鳄鱼血多糖在乳腺癌治疗中的应用
【技术领域】
[0001] 本发明属于药物化学领域，具体设及鳄鱼血多糖在乳腺癌治疗中的应用。
【背景技术】
[0002] 鳄鱼是最古老的爬行动物，在地球上已生存了 2亿3千多万年，因而具有"活化 石"之称。
[0003] 中医古书记载，鳄鱼血具有清热解毒、消炎、消肿瘤等功效。近年来，国外学者对鳄 鱼血的功效进行了研究，已有鳄鱼血具有抗菌、抗病毒等方面作用的报道，而且有助于提升 实验动物在病理条件下的初级免疫应答能力。现代研究表明，鳄鱼血有两大显著的功能特 点：鳄鱼全血、血红蛋白、血清、血浆和白细胞有抗细菌、真菌、病毒和抗癌活性。另一个显著 功能特点是，鳄鱼血红蛋白的携氧量超过其它动物的100倍W上，运种特殊的血红蛋白进 入人体和人体血红蛋白合成后可提高人体的血液携氧量，将足够的氧送到大脑及身体的各 个部位，增强体液和细胞的活力及抗突变能力。
[0004] 鳄鱼血之所W有如此多的功效，我们认为可能与血液中的多糖有很大的关系，因 为大量研究表明，多糖与免疫功能的调节、细胞与细胞的识别、细胞间物质的运输、癌症的 诊断与治疗等都有着密切的关系，具有抗病毒、抗肿瘤与免疫调节作用。因此我们将鳄鱼血 中的多糖提取出来，进行了抗肿瘤活性的研究。
【发明内容】
阳〇化]有鉴于此，本发明旨在提出鳄鱼血多糖在乳腺癌治疗中的应用，W解决现有技术 中存在的问题。
[0006] 为达到上述目的，本发明的技术方案是运样实现的：
[0007] 鳄鱼血多糖在制备乳腺癌治疗药物中的应用。
[0008] 进一步的，所述应用是在制备抑制乳腺癌生长或转移的治疗药物中的应用。
[0009] 进一步的，所述鳄鱼血多糖为从鳄鱼血血粉中分离纯化后所得的含至少一种多糖 组分的混合物。
[0010] 进一步的，所述鳄鱼血多糖包含1~3种多糖组分。
[0011] 更进一步的，治疗乳腺癌的所述药物包含鳄鱼血多糖和药学上可接受的酸、碱、 盐、水合物或醋及其他辅料。
[0012] 更进一步的，所述药物可制备成片剂、胶囊、口服液体制剂、乳液和注射液中的至 少一种。
[0013] 相对于现有技术，本发明所述的鳄鱼血多糖制备乳腺癌治疗药物中的应用具有W 下优势：
[0014] 所述鳄鱼血多糖为首次从鳄鱼血血粉中提纯的多糖成分，同时所述鳄鱼血多糖与 免疫功能的调节、细胞与细胞的识别、细胞间物质的运输、癌症的诊断与治疗等都有着密切 的关系，具有抗病毒、抗肿瘤与免疫调节作用；同时，所述鳄鱼血多糖成分在药学上可与酸、 碱、盐、水合物或醋；w及其他辅料结合制备成片剂、胶囊、口服液体制剂、乳液、注射液或它 们的组合，作为治疗癌症或肿瘤药物使用，具有明显提高抗肿瘤功能，并有效地控制肿瘤细 胞的生长，更加有利于抗肿瘤活性的研究。
【附图说明】
[0015] 构成本发明的一部分的附图用来提供对本发明的进一步理解，本发明的示意性实 施例及其说明用于解释本发明，并不构成对本发明的不当限定。在附图中：
[0016] 图1示出了鳄鱼血干粉中提取的多糖粗提取物过Se地adexG-200柱后的洗脱曲 线；
[0017] 图2示出了MTT检测鳄鱼血多糖中S种不同组分对MDA-MB-231乳腺癌细胞增殖 的抑制作用；
[0018] 图3示出了M1T检测鳄鱼血多糖中S种不同组分对MCF-7乳腺癌细胞增殖的抑制 作用；
[0019] 图4示出了MTT检测鳄鱼血多糖中S种不同组分对SUM159乳腺癌细胞增殖的抑 制作用；
[0020] 图5示出了鳄鱼血多糖中组分ABPSI对MDA-MB-231细胞迁移的抑制作用； 阳02U 图6示出了鳄鱼血多糖中组分ABPSII对MDA-MB-231细胞迁移的抑制作用； 阳02引 图7示出了鳄鱼血多糖中组分ABPSIII对MDA-MB-231细胞迁移的抑制作用； 阳02引图8示出了鳄鱼血多糖中组分ABPSI对MCF-7细胞迁移的抑制作用；
[0024] 图9示出了鳄鱼血多糖中组分ABPSII对MCF-7细胞迁移的抑制作用； 阳02引图10示出了鳄鱼血多糖中组分ABPSIII对MCF-7细胞迁移的抑制作用；
[0026] 图11示出了鳄鱼血多糖中组分ABPSI对SUM159细胞迁移的抑制作用；
[0027] 图12示出了鳄鱼血多糖中组分ABPSII对SUM159细胞迁移的抑制作用； 阳02引 图13示出了鳄鱼血多糖中组分ABPSIII对SUM159细胞迁移的抑制作用。
【具体实施方式】
[0029]下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完 整地描述，需要说明的是，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施 例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员所获得的所有其他实施例，都属于本发明 保护的范围。
[0030] 其中，实施例中，所用的试验材料及其来源包括： 阳0川 1.细胞系
[0032]MDA-MB-231 (人乳腺癌细胞）：购自南京凯基生物科技发展有限公司；
[0033]MCF-7(人乳腺癌细胞）：购自南京凯基生物科技发展有限公司；
[0034] SUM159(人乳腺癌细胞）：购自南京凯基生物科技发展有限公司；
[0035] 实验药物与试剂
[0036] 鳄鱼血冻干粉：粉末状，由北京百生康生物科技有限公司提供。
[0037] 四甲基偶氮挫盐（MTT):上海生工生物工程有限公司，货号：TB0799-lg，批号： XP1008B3012J，级别：分析纯，规格Ig。
[0038] 二甲基亚讽值MSO):购自上海生工生物工程有限公司，货号：DN3039A，批号： SJ0731S4013J，级别：分析纯，规格500血，用于M1T法溶解紫色结晶。 W39] 二甲基亚讽值MS0)细胞培养级：购自北京索莱宝科技有限公司，货号： D8370-500,批号：2P005970,级别：细胞培养级，规格500血，用于细胞冻存，及药物配制。[0040]RPMI1640培养基：购自赛默飞世尔科技有限公司，批号：NYG0920,规格：500血。 阳〇W膜蛋白酶：购自上海生工生物工程有限公司，货号：T0458-10,批号：0301C314,级 另IJ:USP，规格：10g。 柳42] 3.主要仪器
[0043]AKTA系统：GE公司，型号：UPC-900
[0044] 生物安全柜：西班牙泰事达灯elstar)，型号：BioIIA。
[0045] C〇2培养箱：施都凯仪器设备（上海）有限公司，型号：STIKIL-161HI。
[0046] 倒置相差显微镜：厂家：奥林己斯，型号：CKX41。
[0047] 岛津UV-1800紫外分光光度计：岛津企业管理（中国）有限公司，型号：UV-1800 ; W48]电子天平：上海奥豪斯仪器有限公司，型号：AR2202CN;
[0049] 台式冷冻离屯、机：赛默飞世尔科技公司，型号：ST16R;
[0050] 超声波细胞破碎机：赛默飞世尔灯hermoFisher),型号：SCIENTZ-IID;
[0051] 旋转蒸发仪：上海亚荣生化仪器厂，型号：RE-5205 ;
[0052] 4°C冰箱：青岛海尔股份有限公司，型号：BCD-192KJ;
[0053] 满縱混匀器：海口市其林贝尔仪器制造有限公司，型号：QZ-861。
[0054] 4.所用试剂的配制方法包括： 阳化5] 四甲基偶氮挫盐（MTT)储液：取M1T粉末1.Og，溶于200ml憐酸缓冲液（PBS)中， 终浓度为5mg/ml，用0. 22ym滤膜过滤W除去溶液里的细菌，分装，-20°C避光保存。其中， 溶液的配制及使用均应在无菌生物安全柜中操作。
[0056] 下面将参考附图并结合实施例来详细说明本发明。
[0057] 实施例1鳄鱼血多糖的制备方法
[0058] 1、鳄鱼血多糖粗提物的制备
[0059]称取鳄鱼血冻干粉4.Og，按料液比1:20加入相应的双蒸水（d地20)，于超声波细 胞破碎机中，破碎5min;4°C离屯、机中4600巧m/min,离屯、lOmin，取上清液，重复3次，合并 上清液，加入3倍体积的无水乙醇静止过夜，460化pm/min，离屯、lOmin后，弃去上清液，沉淀 用适量无水乙醇清洗3次，离屯、弃上清液后，用适量乙酸吹打成粉末状，得到鳄鱼血多糖粗 提取物。
[0060] 2、鳄鱼血多糖不同组分的分离纯化
[0061] 根据蛋白质在氯仿等溶剂中变性的特点，把氯仿与正下醇按4:1体积混合后，置 于栋色瓶中保存。将鳄鱼血多糖粗提取物溶于d地20中，按1:4在多糖溶液中加入氯仿-正 下醇溶液，混合后，剧