一种高效利用知母的提取精制方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于中药及天然药物技术领域，具体涉及一种从知母中同时提取精制高纯 度知母黄酮苷（芒果苷、新芒果苷）、知母总皂苷及知母总多糖的制备方法。
【背景技术】
[0002] 知母为百合科植物知母（Anemarrhena asphodeloides)的根莖，具有滋阴降火，润 燥滑肠的功效。作为一种常用的中药，知母资源越来越宝贵，因此针对知母的高效综合利用 是保护其资源的有效途径之一。
[0003] 现代化学研究表明，知母中主要含有黄酮苷类成分（新芒果苷、芒果苷等）和甾体 皂苷类成分（知母皂苷A II、知母皂苷A III、知母皂苷B II、知母皂苷B III等），此外知母中 还含有多糖类成分。
[0005] 现代药理研究表明，知母具有抗病原微生物、抗血小板聚集、降血糖、解热、抗炎、 降低转氨酶等多种药理活性。其中，知母皂苷类成分具有降血糖、治疗老年性痴呆、抗血 凝、抗动脉粥样硬化及抗骨质疏松等药理作用，经水解后还形成的菝葜皂苷元，亦是一种十 分重要天然药物成分，可用于激素等药物合成的原料药。而知母中黄酮类成分芒果苷及新 芒果苷等具有降血糖的作用，可用于治疗非胰岛素依赖型糖尿病，其作用机制为：保护、修 复胰岛内分泌细胞而增加血清胰岛素浓度，并竞争性地抑制小肠上皮a -葡萄糖苷酶的活 性，从而延缓肠道对糖的吸收，起到降糖的作用；还可能通过增加靶细胞胰岛素受体数目， 改善靶细胞对胰岛素敏感性，减轻胰岛素抵抗，等途径降低血糖；并且对白内障、高血脂等 糖尿病并发症有防治作用。而知母多糖有文献报道，具有免疫调节、抗炎等多种活性。
[0006] 目前，已有专利"知母化学成分群提取物及其制备工艺"（【申请号】 201310430996. 5)，公开了一种同时分离制备知母三种化学成分群提取物的制备工艺，采用 溶剂法提取后，再经大孔树脂富集、酸水解、有机溶剂萃取及醇沉等方法进行知母总皂苷、 知母阜苷元及知母多糖成分的分离制备。但该方案在实施时存在一个缺陷：由于知母中除 了知母皂苷、知母多糖外，还含有大量的黄酮苷（芒果苷、新芒果苷等），且这些黄酮苷的极 性和知母皂苷相近，都属中等极性成分，因此，方案中采用75~95%乙醇加热回流提取时， 极性相近的知母黄酮苷和知母皂苷均会被提取出来，在大孔树脂上也能同时被吸附和解吸 附，因而采用这一方案分离制备获得的知母总皂苷中必会含有大量的黄酮苷类成分，从而 影响知母总皂苷的纯度。同时，在实施过程中还采用氯仿或乙酸乙酯萃取，有毒有机溶剂的 使用会带来溶剂残留而影响其品质。
[0007] 专利"一种知母总黄酮提取物及其同时制备知母总黄酮提取物及总皂苷提取物的 方法"（申请号201310332999. 5)也公开了一种知母综合制备方法，与上述制备工艺类似， 采用溶剂回流提取，再通过大孔树脂分离纯化。但实际上，知母黄酮苷和知母皂苷的极性接 近，30%~90%乙醇提取后，采用单一树脂大孔树脂（或聚酰胺）为吸附剂，以一定浓度范 围的乙醇溶液洗脱，获得知母总黄酮或知母总皂苷或两者的混合部位。这一方法主要存在 以下两个问题，一是浪费了知母多糖活性部位，二是知母黄酮苷和知母总皂苷在单一树脂 上的分离专属性较差，不能够获得真正纯度好的有效部位或成分。
[0008] 综上，目前已有的报道或专利实施方案中，均没有解决高效综合利用知母的提取 精制方法，方案仅针对其中的一类或两类成分进行制备，或者分离方案未有考虑到其成分 结构的特殊性，无法达到各部位（活性成分）的高效分离。因此，如何通过绿色、便捷、有效 的方案，综合制备获得知母药材中主要活性部位或成分，是解决知母资源高效利用的关键。
[0009] 从成分极性上看，知母中的三类活性成分具有一定的差异，知母多糖为大极性类 成分，而知母黄酮苷（芒果苷、新芒果苷等）及知母皂苷类成分极性相似，均为中等极性成 分，因此仅从极性上来进行分离显然是具有一定的困难。但这三类成分的结构差异较大：黄 酮苷类成分含酚羟基，可以与聚酰胺形成氢键而被特异性吸附；黄酮苷和皂苷均为糖苷类 成分，可被大孔树脂吸附；而多糖类成分不具有以上两类特征，聚酰胺及大孔树脂均无法将 其吸附。因此，考虑到知母中各类成分的特性及不同树脂的性质，若采用单一树脂（大孔树 脂）进行分离，其分离效果往往不太理想，因此可采用聚酰胺_大孔树脂联用分离技术对知 母中各类型成分进行精制分离，从而获得不同的活性部位，实现知母资源的综合利用。
【发明内容】
[0010] 本发明所要解决的技术问题，是提供一种综合利用知母的提取精制方法。
[0011] 为了解决上述技术问题，本发明采用的技术方案如下：
[0012] -种高效利用知母的提取精制方法，它包括如下步骤：
[0013] a.取知母药材，经0~50%乙醇提取，减压回收提取液，再加水使药液中每毫升含 生药量〇. 1~I. 〇g，调节药液PH至2~6,依次通过聚酰胺色谱柱和大孔树脂色谱柱；
[0014] b.知母总多糖制备：收集通过大孔树脂后的流出液，减压浓缩至50°C时相对密度 为1. 08~1. 22,加乙醇至醇浓度为50~90%，放置，析出沉淀，滤过，干燥，即得知母总多 糖；
[0015] c.芒果苷和新芒果苷的制备：聚酰胺色谱柱先以1~3倍柱体积去离子水洗脱， 再依次以1~3倍柱体积的10~30%乙醇和40~80%乙醇洗脱，收集10~30%乙醇洗 脱液，减压回收乙醇，〇~l〇°C冷藏放置，析晶，即得新芒果苷；收集40~80%乙醇洗脱液， 减压回收乙醇，0~KTC冷藏放置，析晶，即得芒果苷；
[0016] d.知母总皂苷制备：大孔树脂色谱柱先以1~3倍柱体积去离子水洗脱，再以2~ 6倍柱体积的50~90%乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液，减压回收乙醇，干燥，即得知母总皂苷。
[0017] 以上所述的高效利用知母的提取制备方法，所用聚酰胺的规格为30-100目，与知 母药材的重量比为3 :1~4 ;所用大孔树脂的类型为非极性或弱极性型大孔树脂，与知母药 材的重量比为2 :1~4。
[0018] 以上所述的高效利用知母的提取精制方法，芒果苷和新芒果苷的制备方法为：聚 酰胺色谱柱先以2倍柱体积去离子水洗脱，再依次以2倍柱体积20 %乙醇和60 %乙醇洗 脱，收集20%乙醇洗脱液，减压回收乙醇，浓缩至洗脱液10%体积，4°C冷藏放置，析晶，即 得新芒果苷；收集60%乙醇洗脱液，减压回收乙醇，4°C冷藏放置，析晶，即得芒果苷。
[0019] 以上所述的高效利用知母的提取制备方法，知母总皂苷的制备方法为：大孔树脂 色谱柱先以2倍柱体积去离子水洗脱，再以4倍柱体积的70%乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液， 减压回收乙醇，干燥，即得知母总皂苷。
[0020] 以上所述的高效利用知母的提取制备方法，所述减压回收乙醇的条件为：压力 为-0? 01 ~-0? 12MPa，温度为 60 ~80°C。
[0021] 以上所述的高效利用知母的提取制备方法，聚酰胺与知母药材的重量比为2 :1 ; 大孔树脂与知母药材的重量比为1 :1。
[0022] 有益效果：本发明与现有技术相比具有如下优点：
[0023] (1)本发明的特点在于充分考虑了知母所含化学成分类型特征，并利用聚酰胺对 知母黄酮苷吸附的专属性、大孔树脂对知母皂苷的吸附特性以及各类树脂对知母多糖均不 能吸附的性质，建立了知母综合利用提取分离和精制方案，工艺过程中避免了有毒试剂的 使用，与现有技术相比更为简单、绿色和安全。
[0024] (2)本发明聚酰胺及大孔树脂可重复使用，因此成本相对较低，适宜于规模化生 产，可大大提高知母的综合利用度，节省中药资源，产生良好的社会效益和经济效益。
[0025] (3)本发明工艺路线绿色、简单，适宜于规模化生产，所制备的知母黄酮苷（芒果 苷、新芒果苷）、知母总皂苷和知母总多糖的含量较高。
[0026] (4)为了更好地理解本发明的有益效果，下面用聚酰胺和大孔树脂吸附实验作为 进一步的说明。
[0027] a.聚酰胺对不同pH知母提取液中知母黄酮苷、知母皂苷及知母多糖类成分的静 态吸附实验
[0028] 目的：聚酰胺吸附的原理主要是氢键吸附