一种翁布提取物的制备方法及其应用
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种翁布提取物的制备方法，同时还涉及用该方法制备的翁布提取物 的应用，属于藏药领域。
【背景技术】
[0002] 高尿酸血症（hyperuricemia)是一种由于噪呤代谢紊乱和/或尿酸排泄障碍所致 血尿酸增高，细胞外液尿酸盐呈超饱和的疾病。血尿酸超过416μmol/L时即可明确诊断为 高尿酸血症。超高蛋白膳食是引起嘌呤代谢紊乱的重要原因，过量糖、脂肪、蛋白质的摄入 及大量饮酒与患病率增加均有重要关系。当血尿酸浓度过高时，尿酸以钠盐的形式沉积在 关节及皮下组织，导致痛风的发生，因此高尿酸血症患者中约5%~12%会发展成为痛风。 痛风不仅可以侵犯骨和关节，而且还容易累及肾脏和心血管系统。高尿酸血症和痛风是当 前严重危害人类健康的的代谢性疾病。
[0003] 高尿酸血症可由两方面的原因引起：（1)尿酸生成增多：人体内尿酸由内源性和 外源性两种途径产生，外源性尿酸来源于食物，约占人体尿酸总量的20% ;内源性尿酸主要 来源于核苷酸分解代谢，约占80% ;因此，高嘌呤膳食和体内核酸的大量分解均可导致血尿 酸的升高。其中，黄嘌呤氧化酶是尿酸生成的关键酶，它能催化次黄嘌呤氧化为黄嘌呤再氧 化为尿酸。（2)尿酸排泄减少：尿酸主要通过肾脏排泄，肾脏对尿酸的排泄通过肾小球的滤 过、分泌前的重吸收、肾小管的主动分泌及分泌后重吸收来调节，其中以肾小管对尿酸重吸 收为主。尿酸盐为极性分子，需离子通道才能通过肾小管上皮细胞膜，目前发现的离子通道 (尿酸盐转运蛋白）中，阴离子交换器是关键的离子通道，该通道可促进肾小管对尿酸的重 吸收，决定尿酸从肾脏排出的多少。
[0004] 目前西药治疗高尿酸血症主要从以下两方面：一是抑制尿酸生成的药物，如别嘌 呤醇、秋水仙碱，非留体类抗炎药（NSAIDs)，糖皮质激素等；二是促进尿酸排泄的药物，如 丙璜舒，苯磺唑酮，苯溴马龙等；但上述药物都有不同程度的副作用，如过敏性皮疹，药物 热，胃肠不适，白细胞及血小板减少，肝功能损害等。
[0005] 高尿酸血症为理化检查发现，中医无相应的病证名，但中医对高尿酸血症所致的 痛风早有认识。《金匮要略?中风历节》篇："寸口脉沉而弱，沉即主骨，弱即主筋，沉即为肾， 弱即为肝……历节黄汗出，故日历节"。从症状来看，现代医学的痛风应当属于中医的痹证、 "历节"的范畴。就其病因病机，历代医家论述颇多，高尿酸血症的形成主要是由于先天禀 赋不足，肾中精气有亏损，后天恣嗜膏粱肥甘，日久伤脾，脾失健运，肾失蒸腾，造成全身气 化失司，津液代谢障碍，最终导致内湿滋生，湿邪弥散于营血而成。元代朱丹溪在《格致余 论?痛风论》中说："彼痛风者，大率因血受热，己自沸腾，其后或涉冷水，或立湿地，或扇取 凉，或卧当风，寒凉外搏，热血得寒，汗浊凝涩，所以作痛。夜则痛甚，行于阴也。"其论将病名 定为痛风，发病原因为血热与风，寒，湿相搏而成，临床以疼痛为主要特征。中医药治疗高尿 酸血症的研究已经逐步受到重视和关注，并且取得了一定的成就，其疗效也已显现出诸多 优越性。
[0006] 藏药翁布原植物为柽柳科（Tamaricaceae)水柏枝属水柏枝Myricaria germanica(L. )Desv.，莖直立且多分枝，枝红棕色，叶小，线形或线状长圆形，分布于西藏、 青海、四川、云南、甘肃、陕西、山西，生长于海拔2000~2900m的河滩环境。据《晶珠本草》 记载，翁布有清热解毒，发散透疹，治黄水病的功效，为我国西藏等少数民族地区的常用药 物。但有关翁布的基础研究尚十分有限，使该药材的后续推广和应用受到限制。现代研究 关于翁布的化学成分及药理作用鲜有报道，也未见翁布提取物的制备方法及其用于制备治 疗高尿酸血症药物的报道。
【发明内容】
[0007] 本发明的目的是提供一种翁布提取物的制备方法及其应用，能够有效用于治疗高 尿酸血症。
[0008] 为了实现上述目的，本发明所采用的技术方案是提供一种翁布提取物的制备方 法，包括以下步骤：
[0009] (1)翁布药材粉碎，过20-80目筛，再对其进行超临界二氧化碳萃取，萃取温度 40-50°C、萃取压力20-30MPa、萃取时间l-2h，萃取分离得到挥发油和药渣A，收集挥发油， 得到翁布提取物A;
[0010] (2)在步骤（1)的药渣A中加入浓度60-95%乙醇，50-80°C温浸提取2-4次，每次 提取时间为l_3h，每次加入浓度60-95%乙醇用量为药渣A重量的8-12倍，过滤，得到药渣 B和提取液，合并提取液，回收乙醇，浓缩干燥，得到翁布提取物B;
[0011] (3)将步骤（2)的药渣B加水回流提取1-4次，每次提取时间为l-3h，每次水用量 为药渣B重量的6-10倍，过滤，合并提取液，浓缩至相对密度1. 07,上样于大孔吸附树脂，先 用水洗脱，再用浓度30-70%的乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液，回收乙醇，浓缩干燥，得到翁布 提取物C;
[0012] (4)将翁布提取物A、翁布提取物B和翁布提取物C混合均匀，得到翁布提取物。
[0013] 步骤（3)的大孔吸附树脂为HPD600大孔吸附树脂或LSA-21大孔吸附树脂。
[0014] 本发明所采用的技术方案还在于提供一种上述方法制备的翁布提取物在制备治 疗高尿酸血症药物中的应用。
[0015] 本发明制备的翁布提取物可制成片剂、胶囊剂或颗粒剂，所用方法均为本领域的 常规技术手段。
[0016]本发明首次以柽柳科水柏枝属水柏枝Myricariagermanica(L. )Desv.(翁布）， 制备翁布提取物，原料来源丰富，成本低，使用方便，见效快，患者痛苦小，不抗药，毒副作用 小，安全系数高。本发明翁布提取物的制备方法简单，操作方便，所制备的翁布提取物能够 有效用于高尿酸血症的治疗，有力推动了翁布的研究推广。实验表明，翁布提取物能够显著 降低高尿酸血症患者血尿酸、肌酐、尿素氮含量及高尿酸血症模型组大鼠血尿酸、尿尿酸、 黄嘌呤氧化酶、血肌酐、尿素氮含量。
【具体实施方式】
[0017] 以下结合实施例对本发明的【具体实施方式】作进一步详细说明。
[0018] 实施例1
[0019] 本实施例的翁布提取物的制备方法，包括以下步骤：
[0020] (1)翁布药材粉碎，过20目筛，再对其进行超临界二氧化碳萃取，萃取温度45°C、 萃取压力20MPa、萃取时间lh，萃取分离得到挥发油和药渣A，收集挥发油，得到翁布提取物 A；
[0021] (2)在步骤⑴的药渣A中加入浓度60%乙醇，50°C温浸提取2次，每次提取时间 为lh，每次加入浓度60%乙醇用量为药渣A重量的10倍，过滤，得到药渣B和提取液，合并 提取液，回收乙醇，浓缩干燥，得到翁布提取物B;
[0022] (3)将步骤⑵的药渣B加水回流提取1次，提取时间为lh，水用量为药渣B重量 的6倍，过滤，将提取液浓缩至相对密度1. 07,上样于HPD600大孔吸附树脂，先用水洗脱，再 用浓度30%的乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液，回收乙醇，浓缩干燥，得到翁布提取物C;
[0023] (4)将翁布提取物A、翁布提取物B和翁布提取物C混合均匀，得到翁布提取物。
[0024] 实施例2
[0025] 本实施例的翁布提取物的制备方法，包括以下步骤：
[0026] (1)翁布药材粉碎，过80目筛，再对其进行超临界二氧化碳萃取，萃取温度50°C、 萃取压力30MPa、萃取时间2h，萃取分离得到挥发油和药渣A，收集挥发油，得到翁布提取物 A；
[0027] (2)在步骤⑴的药渣A中加入浓度95%乙醇，80°C温浸提取4次，每次提取时间 为3h，每次加入浓度95 %乙醇用量为药渣A重量的8倍，过滤，得到药渣B和提取液，合并 提取液，回收乙醇，浓缩干燥，得到翁布提取物B;
[0028] (3)将步骤（2)的药渣B加水回流提取4次，每次提取时间为3h，每次水用量为药 渣B重量的10倍，过滤，合并提取液，浓缩至相对密度1. 07,上样于HPD600大孔吸附树脂， 先用水洗脱，再用浓度70%的乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液，回收乙醇，浓缩干燥，得到翁布提 取物C;
[0029] (4)将翁布提取物A、翁布提取物B和翁布提取物C混合均匀，得到翁布提取物。
[0030] 实施例3
[0031] 本实施例的翁布提取物的制备方法，包括以下步骤：
[0032] (1)翁布药材粉碎，过40目筛，再对其进行超临界二氧化碳萃取，萃取温度40°C、 萃取压力25MPa、萃取时间1. 5h，萃取分离得到挥发油和药渣A，收集挥发油，得到翁布提取 物A;
[0033] (2)在步骤⑴的药渣A中加入浓度75%乙醇，70°C温浸提取3次，每次提取时间 为2h，每次加入浓度75%乙醇用量为药渣A重量的12倍，过滤，得到药渣B和提取液，合并 提取液，回收乙醇，浓缩干燥，得到翁布提取物B;
[0034] (3)将步骤（2)的药渣B加水回流提取2次，每次提取时间为2h，每次水用量为药 渣B重量的8倍，过滤，合并提取液，浓缩至相对密度1. 07,上样于LSA-21大孔吸附树脂，先 用水洗脱，再用浓度50%的乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液，回收乙醇，浓缩干燥，得到翁布提取 物C;
[0035] (4)将翁布提取物A、翁布提取物B和翁布提取物C混合均匀，得到翁布提取物。
[0036] 实验例1翁布提取物治疗高尿酸血症的临床疗效观察
[0037] 本发明翁布提取物在2013年5月至2014年12月临床观察高尿酸血症患者64例， 报告如下：
[0038] 1、一般资料
[0039] 64例患者中，男性34例，女性30例，年龄最小35岁，最大64岁，平均年龄50. 7 岁，病程6个月到10年。
[0040] 2、诊断标准
[0041] 参照《中药新药临床研究指导原则》：
[0042] (1)高尿酸血症的诊断标准为：血尿酸（UA)彡416ymol/