用于治疗眼部疾病的蛋白质slurp-1的制作方法
【技术领域】
[0001] 本发明设及一种含有SEQIDNO: 1的蛋白质W及包含该蛋白质的组合物，用于诱 导或加速受试者眼部癒痕形成（cicatrisation)和/或预防受试者眼部感染。
【背景技术】
[0002] 眼部，特别是角膜和结膜处的损伤是病人就诊时最常见的疾病，也是视力受损最 主要的原因之一。造成损伤的原因很多，主要是由于：过敏、感染（细菌、病毒和真菌性的）、 干眼综合症、手术及其他外伤。运些损伤有害且疼痛感严重。运些损伤的症状可W是眼干、 灼烧感和沙质性眼部刺激。有些症状还表现为发痒、摩擦感、刺痛感或眼部疲劳。其他症状 包括眼部疼痛、发红、拉拽感W及眼后压迫。眼表面的损伤增加了对强光的不适感和敏感 性。
[0003] 眼表面损伤需要快速治疗和愈合，W避免伤情恶化W及溃瘍等并发症，运些有可 能导致视觉敏锐度下降，在一些最为严重的病例中还会导致失明。在干眼综合症引起的损 伤的治疗中，存在着多种润滑溶液和水凝胶。但是运些产品只能缓解症状，却不能加速损伤 愈合过程。
[0004] 对于较深的损伤，会用到某些维生素A溶液和促进粘蛋白分泌的组合物，它们虽 然可能有助于愈合，但功效却有限。 阳0化]虽然有些化学化合物和生物分子被发现参与了其他组织的伤口愈合，但具体针对 眼部应用的选择（范围）仍然很有限，而且目前没有有效的分子可W使用。
[0006] 人体成分B (Human component B)(下文称为SLURP-1)是Ly-6/uPAR超家族中的 成员，运由氨基酸序列比较所证明。运个超家族包含C末端的共有序列CCXXXXCN和不同数 量的Ly-6/uPAR结构域重复。整个序列含有多个可产生蛋白质特异性二硫键的半脫氨酸残 基（从8到10个）U气
[0007] 取决于GPI错定信号序列的存在，Ly-6/uPAR超家族可W分成两个亚家族W。
[0008] SLURP-I属于Ly-6/uPAR超家族的第一亚家族，不具有GPI错定信号序列。SLURP-2 也属于同一亚家族的成员4'5^。先天性掌巧角化病（MaldeMeleda,MdM)患者常常与 SLURP-I突变有关，并且MdM基因位于染色体8q24. 3上Ly-6基因簇上WW。
[0009] 第二亚家族包含带有GPI错定信号的蛋白质并且包括几种蛋白质：视黄酸诱导基 因E巧IG-E)、E48抗原（人LY-6D)、LY細、前列腺干细胞抗原（PSCA)、CD59或保护素、Lynxl 和UPAR(尿激酶受体）MW。
[0010] WO94/14959中描述了SLURP-1。简单说，在透析的浓缩尿液中首次发现并提纯 了该蛋白质，上述的浓缩尿液经过了吸附剂和特定纯化过程处理。其是一种在其成熟形式 (103氨基酸-SEQIDNO:2-带有N-末端信号肤）中的81氨基酸（SEQIDNO: 1)蛋白，其 分子量约为8.9kD。它的序列位于人染色体8的长臂上（如很多Ly6/uPAR超家族的成员一 样），运说明经过染色体复制事件之后存在潜在的协同进化（共进化，co-evolution)W。
[0011] SLURP-I有两种不同的存在形式，运取决于在39位置酪氨酸上是否存在着硫酸基 (sul化tegroup) :I型为硫酸化，2型则没有硫酸化。SLURP-1在多种器官W及诸如血液 和尿液的体液中检测到。它主要由角化细胞和上皮细胞生成，因此广泛分布于上皮组织中 [19-24]。 阳01引此外，系统发育分析表明SLURP-I和Ly-6/uPAR超家族成员的关系密切，与蛇神经 毒素的关系也密切W。蛇神经毒素对乙酷胆碱受体具有抑制作用，因此抑制细胞与胞外介 质之间的离子交换，进而阻止细胞信号传递M'ln。蛇神经毒素与SLURP-I的S维结构相似 性：SLURP-I很可能具有指"型表观，运正是蛇（神经毒素）蛋白的特异性特征，运说明 两者之间具有重要的序列同源性w'w。两种蛋白质的相似性和蛇神经毒素的抑制活性指 明了：SLURP-I可能像烟碱乙酷胆碱受体一样能与离子通道结合并与之相互作用。
[001引非神经元细胞中的nA化R活化可W改变参与W下进程的蛋白质的基因表达，所述 进程诸如细胞周期调控、细胞调亡、细胞与细胞间W及细胞与基质间的相互作用。研究较多 的同聚受体是由a7亚基组成；该特异性受体活化由不同的初始信号转换（转导），但都导 向一个共同的结束点。转换信号同时参与了离子活动和蛋白质激酶信号传递。化ernyavsky 等人的结论是上述双活化（离子活动和蛋白质激酶信号传递）可带来基因表达和细胞形 态（W及随后的角质形成细胞移动）的同时改变EW。抑制离子或蛋白质信号会导致部 分抑制，而抑制两种机制则导致它们效应的完全抑制，运些清楚地证实了同时和互补性 (complementary)信号传递。
[0014] SLURP-I和烟碱受体之间的相互作用已经被多种出版物所证实，基于乙酷胆碱的 存在，在使用SLURP-I的同时在人类角质形成细胞中发现了激动剂活性（与蛇神经毒素相 反）?。运种相互作用通过胆碱途径控制细胞功能，也可能产生上皮细胞粘附、移动和伤口 愈合然而一个团体得到了不一致的结果，其导致结论为：SLURP-I正在减缓愈合过程 而SLURP-2加速愈合过程?。上述结果还与同组的第S实验进行对比，表明：SLURP-1和 SLURP-2的组合，无论是与SLURP-I自身的抑制活性还是与SLURP-2自身的加速活性相比， 在皮肤愈合过程中都带来了附加的（additive)积极效果。
[0015] 还需要进一步研究来确定SLURP-I或SLURP-2是否对伤口愈合具有普遍适用性。
[0016] 另外，在眼科领域，亟需开发药物和相关组合物W促进眼部疾病的高效、无副作用 的愈合和完全恢复角膜透明性。
【发明内容】
[0017] 本发明的目的是提供生物分子和/或组合物用于治疗眼部疾病，特别是诱导或加 速癒痕形成，减少炎症，和预防受试者眼部感染。
[001引通过本发明实现了上述目的，本发明设及权利要求1中限定的蛋白质。
[0019] 除非另有说明，本文中使用的所有科技术语的含义等同于本发明所属领域普通技 术人员所一般理解的含义。虽然与本文所描述的相似或相同的多种方法和材料可应用于本 发明设及的实践或试验中，但是下文中会提供优选的方法和材料。除非另有说明，文中描述 的本发明应用的技术是本领域普通技术人员所公知的标准技术。
【附图说明】
[0020] 图1示出了氨基酸全长序列SEQIDNO:2和成熟SLURP-I蛋白SEQIDNO: 1之间 的序列比较，（分别为氨基酸1-103和氨基酸23-103)。
[0021] 图2示出了对照组和SLURP-I治疗组在乙醇诱导的完全去上皮后在特定时间点的 角膜上皮伤口的巧光染色图像。对照组包括没有接受治疗（对照）的组，W及接受结膜下 注射赋形剂（PB巧（SCJ赋形剂）治疗的组。粗体百分数指明角膜伤口表面的组平均值，括 号内的百分数表示针对所考虑的组的代表性角膜的值。
[0022] 图3A是示出对照组和SLURP-I治疗组中完全去上皮后角膜伤口愈合的时间进程 的曲线图。经过计算的愈合率平均值±SEM。
[0023] 图3B示出了对照组和SLURP-I治疗组完全去上皮后第二天的愈合率曲线图巧化g 的SLURP结膜下给药和滴注（instillation))。
[0024] 图3C示出了对照组和SLURP-I治疗组中完全去上皮后第S天的愈合率曲线图 (50ng的SLURP结膜下给药和滴注）。
[0025] 图4示出了PBS治疗组和SLURP-I治疗组在校准的乙醇诱导的去上皮后在指定时 间点角膜上皮伤口的巧光素染色图像。粗体百分数表示角膜损伤表面的组平均值，括号内 的百分数表示针对所考虑的组的代表性角膜的值。
[0026] 图5A是示出对照组和SLURP-I治疗组去上皮后第0天（当天）到第二天所测量 的伤口面积的时间进程的曲线图。
[0027] 图5B是在对照组和SLURP-I治疗组在校准的去上皮后T0h-T4化之间计算的伤口 愈合率的曲线图。
[0028] 图5C是去上皮后T4化的伤口愈合程度的曲线图。伤口愈合程度是由比值计算得 出：每组、每只角膜在T4化的巧光素伤口面积/基线巧光素伤口面积，W百分数表示。
[0029] 图6示出了通过使用SLURP-I治疗人角膜上皮细胞系hTCEpi所开展的伤口愈合 实验的照片。
【具体实施方式】
[0030] 根据本发明，使用包含SEQIDN0:1的蛋白来诱导或加速受试者眼部癒痕形成 (cicatrisation)和/或预防受试者眼部感染。
[0031] 该眼部疾病优选选自糖尿病角质化（di油etickeratinopathy)、角膜炎、结膜炎、 角膜结膜炎、葡萄膜炎、角膜外伤、角膜磨损、角膜灼伤、角膜慢性溃瘍、角膜营养不良、持续 性角膜上皮缺损（P邸）、激