一种邹皮木瓜提取物，提取方法及其应用
【技术领域】
[0001] 本发明属于医药技术领域，具体涉及皱皮木瓜中木瓜总三萜的提取和齐墩果酸分 离、纯化方法及其在治疗胃溃疡中应用。
【背景技术】
[0002] 皱皮木瓜为蔷薇科植物贴梗海棠 Chaenomeles speciosa(Sweet)Nakai的干燥近 成熟果实，又名皱皮木瓜、铁脚梨、贴梗海棠、宣木瓜、酸木瓜、空儿木瓜、木瓜实等。木瓜有 "百益之果"之称，是一种非常重要的观赏和食用的植物，被列为卫生部2003年首批认定的 药食两用的食品之一。其被用作一种可食用的果实，又被应用于美容化妆品和保健品领域， 同时作为一种常用中药，其味酸、温，入肝、脾经，有平肝舒筋、和胃化湿之功效，可用于湿痹 拘挛、腰膝关节酸重疼痛、吐泻转筋、脚气水肿等。中医认为木瓜有舒筋、活络、健脾开胃、舒 肝止痛、祛风除湿之功效，可用于预防和治疗风湿病、霍乱、痢疾、胃肠炎、脚气病及维生素 C 缺乏症等。化学成分研究表明木瓜果实及其它部位中主要包含挥发油类、有机酸类、黄酮 类、萜类、皂苷类、糖类等化学成分，是一种很具有开发价值的少数民族的草药资源。三萜类 化合物是最早从木瓜属植物中分离得到的化合物之一，按其结构可以分为齐墩果烷型、乌 苏烷型和羽扇豆烷型这三种。分离出的化合物有齐墩果酸、3-0-乙酰坡模醇酸、乙酰熊果 酸沽柯二醇、2α_羟基白桦脂酸、马斯里酸、白桦脂酸、白桦脂醇、3-(E)_p-香豆酰基白桦 酯醇、3-(Z)-P-香豆酰基白桦脂醇；羽扇-20 (29)烯-3 β，24, 28-三醇、2 α -羟基乌索酸、 2 α，3 α，9 α -三羟基乌索-12-烯-28-酸、2 α，3 β，19 α -三羟基乌索-12-烯-28-酸。
[0003] 胃溃疡是常见病、多发病之一，据相关不完全统计，全球范围内，胃溃疡的发病率 为5%~10%，而在我国更是高达15%~35%，而且随着生活节奏加快、不良生活习惯、社 会、工作、家庭、心理负担加重及长期非留体抗炎药和皮质类固醇等药物使用，使得胃溃疡 的发病率呈现逐年上升趋势。胃溃疡的病因迄今尚未完全阐明，一般认为胃溃疡的最终形 成是由于胃酸、胃蛋白酶对黏膜自身消化所致，而引起的因素有幽门螺杆菌感染、长期服用 非甾体抗炎药、皮质类固醇等药物或长期吸烟、饮酒和饮用浓茶、咖啡等。此外遗传因素和 长期精神紧张、焦虑或情绪波动的人易患溃疡。目前治疗胃溃疡的药物主要有胃酸抑制剂、 组胺受体拮抗剂、质子栗抑制剂、幽门螺杆菌抑制剂、胃黏膜保护剂、胃动力药等，上述药物 的使用对于近期溃疡愈合率均较高，但停药后其复发率高，且副作用多的问题依然难以解 决。中医药在改善全身状况、稳定病情及减少副作用等方面具有优越性，运用中医药治疗胃 溃疡历史悠久、疗效确切。中医药对参与溃疡愈合的多种因素均有影响，如通过增加胃黏膜 保护因子、根除幽门螺杆菌、改善血液循环等方面，实现对局部病理改变的修复。近年来，来 源于少数民族的许多草药，由于其治疗胃溃疡疗效确切、毒副作用小、在民间临床用药历史 悠久等多方面综合优势，而成为了治疗胃溃疡先导化合物的宝库。
【发明内容】
[0004] 本发明发明人经过广泛深入的研究，从土家药物皱皮木瓜中总三萜的提取木瓜总 三萜以及分离、纯化其中的齐墩果酸重要的三萜成分，并且经过研究发现木瓜总三萜和齐 墩果酸对各种类型的胃溃疡均具有较好的治疗作用，未见有明显的毒副作用。目前还未见 有与我们提取木瓜总三萜和分离、纯化齐墩果酸的方法及其治疗胃溃疡的相关报道。
[0005] 本发明的一个目的是提供一种从皱皮木瓜中提取木瓜总三萜和分离、纯化齐墩果 酸方法。本发明方法包括皱皮木瓜样品的提取及其木瓜总三萜、齐墩果酸的分离和纯化。
[0006] 本发明具体地是通过以下技术方案实现的：
[0007] 本发明提供了一种提取木瓜总三萜和分离、纯化齐墩果酸方法，包括下面步骤：
[0008] a)用石油醚脱去皱皮木瓜中的色素；
[0009] b)将a)步经石油醚脱色后，过滤，得到脱色后木瓜的粗粉，用乙酸乙酯提取； [0010] c)将b)步的提取物过滤，回收乙酸乙酯后，干燥，得木瓜乙酸乙酯浸膏。
[0011] d)将c)步得到的乙酸乙酯浸膏再次加石油醚脱色后，过滤、干燥，得较为精致的 木瓜乙酸乙酯浸膏。
[0012] e)将d)步的木瓜乙酸乙酯浸膏用无水乙醇溶解后，加活性炭脱色，过滤、干燥，得 木瓜总三萜白色的固体粉末。
[0013] f)将e)步的木瓜总三萜用无水乙醇溶解后重结晶，得到无色齐墩果酸针状晶体。
[0014] 在本发明一种具体的实施方案中，用常用溶剂提取皱皮木瓜近成熟的果实。将干 燥的皱皮木瓜用粉碎机粉碎后，过20目筛，将木瓜粗粉用石油醚按液固比5~7:1，在40~ 80°C条件下脱色3次，每次1~3小时，得到脱色后木瓜粗粉。
[0015] 将脱色后木瓜粗粉用乙酸乙酯按液固比4~8:1，在50~80°C条件下回流提取3 次，每次1~3小时，合并提取液，用布氏漏斗过滤，得乙酸乙酯提取物，减压浓缩回收乙酸 乙酯后，干燥，得木瓜乙酸乙酯浸膏。为了纯化木瓜乙酸乙酯浸膏，本发明继续用石油醚脱 色，将木瓜乙酸乙酯浸膏用石油醚按液固比10~20:1，在40~80°C条件下脱色3次，每次 0. 5~2小时，合并过滤液，得到较为精致的木瓜乙酸乙酯浸膏。经石油醚脱色后的乙酸乙 酯浸膏颜色仍较深，随后用将浸膏用无水乙醇溶解后加活性炭脱色，无水乙醇、精致的木瓜 乙酸乙酯浸膏和活性炭的液固比60~120:1: 1，在20~60°C条件下脱色2次，每次0. 5~ 1小时，合并过滤液，回收乙醇，得木瓜总三萜白色的固体粉末。本发明在优化的总三萜提取 工艺条件下得到木瓜总三萜的得率约为3. 04%，纯度为85. 78%。
[0016] 木瓜中齐墩果酸分离、纯化：将提取得到木瓜总三萜用无水乙醇重结晶2次，即得 无色齐墩果酸针状晶体。本发明齐墩果酸总产率为1. 18%左右，纯度为97. 61 %。
[0017] 本发明经提取和分离、纯化得到木瓜总三萜和齐墩果酸在胃溃疡大、小鼠不同类 型的胃溃疡模型上实验，表明它们对多种不同类型的胃溃疡具有较好的预防和治疗作用。
[0018] 本发明的有益效果
[0019] 本发明提供了一种从土家族药物一皱皮木瓜中分离制备木瓜总三萜和齐墩果 酸，研究显示木瓜总三萜和齐墩果酸对应激、乙醇、乙酸、幽门结扎、吲哚美辛致大鼠、小鼠 胃溃疡均具有良好的预防和治疗作用，能显著地降低溃疡指数和升高溃疡抑制率；降低幽 门结扎致胃溃疡大鼠胃液量、总酸度和总酸排出量，抑制胃蛋白酶活性，抑制胃溃疡的发 生；促进溃疡部位黏膜修复和胃上皮细胞排列整齐。尤其是木瓜总三萜，其作用效果优于雷 尼替丁。因此，与其相比较具有毒副作用小、疗效较好的优势，值得开发应用。
[0020] 本提取分离制备方法为扩大皱皮木瓜利用提供了较好的途径。通过本工艺得到 的木瓜总三萜产率及纯度都比较高（采用上述分离制备方法得到的木瓜总三萜纯度为 85. 78%，齐墩果酸纯度为97.61% );在分离和纯化齐墩果酸的过程中，避免了使用传统 工艺中柱色谱分离的方法，所以使分离过程简单易行、快捷，成本较低；另外也没有使用酸 碱试剂，避免了对生产设备的腐蚀及废水的处理，降低了生产成本，同时减少了对环境的污 染。总之，该提取制备工艺非常适合医药企业规模化提取皱皮木瓜中总三萜及生产齐墩果 酸。
【附图说明】
[0021] 图1为邹皮木瓜提取物的提取、分离工艺。
[0022] 图2为木瓜总三萜、齐墩果酸对乙醇致小鼠胃溃疡胃粘膜组织形态学的影响（A: 正常组，B:模型组，C:木瓜总三萜高剂量组，D:齐墩果酸高剂量组，E:雷尼替丁组，HE染 色），
[0023] 图3为木瓜总三萜、齐墩果酸对乙醇致小鼠胃溃疡胃粘膜组织形态学的影响（A: 正常组，B:模型组，C:木瓜总三萜高剂量组，D:齐墩果酸高剂量组，E:雷尼替丁组，HE染 色），
[0024] 图4为木瓜总三萜和齐墩果酸对吲哚美辛致小鼠胃黏膜外观形态的影响（A:正常 组，B:模型组，C:木瓜总三萜高剂量组，D:齐墩果酸高剂量组，E:雷尼替丁组），
[0025] 图5为木瓜总三萜、齐墩果酸对吲哚美辛致小鼠胃溃疡胃粘膜组织形态学的影响 (A:正常组，B:模型组，C:木瓜总三萜高剂量组，D:齐墩果酸高剂量组，E:雷尼替丁组，HE 染色），
【具体实施方式】
[0026] 下面结合实施例对本发明做进一步的说明，以下所述，仅是对本发明的较佳实施 例而已，并非对本发明做其他形式的限制，任何熟悉本专业的技术人员可能利用上述揭示 的技术内容加以变更为同等变化的等效实施例。凡是未脱离本发明方案内容，依据本发明 的技术实质对以上实施例所做的任何简单修改或等同变化，均落在本发明的保护范围内。
[0027] 实施例1
[0028] 皱皮木瓜中一种具有治疗胃溃疡作用三萜组分木瓜总三萜，具体通过以下方法制 备：
[0029] 1)皱皮木瓜预处理
[0030] 皱皮木瓜近成熟的果实洗尽、切片晒干，取0.005kg保存，剩下的于48°C恒温鼓风 箱中干燥至恒重，净重5. 0kg。
[0031] 2)皱皮木瓜脱色
[0032] 样品用粉碎机粉碎，过20目筛，用石油醚为溶剂按6:1的液固比，在60°C条件下脱 色3次，每次2小时，得到脱色后木瓜粗粉4. 26kg(见图1)。
[0033] 3)脱色后木瓜粗粉回流提取
[0034] 将上述2)所得脱色木瓜粗粉用乙