黑线银鲛提取物的制备方法及在酒精性肝损伤保护药中的应用
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种黑线银鲛提取物的制备方法及其在制备对酒精性肝损伤保护药 中的应用。
【背景技术】
[0002] 目前酒精中毒及成瘾已成为全球性问题，长期大量饮酒可引起全身多器官的损 害，特别对肝的损害更明显。慢性酒精中毒可导致酒精性脂肪肝、酒精性肝炎、酒精性肝硬 化、纤维化等症状，严重者会发生癌变。目前，对于酒精性肝中毒的治疗，多采用包括氨基酸 和葡萄糖输注，多种维生素，维持水、电解质及酸碱平衡等，近年来许多研究人员都力图找 到一种能有效预防和保护肝脏以减轻酒精对肝脏损伤作用的药物。
[0003] 黑线银鲛（Chimaera phantasma Jordan et Snyder)，又名带鱼藍、兔子鱼、海兔子 等是一种海产鱼类，我国沿海尚属习见，以春、冬两季产量较多。分布于太平洋西部，我国产 于南海、东海和黄海，其内骨骼全是软骨，黑线银鲛提取物的制备方法及其在制备酒精性肝 损伤保护药物中的应用研究至今未见有报道。
【发明内容】
[0004] 本发明的目的是提供一种黑线银鲛提取物的制备方法及其在制备酒精性肝损伤 保护药物中的应用，以满足现有技术的上述需求。一种黑线银鲛提取物的制备方法，其特 征在于将新鲜黑线银鲛蒸煮后剔除鱼肉，将软骨用清水冲洗、绞碎，按料液质量比为I :1. 5 加入NaOH溶液，搅拌提取4 h，然后用HCl调节pH =6~7,过滤，滤液中加 NaOH调节 pH=8. 5~9. 0,按料液与复合蛋白酶1000:1的质量比加入复合蛋白酶水解4 h。将水解液 80°C加热30 min，加入HCl调pH=3,静置，上层溶液用浮石土抽滤，加入NaOH调pH=10. 5， 双氧水脱色后过滤，滤液加入HCl调pH=7,滤液减压浓缩至小体积，沉淀干燥后得黑线银 鲛提取物。
[0005] 上述的黑线银鲛提取物在制备酒精性肝损伤保护药物中的应用。
[0006] 本发明采用大鼠酒精性肝损伤动物模型测试了制备的黑线银鲛提取物对谷胱甘 肽过氧化物酶（GSH-PX)、超氧化物歧化酶（SOD )及丙二醛（MDA)的作用。实验表明，本发明 黑线银鲛提取物可使SOD、GSH-PX含量升高，MDA含量明显降低，通过增强抗氧化酶的活 性，增强机体对过氧化反应产物的清除能力，从而发挥对酒精性肝损伤保护作用，因此本发 明的黑线银鲛提取物可用作酒精性肝损伤保护剂。
【具体实施方式】
[0007] 下面通过实施例和试验例进一步阐述本发明黑线银鲛提取物的制备，以及其在对 酒精性肝损伤保护应用的有益效果。
[0008] 实施方案 第一步：黑线银鲛提取物的制备 将新鲜黑线银鲛蒸煮后剔除鱼肉，将软骨用清水冲洗、绞碎，按料液质量比为I :1. 5加 入NaOH溶液，搅拌提取4 h，然用HCl调节pH=6~7,过滤，滤液中加 NaOH调节pH=8. 5~ 9. 0,按料液与复合蛋白酶1000:1的质量比加入复合蛋白酶水解4h。将水解液80°C加热 30 min，加入HCl调pH=3,静置，上层溶液用浮石土抽滤，加入NaOH调pH=10. 5,双氧水脱 色后过滤，滤液加入HCl调pH=7,滤液减压浓缩至小体积，沉淀干燥后得黑线银鲛提取物。
[0009] 第二步：制剂的制备 (1) 本发明黑线银鲛提取物胶囊制剂的制备 分别称取上述步骤制备的黑线银鲛提取物l〇〇mg、淀粉395mg、硬脂酸镁5mg，均匀混 合，填充成胶囊。
[0010] (2)本发明黑线银鲛提取物片剂的制备 分别称取上述步骤制备的黑线银鲛提取物l〇〇mg、淀粉295mg、乳糖100mg，均勾混合， 用湿法制粒、干燥，整粒后与5mg硬脂酸镁混合，压成片剂。
[0011] 试验例1 :黑线银鲛提取物治疗酒精性肝损伤作用的药效学研究 1、 试验材料 (1) 黑线银鲛 (2) 超氧化物歧化酶（SOD)试剂盒、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-PX)试剂盒及丙二醛 (MDA)试剂盒均购自南京建成生物工程研究所 (3)雄性Wistar大鼠，华中科技大学同济医学院实验动物学部提供 2、 试验方法： 雄性Wistar大鼠40只，按体重随机分为4组，A组为空白对照组，B组为酒精模型 组，C、D组分别为本发明黑线银鲛提取物低、高剂量干预组，分别给予50、100 Hig^kg1M1灌胃，除空白组外，其余实验动物给予50%乙醇8 ml · kg 1 · d 1灌胃，持续2周；第3周把 乙醇剂量递增为12 ml · kg 1 · d \持续灌胃6周，末次灌胃后禁食不禁水12h，给予戊巴比 妥纳麻醉，腹主动脉取血，分离血清，在冰台上取出肝组织，按照试剂盒提供的操作步骤进 行测定 SOD、GSH-PX 及 MDA。
[0012] 3、实验结果 (1)本发明黑线银鲛提取物对酒精中毒大鼠血清中GSH-PX、SOD及MDA含量影响 与空白对照组比较，酒精模型组血清中GSH-PX、SOD含量降低MDA含量升高；与酒精 模型组比较，本发明黑线银鲛提取物低、高剂量组均能抑制GSH-PX、SOD的降低及MDA含 量的升高。
[0013] 表1本发明黑线银鲛提取物对酒精中毒大鼠血清中GSH-PX、SOD及MDA含量影 响
(2) 本发明黑线银鲛提取物对酒精中毒大鼠肝组织中GSH-PX、S0D、MDA含量影响 与空白对照组比较，酒精模型组肝组织中GSH-PX、SOD含量降低MDA含量升高；与 酒精模型组比较，本发明黑线银鲛提取物低、高剂量组均能抑制GSH-PX、SOD的降低及MDA 含量的升高。
[0014] 表2本发明黑线银鲛提取物对酒精中毒大鼠肝组织中GSH-PX、S0D、MDA含量影 响
试验例2:本发明黑线银鲛提取物的急性毒性试验 1、 试验动物： 昆明种小鼠，体重20±2g，由青岛市药检所实验动物中心提供 2、 药物： 本发明的黑线银鲛提取物 3、 试验方法： 根据国家药品监督管理局颁布修订的"中药新药研究技术要求"，对本发明的黑线银 鲛提取物进行急性毒性实验。因受药物浓度及体积限制，无法测定LD50，故进行最大给药 量实验。取昆明种小鼠30只，雌性各半，ig，给予胶囊剂中药物lg/mL，每只0.8 mL，SP小 鼠的最大灌胃体积，用药后观察小鼠活动状态、饮食、粪便、呼吸、体重及死亡情况，连续观 察 14d. 4、试验结果： 各组小鼠灌胃给药后生长良好，体重增加，行为正常，均未见死亡及明显反应。将动物 处死后，肉眼观察各主要脏器无异常现象。
[0015] 结果表明，本发明的黑线银鲛提取物最大剂量口服应用，对动物无明显损害，未发 现对机体产生的毒性反应，是一种安全可靠的药物。
【主权项】
1. 一种黑线银鲛提取物的制备方法，其特征在于将新鲜黑线银鲛蒸煮后剔除鱼肉，将 软骨用清水冲洗、绞碎，按料液质量比为1 :1.5加入NaOH溶液，搅拌提取4 h，然后用HCl 调节pH=6~7,过滤，滤液中加NaOH调节pH=8. 5~9. 0,按料液与复合蛋白酶1000:1的 质量比加入复合蛋白酶水解4 h，将水解液80°C加热30 min，加入HCl调pH =3,静置，上 层溶液用浮石土抽滤，加入NaOH调pH = 10. 5,双氧水脱色后过滤，滤液加入HCl调pH=7， 滤液减压浓缩至小体积，沉淀干燥后得黑线银鲛提取物。2. 权利要求1所述的黑线银鲛提取物在制备酒精性肝损伤保护药中的应用。
【专利摘要】一种黑线银鲛提取物的制备方法及在制备对酒精性肝损伤保护药中的应用，其特征在于将新鲜黑线银鲛蒸煮后剔除鱼肉，将软骨用清水冲洗、绞碎，按料液质量比为1:1～1.5加入NaOH溶液，搅拌提取4h，然后用HCl调节pH=6～7，过滤，滤液中加NaOH调节pH=8.5～9.0，按料液与复合蛋白酶1000:1的质量比加入复合蛋白酶水解4h。将水解液80℃加热30min，加入HCl调pH=2，静置，上层溶液用硅藻土抽滤，加入NaOH调pH=10.5，双氧水脱色后过滤，滤液加入HCl调pH=7，滤液减压浓缩至小体积，沉淀干燥后得黑线银鲛提取物。本发明黑线银鲛提取物通过增强抗氧化酶的活性，增强机体对过氧化反应产物的清除能力，可用作酒精性肝损伤保护剂。
【IPC分类】A61P1/16, A61K35/60
【公开号】CN105125584
【申请号】CN201510607245
【发明人】石振艳, 高建军, 杨俊杰, 刘坤, 高华, 刘小红
【申请人】青岛大学
【公开日】2015年12月9日
【申请日】2015年9月22日