一种降血脂虫草培养基提取物的制备方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及食用菌提取领域，具体的说涉及一种降血脂虫草培养基提取物的制备 方法。
【背景技术】
[0002] 蛹虫草（Cordyceps militaris)，又名北冬虫夏草，是麦角菌科虫草属真菌。具有 益肺肾、补精髓、止血化痰的功效，现代研究发现有延缓衰老、抗疲劳和耐缺氧，调节免疫系 统，抗缺氧、增加心肌营养和血流量等多种作用。目前蛹虫草人工栽培的培养基中为麦粒培 养基和蛹虫草的菌丝体的混合物，其中含虫草素、多糖等多种活性成分。研究发现收获子实 体后的培养基具有降血脂作用，开发降血脂的提取物将对虫草资源的充分利用带来很好的 促进作用。
[0003] 提取虫草素的方法有大孔树脂提取法、超临界法、阴阳离子交换树脂提取法等。但 超临界法对于设备的投资巨大，阴阳离子交换法需要用HCl和氨水等调节pH值，极易残留， 不利于食品安全，同时得率太低；另外，现有的方法大多步骤复杂，成本高，对原材料造成很 大的浪费，不能用于工业化生产。就以上问题，已经有专利文献公开了改进工艺。
[0004] 现有技术CN101157712B (200710170485. 9, 一种虫草素的分离纯化方法）公开了 如下内容：该方法包括如下步骤：①虫草素的粗提：将蛹虫草固体干燥培养基粉碎，加入10 倍重量的水中，浸泡10 - 60min后，加热至KKTC并保持1 一 3h，过滤；滤渣重复上述步骤， 再提取1次，合并滤液，滤液静置过夜；②粗提物的提纯：将上述滤液过大孔吸附树脂柱， 使树脂对提取液中的虫草素进行充分吸附：先用10%乙醇洗脱除去部分水溶性杂质，再用 50%乙醇洗脱，并收集50%乙醇部分进行浓缩干燥；③虫草素的进一步纯化：将上述获得 的样品用水溶解后，过C18柱，用水洗脱，收集水相部分，浓缩，置4°C静置析晶；④虫草素纯 品的制备：用蒸馏水重结晶3 - 6次，获得虫草素纯品。
[0005] 现有技术CN103601812A(201310592568. 2利用大孔吸附树脂从蛹虫草中提取虫 草素及虫草多糖的方法）公开了 ：本发明方法将蛹虫草子实体（虫草素含量在0. 2-0. 5% ) 干燥至5%以下的含水量，用10-30目的筛网进行粉碎，其中粉碎粒度以20目最佳。将粉碎 后的原料，以水为提取溶剂，料水比是1:5-20,提取温度50-70°C，每次提取时间是2-10h。 将得到的提取液用浓缩到比重为I. 1-1. 5g/cm3的稠膏，其中浓缩温度控制在50-70°C，真 空度在-0. 005至-0. 009Mpa，加2-5倍稠膏体积的乙醇，静置过夜取上清液备用，得醇沉物， 干燥即粗虫草多糖。对上清液进行稀释处理，以备进行大孔吸附树脂纯化。上柱时控制上 样溶液虫草素质量浓度为0. 6-2. Omg/mL、上样体积2-10BV、上样流速l-3BV/h ;解吸溶剂为 20-50%乙醇水溶液（优选25% )、洗脱流速2-5BV/h、所用解吸溶剂体积4-10BV。将洗脱 下来的洗脱液在压力为-〇. 〇〇5Mpa至-0. 009Mpa、温度为50-70°C的状态下进行浓缩，将其 浓缩至稠膏状态，然后将其干燥后得到虫草素含量15%以上的虫草素干膏。
[0006] 现有技术CN(102558264B(201210014073. 7提取蛹虫草中虫草素和虫草多糖的方 法）公开了：本发明所提出的提取蛹虫草中虫草素和虫草多糖的方法于包括以下步骤：水 提：将蛹虫草培养基粉放入提取罐中，向提取罐中加入质量是蛹虫草培养基粉质量12 - 18 倍的水，在水温为55 - 58°C的环境下热回流提取，然后对提取液进行过滤后再减压浓缩； 醇提：向减压浓缩的提取液中加入是其6 - 10倍的食用酒精，然后利用离心机分离出上 清液和沉淀物；柱提上清液：首先对上清液进行浓缩，回收酒精，再将浓缩液加入到树脂柱 内，并采用蒸馏水进行洗脱，将洗脱液收集后进行浓缩，对浓缩液喷雾干燥后即可获得虫草 素；柱提沉淀物：首先对沉淀物放入容器中，然后依次用食用酒精、丙酮、乙醚对其进行清 洗，再对清洗后的沉淀物进行干燥，再向经干燥过的沉淀物中加入8 - 12倍的水，加热溶 解后去除其内的蛋白质，再进行一次浓缩，然后再加入2. 5-3. 5倍食用酒精进行醇沉，对醇 沉后的沉淀依次用无水乙醇、丙酮、乙醚冲洗，将冲洗后的沉淀物进行干燥，所得干燥物即 为虫草多糖。在水提步骤中，如果水的温度高于58°C，虫草素就易分解；如果水的温度低于 55°C，不易使虫草素溶解。
[0007] 现有技术CN(101928316 A 201010235132. 4 -种高纯度片状虫草素晶体的制备方 法）公开了 ：一种高纯度片状虫草素晶体的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：（1)将 北冬虫夏草固体培养基残基粉碎后置于容器内，用提取剂对北冬虫夏草固体培养基残基进 行提取；提取剂流出后用大孔树脂进行吸附，然后流回装有北冬虫夏草固体培养基残基的 容器循环提取；提取时间为10~20hr ;所述的大孔树脂为非极性大孔树脂；北冬虫夏草固 体培养基残基、提取剂和大孔树脂的用量比为Ikg :1~20L :0. 3~0. 5L ;提取剂为水；（2) 用洗脱剂洗脱大孔树脂，得到洗脱液；洗脱速度为〇. 5~2BV/hr ;北冬虫夏草固体培养基残 基与洗脱剂的用量比为Ikg :1~2L ;洗脱剂为10~50 %体积浓度的乙醇水溶液；（3)取洗 脱液浓缩和结晶，分离固体得到虫草素粗品；(4)将虫草素粗品洗涤和重结晶，得到高纯度 片状虫草素晶体。
[0008] 现有技术0附0207069(?(201010566708.5 -种同时制备腺苷、虫草素、呢-(2-羟 乙基）腺苷化学对照品的方法）公开了 ：一种同时制备腺苷、虫草素、N6-(2-羟乙基）腺 苷化学对照品的方法，蛹虫草提取物，经树脂柱分离及制备高效液相色谱两步高效纯化，同 时获得纯度大于98%的腺苷、虫草素、N6-(2-羟乙基）腺苷三种化学对照品，其具体步骤 如下：1)树脂柱分离除杂：蛹虫草菌丝体，乙醇溶液提取，提取液进行树脂柱分离，先以水、 10 %乙醇溶液洗脱除去杂质，然后以体积分数在15 % -25 %之间的任一乙醇溶液洗脱，收 集相应乙醇洗脱物，浓缩干燥得红色浸膏；2)制备高效液相色谱精制：红色浸膏用低浓度 甲醇溶液溶解，微孔滤膜过滤，反相高效液相制备色谱分离，以甲醇-水溶液为洗脱体系， 紫外检测器260nm监测，分别收集制备图谱中三个主要的色谱峰，相应流份干燥即可得到 纯度大于98 %的三个对照品，其外观为白色粉末。
[0009] 现有技术CN101928316A(201010235132. 4 -种高纯度片状虫草素晶体的制备方 法）公开了：虫草素含量的测定方法（高效液相色谱法）如下：（1)标准品溶液的配制准 确称取2. 5毫克虫草素标准品，用纯净水加热溶解后定容到10毫升，冷却至室温备用。（2) 色谱条件C18色谱柱（150mm*4. 6mm);流动相为甲醇：水=15 : 85 ;流速l.Oml/min ;柱温 40°C ;检测波长258nm〇
[0010] 现有技术0附0207069(?(201010566708.5 -种同时制备腺苷、虫草素、呢-(2-羟 乙基）腺苷化学对照品的方法）公开了：红色浸膏用体积分数为15%甲醇水溶液溶 解，配置成150mg/ml的供试品溶液，经0.45 ym微孔滤膜过滤；制备型高效液相柱填料 品牌为Chromatorex C18键合相填料；粒径为10 ym，柱长20cm、直径7. 5cm ;进样体积 为10ml，以体积浓度15%甲醇-水溶液为洗脱体系，流速控制在160ml/min，紫外检测器 260nm检测，分别收集保留时间分别为8. 2-8. 7min (腺苷）、10. 3-10. 9min (虫草素）和 14. 8-15. 2min(N6-(2-羟乙基）腺苷）的流份，以上三种高纯流份干燥即可得到纯度大于 98 %的相应对照品，其外观为白色粉末。
【发明内容】
[0011] 本发明首先提供了一种降血脂虫草培养基提取物的制备方法，该方法包括如下步 骤：
[0012] 虫草培养基用100°C水提取，水提液中加入过XDA-200B树脂，树脂用去离子水清 洗后，加入95%乙醇溶液洗脱，乙醇部分浓缩得到虫草培养基中树脂吸附部分。
[0013] 具体的说，本发明的一种虫草提取物的制备方法，包括如下步骤：
[0014] 1)虫草培养基的提取：蛹虫草培养基中加入8-12倍重量的蒸馏水中，煮沸并保持 微沸l_3h，离心收集沉淀；沉淀加入8-12倍重量的蒸馏水，煮沸并保持微沸l_3h，