喹啉-磺酰胺类化合物作为Th17细胞分化抑制剂的应用
【技术领域】
[0001] 本发明设及化合物的新应用，特别设及哇嘟-横酷胺类化合物作为化17细胞分化 抑制剂的应用。
【背景技术】
[0002] 自免疫疾病大约影响了 5%的人口，包括牛皮癖，多发性硬发症，风湿性关节炎，哮 喘和炎症性肠道病在内的大约70多种人类疾病都和自免疫失调有关（Gocxlnowetal.， 2005)。目前自免疫疾病的治疗主要依赖于一些非选择性的免疫抑制剂，其疗效有限且副作 用大，因而在临床中还没有非常特效的治疗自免疫疾病的药物。因此开发新型的高疗效低 副作用的自免疫药物成为一种急切的临床需要。最新研究表明一种新的T细胞亚群化17细 胞和人类自免疫疾病和相关动物模型的发生相关化inden2006;KAlyetal.，2006)。 在风湿性关节炎、牛皮癖、哮喘、炎症性肠炎等自免疫疾病中，化17细胞的特征细胞因子 IL17表达上调，而抑制IL17表达和化17细胞形成可W减轻自免疫疾病的发生或临床严重 程度度owmanetal.，2006;iaklyetal.，2006)。现有研究表明化17细胞的分化形成受 到转录因子R0R丫t的控制，而R0R丫t基因敲除的小鼠中化17细胞的分化能力下降，数量 减少，同时诱导发生的小鼠EAE自免疫疾病概率和临床打分指标均有显著的降低（Ivanov etal.，2006)。运意味着R0R丫t的功能抑制剂可W做为开发化17介导的自免疫疾病治 疗药物的定向祀标。
[000引 R0R丫t是类固醇类核受体家族成员，蛋白分子中包括一个保守的DNA结合域和有 12个螺旋构成的配体结合域，而配体结合域是结合配体、核定位和二聚体形成的重要区域。 类固醇类受体共激活分子SRCs能够通过结合配体结构域的AF2区域来解聚转录抑制复合 物，招募转录激活分子，启动相关基因转录（GlassandRosenfeld, 2000)。目前R0R丫t 的天然配体还没有找到，但最近两个研究找到了人工合成分子地高辛及其衍生物化uhet al.，20011;Rijita-Satoetal.，2011)和SRlOOUSoltetal.，2011)能够特异性 的结合到ROR丫t的配体结构域，抑制ROR丫t的功能并降低化17细胞的分化能力，减弱小 鼠自免疫疾病EAE的临床症状。然而地高辛及其衍生物具有很强的毒性（Paulaetal.， 2005)，而SRIOOI分子尽管在体外能够有效抑制化17细胞分化，但在体内实验中即使在高 浓度给药下（40mg/kg)，也只能略微减轻EAE的临床症状。此外，SR1001能够同其他的RORs 作用，选择性较差（Soltetal.，2011)。运些研究一方面表明抑制R0R丫t的功能来治疗 自免疫疾病是一个可行的方案，但目前还没有找到一个理想的祀标药物。因此寻找高效低 毒且有较强特异性的R0R丫t功能抑制剂将是开发化17介导的自免疫疾病药物的一个重要 方向。
[0004] 参考文献： BowmanEP,Chacker i anAA,Cua DJ. Rationale and safety of anti-interleukin-23 and anti-interleukin-17Atherapy. Curr Opin Infect Dis 2006; 19: 245-52. Fujita-Sato S, Ito S, Isobe T, Ohyama T, Wakabayashi K, Morishita K, Ando 0，Isono F. Structural basis of digoxin that antagonizes民0民yt receptor activity and suppresses Thl7 cell differentiation and interleukin (IL)-17 production. J Biol Chem 2011; 286: 31409-17. Glass, C. K.，and民osenfeld, M. G. (2000). The coregulator exchange in transcriptional functions of nuclear receptors. Genes Dev 14，121-141 Goodnow CC, Sprent J, Fazekas de St Groth B, Vinuesa CG. Cellular and genetic mechanisms of self tolerance and autoimmunity. Nature 2005; 435: 590-7. Huh JR, Leung MWL, Huang PX, Ryan DA, Krout MR, Malapaka RRV, Qiow J, Manel N, Ciofani M, Kim SV, Cuesta A, Santori F民，Lafaille JJ, Xu HE, Gin DY,民astinejad F, Littman DR. Digoxin and its derivatives suppress TH17 cell differentiation by antagonizing民0民yt activity. Nature 2011; 472: 486-90. Ivanov II，McKenzie BS, Zhou L, Tadokoro CE, Lepelley A, Lafaille JJ, Cua DJ, Littman DR. The orphan nuclear receptor民0民gammat directs the differentiation program of proinflammatory IL-17+T helper cells. Cell 2006; 126: 1121-33. Kidly K, Liu L, Na S, Sedgwick JD. The IL-23/Th(17) axis: therapeutic targets for autoimmune inf lamination. Cur r Op in Immunol 2006; 18: 670-5.. Paula S, Tabet MR, Ball WJJ. Interactions between cardiac glycosides and sodium/potassium-ATPase: three-dimentional structure-activity relationship models for ligand binding to the E2-Pi form of the enzyme versus activity inhibition. Biochemistry 2005; 44: 498-510. Solt LA, Kumar N, Nuhant P, Wang YJ, Lauer JL, Liu J, Istrate MA, Kamenecka M, Roush WR, Vidovi R, Sch rer SC, Xu J"H, Wagoner G, Drew PD, Griffin PR, Burris TP. Suppression of Thl7 different!过tion过nd过utoimmunity by过synthetic RO民ligand. Na化re 2011; 472: 491-4。
【发明内容】
[0005] 本发明的目的在于提供哇嘟-横酷胺类化合物作为化17细胞分化抑制剂的应用。
[0006] 发明人通过基于转录因子活性的巧光素酶活性筛选系统，发现哇嘟-横酷胺类化 合物具有抑制化17细胞分化的关键转录因子R0R丫t的能力，抑制能力EC50为0. 391yM， 在利用体外化17细胞分化实验验证运些化合物具有抑制化17分化的的功能，包括能够显 著降低R0R丫t的转录表达，能够抑制化17的效应分子IL17A的转录表达，IL17A细胞因子 在培养物中的分泌水平也得到明显抑制，哇嘟-横酷胺类化合物及其盐酸盐衍生物有望开 发成为治疗自免疫疾病，特别是牛皮癖，多发性硬发症，系统性红斑狼疮，风湿性关节炎，哮 喘或炎症性肠道病的药物。
[0007] 上述哇嘟-横酷胺类化合物的结构式为
，其中X为面族元素。
【附图说明】
[0008] 图1是不同浓度的哇嘟-横酷胺类化合物与相对巧光强度之间的关系图； 图2是哇嘟-横酷胺类化合物对转录因子R0R丫tmRNA表达量的影响结果； 图3是哇嘟-横酷胺类化合物对IL17A细胞因子分泌量的影响图。
【具体实施方式】
[0009] 在W下实验中，所述哇嘟-横酷胺类化合物的结构式为 (式I)，当C1元素换成其他面族元素氣（F)、漠（Br)或舰（I)时，也具有与C1相似的效果， 在此不依依给出实验结果。
[0010] 基于转录因子活性的巧光素酶活性筛选系统可W按现有方法构建。或按下述的方 法构建得到： 材料： 细胞系化rkat和293T为本实验室保存；D册a细菌菌株由北京中科院遗传所马润林 教授馈赠；限制性内切酶购自美国fermentas公司；DNA连接酶购自美国的肥B