纳米颗粒肽组合物的制作方法
【专利说明】纳米颗粒化组合物 发明领域
[0001] 本发明设及特别地用于药物的携带肤的纳米颗粒，并且包括用于治疗例如骨密度 的病症的方法。 阳00引发明背景
[0003] 本发明设及包括用于治疗哺乳动物，特别地人的组合物和制品W及制备和施用此 类组合物和制品的方法。
[0004] 生物活性剂诸如肤通常遭受差的稳定性（特别地热稳定性），运可限制所述试剂 在制备、加工、胆存和/或递送过程中所经受的条件。通常用一种或多种防腐剂和/或稳定 剂配制用于人用的医药肤制剂。此外，有限的胃肠稳定性通常给生物活性肤的有效口服施 用造成障碍。 阳0化]WO2011/154711描述了具有被糖冠包围的金核并且用作肤诸如膜岛素的载体的 葡萄糖纳米颗粒。
[0006] 通常，通过每日皮下（S.C.)注射将特立帕肤（人甲状旁腺激素的一个重组片段 (残基1-34))用于骨质疏松症治疗。
[0007] 仍然对能够携带生物活性剂肤的其他纳米颗粒组合物、W及向受试者递送此类生 物活性剂肤的方法存在未满足的需求。
[0008] 本发明解决运些和其它需要。
[0009] 发明概述
[0010] 本发明广泛地设及携带特立帕肤肤的纳米颗粒组合物。本发明人已发现具有谷脫 甘肤配体的冠的纳米颗粒结合特立帕肤（在一些情况下具有每纳米颗粒约15个特立帕肤 分子的结合能力）。如本文中定义的纳米颗粒从而提供用于配制特立帕肤W及将其递送至 需要特立帕肤治疗性治疗的受试者的载体。
[0011] 因此，在第一方面，本发明提供了纳米颗粒组合物，其包含：
[0012] (a)纳米颗粒，其包含：
[0013] (i)包含金属和/或半导体的核；
[0014] (ii)包含多个共价地连接于所述核的配体的冠，其中所述多个配体包含至少一个 谷脫甘肤；和
[0015] 化）至少一个非共价地结合于所述冠的特立帕肤肤。
[0016] 根据本发明的方面的任一方面，特立帕肤肤可包含与如SEQIDNO: 1所示的全长 氨基酸序列具有至少70%、80%、90%、95%或99%氨基酸序列同一性的氨基酸序列或由 所述氨基酸序列组成。在一些情况下，特立帕肤肤包含全长氨基酸序列SVSEIQLMHNLGKHLN SMERVEWL服KLQDVHNF(SEQIDN0:1)或由所述序列组成。
[0017] 沈QIDNO: 1是下面如沈QIDNO: 2所示的和在UniProt登录号P01270 (136版， 日期为2012年10月31日）下公开的人甲状旁腺激素多肤的完全115个氨基酸序列的残 基32-65的34个氨基酸的序列。 阳0化]〉spIP01270IPTHY_HUMAN甲状旁腺激素OS=智人GN=PTH阳=1SV= 1
素的84个氨基酸的序列（残基32-115)W斜体字显示（SEQIDN0:3)。特立帕肤的34个 氨基酸的序列（残基32-65)加W下划线显示（SEQIDNO: 1)。
[0020] 〉sp|P01270|32-l巧
[0022] 在根据本发明的某些情况下，特立帕肤肤可选自由W下组成的组： 阳02引 a)包含与沈QIDN0:1或3中所示的全长序列具有至少70%、80%、90%、95% 或99%氨基酸序列同一性的氨基酸序列或由所述氨基酸序列组成的肤；
[0024] m)包含SEQIDNO: 1或3中所示的全长氨基酸序列或由所述氨基酸序列组成的 肤；
[0025] (iii)包含SEQIDNO: 1或3中所示的全长氨基酸序列的变体序列或由所述变体 序列组成的肤，其中所述变体与SEQIDN0:1或3中所示的所述全长氨基酸序列相异在于 不超过1、2、3、4、5、6、7、8、9个或不超过10个氨基酸的添加、缺失、取代或修饰；
[00%] (iv)包含（i)-(iii)中任一项的连续片段或由所述片段组成的肤，所述片段具有 至少15、20、25个或30个氨基酸的序列长度。
[0027] 优选地，特立帕肤肤展现特立帕肤的生物活性。具体地，（i)-(iv)中任一项的所 述特立帕肤肤可在特立帕肤活性的体外或体内生物测定中展现至少50%的SEQIDN0:1的 特立帕肤肤的活性或至少50%的SEQIDNO:3的特立帕肤肤的活性。在某些情况下，特立 帕肤活性可包括选自由W下组成的组的一种或多种活性：PTH受体激动剂活性；成骨细胞/ 破骨细胞骨形成/再吸收平衡的修改；肾的巧和/或儀的再吸收的增加；血浆巧和/或憐酸 盐浓度的调节；和肠巧吸收的增加。
[0028] 甲状旁腺激素（PTH)增加血清巧，部分通过增加骨的再吸收来实现该作用。因此， 长期升高的PTH将耗竭骨胆存。然而，对PTH的间歇性暴露已被发现激活成骨细胞并且具 有合成作用。该合成作用的机制是未知的但临床研究已确认利用特立帕肤的治疗诸如特 立帕肤的每日一次注射具有刺激新的骨形成的净作用，从而导致增加的骨矿物质密度，并 且改善骨质疏松症患者的骨矿物质密度和骨矿物质含量（Teriparatide=AReviewElaena 如attrocchi,F^harmD和HelenKourlas,F^harmD;ClinHier. 2004:26:841-8；34)。在根据本 发明的方面的任一方面的优选情况下，特立帕肤肤展现例如在向哺乳动物受试者间歇性施 用后对受试者的骨形成产生净正作用的能力。
[0029] 已发现，根据本发明的纳米颗粒可被提供有多个数量的形成冠的配体。例如，在一 些情况下，冠包含每核至少5、10、20或至少50个配体，例如每核约10至1000个配体。具 体地，根据本发明的任何方面的纳米颗粒组合物可包含每核至少5、10、15、20个或至少50 个谷脫甘肤配体。
[0030] 每核结合的特立帕肤肤分子的数目不受特别限制。对于某些应用，可期望使用少 至每核1、2、3或4个特立帕肤肤，然而在其它情况下，本发明的纳米颗粒可包含每核结合的 至少5、10、15、20个或至少50个或更多个特立帕肤肤分子。
[0031] 在一些情况下，根据本发明的方面的任一方面，可将至少一个特立帕肤肤W可逆 的方式结合于纳米颗粒的冠。具体地，可将特立帕肤肤结合于冠，W便至少一部分结合的特 立帕肤肤在将纳米颗粒与生理溶液接触后从纳米颗粒释放。
[0032] 在一些情况下，根据本发明的方面的任一方面，所述配体包含单独的或与其它种 类的配体结合的谷脫甘肤，例如本文中特别地设想谷脫甘肤与糖配体（包括含葡萄糖配 体）的组合。
[0033] 在一些情况下，根据本发明的方面的任一方面，纳米颗粒包含至少10、至少20、至 少30、至少40或至少50个配体，所述配体为（i)谷脫甘肤配体；或（ii)谷脫甘肤配体和 除谷脫甘肤之外的配体，诸如含糖配体。
[0034] 在一些情况下，根据本发明的方面的任一方面，纳米颗粒的核的直径在Inm至5nm 的范围内。
[0035] 在一些情况下，根据本发明的方面的任一方面，包括其配体的纳米颗粒的直径在 2皿至5化m，任选地3皿至3化m，或4皿至20皿或5皿至15皿的范围内。
[0036] 在一些情况下，根据本发明的方面的任一方面，核包含选自由W下组成的组的金 属：Au、Ag、Cu、Pt、Pd、Fe、Co、Gd和化，或其任意组合。
[0037] 在一些情况下，根据本发明的方面的任一方面，核具有磁性。
[0038] 在一些情况下，根据本发明的方面的任一方面，核包含半导体。半导体可包含金属 原子，诸如儒。或者或另外地，半导体可包含非金属原子。本文中特别地设想有机半导体。 根据本发明的优选半导体可选自由W下组成的组：砸化儒、硫化儒、蹄化儒和硫化锋。
[0039] 在一些情况下，根据本发明的方面的任一方面，核能够用作量子点。 W40] 优选地，根据本发明的第一方面的组合物包含多个，例如100、1000、100000个或 更多个所述纳米颗粒，其中所述组合物中至少1〇%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、 80%、90 %或95%的纳米颗粒具有至少一个结合的特立帕肤。
[0041] 在一些情况下，根据本发明的方面的任一方面，纳米颗粒组合物包含载体，诸如溶 液、聚合物、粉剂或乳膏，其中悬浮纳米颗粒和结合的特立帕肤肤。在某些情况下，组合物可 呈用于递送至或穿过皮肤、口、阴道、直肠的贴剂或薄膜的形式或呈用于递送至口、鼻、肺或 直肠或阴道内的喷雾剂的形式。组合物可呈缔合形式、悬浮液或被包含在单个包装、容器或 载体中。在某些情况下，组合物可呈一个或多个剂量（例如确定量的特立帕肤肤或特立帕 肤肤活性单位），诸如W治疗剂量或确定数目的剂量的形式。
[0042] 在一些情况下，根据本发明的方面的任一方面，纳米颗粒组合物还包含至少一种 非共价或共价地结合于所述核和/或所述冠的渗透促进剂。如在2013年2月5日提交的 共同未决的GB专利申请第1301991. 4号（其全部内容出于所有目的通过引用明确地并入 本文），某些渗透促进剂可有利地结合于纳米颗粒而不替换任何显著的活性肤，诸如如本文