49中）。对转移性前列腺癌，雄激素去除疗 法仍为标准治疗。尽管最初超过90%的患者对雄激素去除疗法有反应，但该临床益处为暂 时的，同时肿瘤变得具有难治性且发展为非雄激素依赖性/对去势疗法有抗性的前列腺癌 (CRPC) (Rini BI 等人，Curr Treat Opt ions Oncol. 2002 年 10 月；3 (5) :437-46 ;Carles J等人，Clin Transl Oncol. 2012年3月；14 (3) :169-76)。尽管激素去势及/或用目前可 获得的抗雄激素治疗，但CRPC与连续雄激素受体（AR)活化相关。前列腺癌生长的雄激素 刺激作用及非雄激素依赖性的切换的分子机制尚未完全明确。非雄激素依赖性的发展可 解释为雄激素受体的变化，诸如剪接变异体的扩增、突变或活性改变。其他可能机制包括 肿瘤细胞自主产生雄激素、经由激酶（如ERK或AKT)非配位体依赖性地活化AR(综述于 Dutt SS 等人，Future Oncol. 2009 年 11 月；5(9) :1403-13 及 Attar RM 等人，Clin Cancer Res. 2009年5月15日；15(10) :3251-5中）或雄激素可经由上调涉及肽生长因子及其同 源受体的自分泌环来调控前列腺癌增生（De Beilis A等人，J Clin Endocrinol Metab 1996 ;81:4148-54)。所有这些机制均可导致对内分泌雄激素的非依赖性。
[0004] 随着男性年龄增长，可在绝大部分男性中检测到良性前列腺增生（BPH) (Parsons JK. ,Curr Bladder Dysfunct R印.2010 年 12 月；5 (4): 212-218)。BPH 可定义为由良性基 质及上皮细胞（范围较小）两者的增殖导致之前列腺的非癌性增大（Foster CS. Prostate 2000;9:4-14)。在这些细胞类型的两者中，二氢睾酮（DHT)是因为自雄激素受体解离比睾 酮缓慢而效力比睾酮高10倍的睾酮的代谢物，该其结合至核雄激素受体，导致促有丝分裂 成上皮细胞及基质细胞的生长因子转录。在前列腺中，睾酮由酶5 α还原酶（2型）转化成 DHT。在BPH的条件中，局部睾酮含量可比血清含量高100倍以上，导致DHT的可获得性增 加 （Gat Y等人，Andrologia 2008年10月；40 (5): 273-81)。使用5 α还原酶抑制剂（诸 如非那雄胺（finasteride))的疗法显著降低前列腺的DHT含量且进而减小前列腺体积，且 在许多情况下减轻BPH症状。认为雄激素对BPH出现而言为必需的，但似乎并非该病状的 唯一原因。
[0005] 胰岛素样生长因子（IGF)及其结合蛋白可在理解前列腺疾病（包括BPH)的病源 学中起重要作用。若干条证据支持在BPH中涉及IGF轴。IGF配位体对前列腺具有促进细 胞分裂的作用，而IGF结合蛋白（IGFBP)因其调控IGF、其他生长因子及类固醇激素的可用 性的能力而具有生长抑制性（Poliak MN等人，Nat Rev 2004;4:505-518)。在BPH组织中 的基质细胞中以尤其低的量分泌IGFBP3(Boudon C等人，J Clin Endocrinol Metab 1996; 81:612-617)，其可有利于增生性生长且在BPH的发生中起一定作用。此外，在IGFl的量 极高且同时睾酮及DHT的量较低的肢端肥大症患者呈现前列腺增大及高比率BPH(Colac) A 等人 J Clin Endocrinol Metab 1999 ;84:1986-1991 ;Colao A 等人，Eur J Endocrinol 2000 ； 143:61-69)〇
[0006] 胰岛素样生长因子（IGF)系统在刺激正常组织及癌症的增殖及存活中起关键作 用（综述于 LeRoith D，Roberts CT Jr. ,Cancer Lett 2003;195:127-37 中）。在若干 临床及流行病学研究中，高循环IGF-I浓度已与前列腺癌的风险增加相关联（Price AJ 等人，Cancer Epidemiol Biomarkers Prev. 2012 年 9 月；21 (9) : 1531-41 ;Roddam AW 等 人，Ann Intern Med 2008 ; 149 (7) :461-71)。在前列腺上皮细胞中，显示IGF-I表达增加 导致增殖速率更高及/或细胞凋亡速率更低（Takahara K等人，Prostate. 2011年4月； 71 (5) :525-37)。在许多癌症（包括前列腺癌）中观察到IGF-2基因座印记作用的损失 及 IGF-2 表达的增加 （Jarrard DF 等人，Clinical Cancer Research 1995 ;1，1471-1478 ; Fu VX等人，Cancer Research 2008 ;68, 6797-6802)且可与前列腺癌发生的风险相 关（Belharazem D 等人，Endocrine Connect ions 2012 ;1，87_94)。此外，已显不不 仅IGF-I及IGF-2配位体的表达且其受体（IGF-IR)的表达亦在晚期前列腺肿瘤中升高 (Cardillo, MR等人，Ant icancer Res. 200323, 3825-3835 ;Liao, Y等人，Hum. Pathol. 2005 ; 36(11)，1186-1196 ;Hellawell GO 等人，Cancer Res. 2002 年 5 月 15 日；62 (10) :2942-50; Turney BW 等人，BJU Int. 2011 年 5 月；107 (9) :1488-99 ;Krueckl SL 等人，Cancer Res. 2004 年 12 月 1 日；64 (23) :8620-9 ;Figueroa, JA 等人，Cancer Invest. 2001 ; 19 (I)，28-34 ;Ryan，CJ 等人，Urol. Oncol. 2007 ;25, 134-140)。在复发性及非雄激素依赖 性癌症中，亦展示AKT磷酸化的增加 （Graff JR等人，J.Biol.Chem 2000;275:24500-5; Murillo H 等人，Endocrinology 2001 ; 142:4795-805) 〇
[0007] 已显示对去势疗法有抗性的前列腺癌对持续的雄激素/AR轴操控敏感，但不具耐 受性。可使用抗雄激素（尼鲁米特（nilutamide)、恩杂鲁胺（enzalutamide))、雄激素合成 抑制剂（酮康唑（ketonazole)、乙酸阿比特龙（abiraterone acetate))、皮质类固醇（地 塞米松（dexamethasone)、泼尼松（prednisone))或雌激素治疗来操控雄激素轴。在去势难 治性疾病出现之后，已显示基于紫杉烷的化学疗法在治疗学上有效且延长存活时间。已显 示用多西他赛（docetaxel)治疗但仍有疾病进展的患者受益于乙酸阿比特龙，乙酸阿比特 龙为需要与糖皮质激素共同给予以减小副作用的选择性细胞色素 P45017A1抑制剂。恩杂 鲁胺（MDV-3100)为一种新颖AR拮抗剂，其比目前可获得的AR拮抗剂更有效阻断AR信号 传导（Tran等人，Science 2009 ;324(5928) :787-790)且已显示令人印象深刻的抗肿瘤活 性及与阿比特龙相似的对总存活率的影响。
[0008] 对IGF作用的拮抗剂及其在癌症疗法中的用途已描述于此项技术中。IGF受体 酪氨酸激酶抑制剂的公开内容参见W02009/009016及W02010/099139。针对IGF受体的 抗体的公开内容参见 W02002/53596、W02003/093317、W02003/106621、W02006/013472、 W02006/069202。针对IGF配位体的抗体的公开内容参见W02003/093317、W02005/028515、 W02007/022172、W02007/070432、W02008/155387、W02009/137758、W02010/066868。已提 议 IGF-I 受体抗体（W02008/098917、W02009/137378)及 IGF 配位体抗体（W02007/118214、 W02008/155387、W02009/137758、W02010/066868)尤其用于治疗前列腺癌。
[0009] 亦在其他公开案中论述现有技术（Poliak MN等人，Cancer Metastasis Revl998 ; 17:383-90 ;Djavan B 等人，World J Urol 2001;19:225-33 ;Wolk A 等人，J Nat I Cancer Inst 1998;90:911-5 Jiang YG 等人，Int.J. Urol. 2007;14:1034-9 ;Lin HK 等人，Proc. Nat I Acad. Sci. USA 2001;98:7200-5 ;Wen Y 等人，Cancer Res. 2000; 60:6841-5 ;Plymate SR 等人，Prostate 2004;61:276-90 ;AA Lubik 等人，Endocr Relat Cancer ERC-12-02502013, I 月 14 日首次出版；Nickerson T 等人 Cancer Res. 2001 ; 61 (16), 6276-6280 ;Pandini G 等人，Cancer Res. , 2005 年 3 月 I 日；65 ;1849 ;Bedolla R 等人01;[110&11。611^8.2007 年7月1日；13(13):3860-7;0&1^61133等人，0&11。61'0611 2011 年 5 月 17 日；19, 575-586 ;Mulholland DJ 等人，Cancer Cell, 2011 年 6 月 14 日； 19, 792-804)。
[0010] 尽管在早期检测及治疗前列腺瘤形成（包括良性前列腺增生（BPH)、前列腺癌及 尤其CRPC)中取得进展，但仍非常需要对疗法进行改良。
[0011] 附图简述
[0012] 图I. IGF及AR信号传导阻断对VCaP、MDA PCa 2b及DUCaP细胞增殖的抑制效果
[0013] 用MDV-3100及IGF配位体中和抗体以单一药物形式及以组合形式处理VCaP、MDA PCa 2b及DUCaP细胞。图1显示IGF mAb_l抗体（图1A+1C+1E)及IGF mAb_2抗体（图 1B+1D+1F)及MDV-3100单独及以组合形式在含10% FCS的生长培养基中对来源于前列腺 癌的 VCaP 细胞（图 1A+1B)、MDA PCa2b 细胞（图 1C+1D)及 DUCaP 细胞（图 1E+1F)的 2D 增殖的抑制效果。在所有三种细胞株中，用IGF抗体及MDV-3100两者的单一药物处理获得 细胞增殖的抑制，该细胞增殖的抑制可经由两种药物的组合增强，导致增殖的完全抑制。
[0014] 图2. IGF信号传导及雄激素合成阻断对VCaP、MDA PCa 2b及DUCap细胞增殖的抑 制效果
[0015] 图2展示IGF mAb_l及IGF mAb_2抗体及乙酸阿比特龙（AA)以单一药物形式及 以组合形式在含10% FCS的生长培养基中对来源于前列腺癌的VCaP、MDA PCa 2b及DUCaP 细胞的2D及3D增殖的效果。图（A)显示在2D细胞增殖分析中用IGF mAb_l处理VCaP的 结果。在⑶中，使用IGF mAb_2处理VCaP细胞。图C(IGF mAb_l)及图D(IGF mAb_2)显 示MDA PCa2b细胞的结果。用IGF mAb_l处理DUCaP细胞显示在图E中，而用IGF mAb_2处 理显示在图F中。用IGF mAb_l及mAb_2的单一药物处理获得70%至90%的细胞增殖抑 制。乙酸阿比特龙处理在较高浓度下引起细胞增殖抑制，该细胞增殖抑制可经由与抗体中 的任一者组合来增强，降低完全抑制所需的AA剂量。在3D软琼脂细胞增殖分析（G)中，用 乙酸阿比特龙及IGF mAb_2处理VCaP细胞。类似于在2D中所观察到的结果，用IGF mAb_2 的单一药物处理导致96 %细胞增殖抑制。乙酸阿比特龙处理在较高浓度下引起细胞增殖抑 制，该细胞增殖抑制可经由与IGF mAb_2组合来增强。
[0016] 图3.在IGF及AR信号传导抑制之后对VCaP、MDA PCa 2b及DUCaP细胞的蛋白质 分析
[0017] 图3显示如由西方墨点分析法（Western blot analysis)所评估的IGFmAb_l及 MDV-