越橘花青素组合物及其在制备防治近视药物或食品的应用
【技术领域】
[0001] 本发明属于医药技术领域，特别设及越橘花青素组合物及其在制备防治近视药物 或食品的应用。
【背景技术】
[0002] 近视是最常见的视觉障碍，影响全世界超过30%的青少年和成人。近视已成为危 害我国青少年视力健康的重大公共卫生问题。青少年近视不仅给学习和生活带来诸多不 便，而且高度近视还会引起一系列严重的眼部并发症，运已成为主要致盲原因之一。如何预 防近视、阻控近视的发展成为当今医学眼科学界需要攻克的重大课题。我国具有高于世界 其他地区、种族的近视发病率和最多的人口总量，对近视人群发病机制研究具有非常重大 的社会意义。
[0003] 花青素是自然界一类广泛存在于植物中的水溶性天然色素。研究表明花青素作 用于视黄醒异构酶，可加速视紫红质生成速率，W促进视觉敏锐度。它还是强效的抗氧化 剂，可维持正常的细胞连结、血管稳定、增进微细血管循环、提高微血管和静脉的流动。还可 抑制胶原酶降解加固胶原纤维，增强毛细血管抗性。国外研究表明其可影响与近视相关的 眼部特征，且儿童服用无毒副作用；其对近视眼的作用是否是一个多因素、多途径影响的过 程，目前国内外尚未有全面深入的研究。
[0004] 现有技术CN103860625A提供了一种越橘提取物眼用制剂，主要有越橘提取物和 蜂胶提取物组成。未知越橘提取物何种具体化合物为起作用的真正物质，更未知哪些物质 的组合可W产生协同作用，提高防治眼科疾病效果。 阳0化]现有技术CN103570664A公开了一种从越橘中提取原花青素的方法。但未有分离 到具有优异防治眼科疾病效果的活性物质，未知何种具体花青素化合物为起作用的真正物 质，更未知哪些物质的组合可W产生协同作用，提高防治眼科疾病效果。
[0006] 具体花青素中那种提纯物起到主要控制近视和预防近视发生的作用，是否可W将 运种物质做成更容易被眼部吸收的剂型应用临床，对于临床预防和治疗近视具有非常现实 的意义，同时将给近视防控带来深远的社会意义。所W，本领域仍需进一步的深入研究。
【发明内容】
[0007] 针对现有技术存在的技术问题，本发明第一方面：对所有越橘花青素中的有效成 分进行筛选，选定出最有效的防治眼科疾病，特别是控制近视眼轴延长和巩膜重塑的组合 物W及单体成分。
[0008] 具体的：提供了一种越橘花青素组合物，所述越橘花青素组合物W氯化花青素计 (CisHiiClOe)，氯化花青素大于总黄酬质量的4%。
[0009] 其中，优选化合物主要含有飞燕草素（delphinidine)、矢车菊素（cyanidins)、二 甲花翠素（malvidine)、巧药素（peonidine)，各花青素的实际量为0.OOlmg-lOOOmg。
[0010] 该组合物化合物的总的分子结构如下：
[0011]
阳012] R-OH,R2-H,OHorOMe(Me=Methyl:-邸3)
[0013] 其中，本发明所述的飞燕草素值el地inidin)的结构式如下：
[0014]
[0015] 其中，R1 = 0H，R2 = 0H。
[0016] 本发明所述的矢车菊素（切anidin)的结构式如下：
[0017]
[0018] 其中，R1 = 0H，R2 =H。
[0019] 本发明所述的二甲花翠素（malvidine)的结构式如下：
[0020]
[0021] 其中，R1 = 0-邸3,R2 = 0-邸3。
[0022] 本发明所述的巧药素（peonidine)的结构式如下：
[0023]
[0024]其中，Rl= 〇-邸3,R2 =无
[00巧]本发明所用的飞燕草素（delphinidine)、矢车菊素kyanidins)、二甲花翠素 (malvidine)、巧药素（peonidine)。包括其药学上可接受的盐或盐的溶剂化物，溶剂化物优 选为水合物，W及其各种物理形态，如晶型或无定型态。所述飞燕草素、矢车菊素、二甲花翠 素W及巧药素均可W通过市售获得，或者通过现有技术已知的制备工艺分离获得。
[00%] 本发明越橘花青素组合物难W通过简单的提取获得，需要通过现有技术如大孔树 脂或者硅胶吸附树脂的方式进行花青素富集，然后加入到常规的越橘花提取物中才能得 到。
[0027] 本发明第二方面：所述越橘花青素组合物在制备防治近视药物或食品的应用。
[0028] 所述防治近视优选通过控制近视眼轴延长，或者巩膜重塑来实现。
[0029] 本发明第=方面：提供一种含有所述组合物的临床应用制剂，具体的本发明的药 物组合物为了临床使用需要，可W制备为口服、注射、外用等多种剂型的制剂，如片剂、胶囊 剂、注射粉针剂、注射夜，滴眼剂等，所述药物组合物中可W含有一种W上药学上可接受的 赋形剂，所述赋形剂包括各种支持剂、助溶剂等。
[0030] 在本发明的一个方面，为了临床需要，采用本发明的组合物可W进一步与其他眼 科疾病的药物联用，所述优选药物，包括但不限于抗炎剂，抗眼疲劳剂，眼补水剂等临床常 用药物。
[0031] 本发明组合物相对于现有技术的有益效果在于： 阳03引 （1)、本发明提供的越橘花青素组合物，W氯化花青素计（CisHiiCl化)，氯化花青素 大于总黄酬质量的4%，其中，含有飞燕草素（del地inidine)、矢车菊素（cyanidins)、二甲 花翠素（malvidine)、巧药素（peonidine),各花青素的实际量为O.OOlmg-lOOOmg。所述组 合物起到了协同作用，相对于单用某一单体成分，越橘提取物花青素组合物具有更为优异 的防治眼科疾病的用途。
[0033] (2)、本发明的药物组合利用体外细胞和体内动物实验在体研究，观察越橘花青素 对豚鼠形觉剥夺性近视（抑M)模型的防治作用；分离视网膜神经上皮、视网膜色素上皮-脉 络膜复合体和巩膜组织；对可能参与的信号通路的分子生物学指标进行测定发现，本发明 组合物通过控制近视眼轴延长或者巩膜重塑来实现上述优异效果。
【具体实施方式】：
[0034] W下优选实施例是对本发明的进一步说明，应当理解为不是对本发明的限制。
[0035] 本发明提供的越橘花青素组合物，其中，氯化花青素大于总黄酬质量的4%，其 中，氯化花青素主要含有飞燕草素（delphinidine)、矢车菊素（cyanidins)、二甲花翠素 (malvidine)、巧药素（peonidine),其中，各花青素的实际量为O.OOlmg-lOOOmg。可W通过 现有技术如大孔树脂或者硅胶吸附树脂的方式进行富集，然后加入到常规的越橘花提取物 中。
[0036] 实施例1:细胞培养实验鉴定越橘花青素组合物的效果
[0037] 1材料与方法
[0038] 仪器：细胞培养设备
[0039]细胞系：人视网膜色素上皮细胞（A-RPE19)、人胚胎眼巩膜成纤维细胞（HFSF)、视 网膜神经节细胞
[0040] 给药浓度：0.001mo；L-0.1mol(例如，下述W 0.0 lmol实验的技术方案）
[0041] 方法：细胞共浴方法，M1T法，流式细胞仪（FCM)方法，高效液相色谱法，PCR和 WesternBlot W42]效果计算方法:M1T法找到不产生细胞毒性的浓度，检测共浴后MMP-2，Collagen-I，CTGF，TGF-P，RAR-P，Smad3含量。推断有效性W及作用机制。
[0043] 结果：体外培养的巩膜细胞，在TGF-P因子的存在下，加越橘花青素组合物的组 mmp2蛋白表达量（0.36)比较不加花青素组表达量mmp2(0.64)明显降低，collagenI蛋白 表达量（0.35)比较不加花青素组的表达量collagen1(0. 32)明显增高。
[0044] 总结：通过上述结果，本发明提供的越橘花青素组合物，其中，氯化花青素大 于总黄酬质量的4%，其中，氯化花青素主要含有飞燕草素（delphinidine)、矢车菊素 kyanidins)、二甲花翠素（malvidine)、巧药素（peonidine)，其中，各花青素的实际量为 0.OOlmg-lOOOmg。所述氯化花青素化合物的组合起到了协同作用，相对于不含或者低于相 应氯化花青素含量的越橘提取物组合物具有更为优异的防治效果。
[0045] 实施例2 :动物实验实验鉴定越橘花青素组合物的效果
[0046] 1材料与方法
[0047] 仪器：A超生物测量仪
[0048] 给药浓度：300-500mg/kg(例如，下述W 400mg mg/kg技术方案）
[0049] 方法：豚鼠形觉剥夺性近视（抑M)模型，分为正常对照组、花青素灌胃28天。第28 天每组随机选取3只豚鼠6只眼球，行肥染色及免疫组化观察眼部组织结构及mmp2蛋白 及collagen I蛋白的表达，眼球后极部巩膜组织采用实时定量基因扩增巧光法及蛋白印迹 法检测观mmp2蛋白和collagen I蛋白的含量。 阳化0] 效果：遮盖灌药组和不灌药组相比，其遮盖眼的mmp2蛋白表达量（0. 662 + 0. 016) 明显降低，collagen I蛋白表达量（0.801 + 0.020);相对于不灌药组遮盖眼的表达量： 117 + 0. 014)，collagen1(0. 511 + 0. 019)，均有明显增高。
[0051] 总结：通过上述结果，W及分离视网膜神经上皮、视网膜色素上皮-脉络膜复合体 和巩膜组织；对可能参与的信号通路的分子生物学指标进行测定发现，本发明组合物通过 控制近视眼轴延长或者巩膜重塑来实现上述效果。
[0052] 特别是本发明提供的越橘花青素组合物，其中，氯化花青素大于总黄酬质量的 4%，其中，氯化花青素主要含有飞燕草素（delphinidine)、矢车菊素（cyanidins)、二甲花 翠素（malvidine)、巧药素（peonidine)，其中，各花青素的实际量为0.OOlmg-lOOOmg。所述 氯化花青素化合物的组合起到了协同作用，相对于不含或者低于相应氯化花青素含量的越 橘提取物组合物具有更为优异的防治效果。
[0053] 应当理解的是，本领域普通技术人员均可由说明书及本申请的权利要求所公开的 内容，根据需要加w适当的变化或者替代方式，而运些变化和替代方式均含于本发明的范 畴。
【主权项】
1. 越橘花青素组合物，其特征在于，氯化花青素大于总黄酮质量的4%。2. 根据权利要求1所述的越橘花青素组合物，其特征在于，组合物中主要含有 飞燕草素（delphinidine)、矢车菊素（cyanidins)、二甲花翠素（malvidine)、苟药素 (peonidine)，各花青素的实际量为0?OOlmg-1000 mg03. 权利要求1一2任一权利要求所述的越橘花青素组合物在制备防治近视药物或食品 的应用。4. 根据权利要求3所述的所述防治近视药物或食品的应用，其特征在于，防治近视通 过控制近视眼轴延长来实现。5. 根据权利要求3所述的所述防治近视药物或食品的应用，其特征在于，防治近视通 过巩膜重塑来实现。6. -种临床应用的制剂，其特征在于，所述制剂含有权利要求1一2任一权利要求所述 的越橘花青素组合物。7. 根据权利要求6所述的一种临床应用的制剂，其特征在于，所述制剂制备为口服、注 射或外用给药剂型。8. 根据权利要求7所述的一种临床应用的制剂，其特征在于，所述剂型包括片剂、胶囊 剂、注射粉针剂、注射夜，滴眼剂。
【专利摘要】本发明提供了越橘花青素组合物及其在制备防治近视药物或食品的应用，其中，氯化花青素大于总黄酮的4％，并提出有效的单体成分矢车菊素,飞燕草素，二甲花翠素和芍药素。本发明组合物以及单体均能通过控制近视眼轴延长或者巩膜重塑来实现优异效果，并且组合物的效果最好，对于临床预防和治疗近视具有非常现实的重要意义。
【IPC分类】A61P27/02, A61K31/352
【公开号】CN105213367
【申请号】CN201510715911
【发明人】邓宏伟, 孟晶, 沈静
【申请人】邓宏伟, 孟晶, 沈静
【公开日】2016年1月6日
【申请日】2015年10月28日