一种组合物及其在抗病毒药物中的应用
【技术领域】
[0001] 本发明涉及有机合成和药物化学领域，具体涉及组合物、制备方法及其用途。
【背景技术】
[0002] 单纯疱疼病毒1型（Herpes simplex virus，HSV-1)和单纯疱疼病毒2型（Herpes simplex virus，HSV-2)属于疱疹科病毒，HSV-1和HSV-2不仅引起口唇或生殖粘膜疱疹，同 时也是引起脑炎、肝炎、全身严重感染甚至宫内感染的重要病原。
[0003] 呼吸道合胞病毒（Respiratory Syncytial Virus，RSV)主要引起呼吸系统感染， 在婴幼儿、老年以及免疫缺陷人群引起严重肺炎，是人类上呼吸道感染的重要病原之一。
[0004] 甲型流感病毒（Influenza A virus，Flu-A)属于正粘科病毒，在人类和其他生物 每年都有小范围的流行，引起上呼吸系统感染。大流行时，可引起严重呼吸系统感染，甚者 引起肺炎、脑炎甚至死亡。
[0005] 上述三种病毒的治疗目前已有的药物存在毒性大、安全性低的问题，从天然产物 中寻找化合物或先导化合物并进行结构修饰获得其衍生物，从而得到高效低毒的潜在药物 最有重要价值。
[0006] 本发明涉及的化合物I是一个2011年发表（Ayumi Ohsaki et al.，2011. Salviskinone A, a diterpene with a new skeleton from Salvia przewalskii. Tetrahedron Letters 52(2011) 1375 - 1377)的化合物，我们对化合物I进行了结构修饰， 获得了两个新的衍生物即化合物III和化合物IV，并用化合物III和化合物IV制备了组合 物，并对该组合物抗病毒活性进行了评价，其具有抗病毒活性。
【发明内容】
[0007] 本发明公开了一个新的组合物，该组合物由化合物III和化合物IV组成，该组合 物中化合物III和化合物IV的质量百分数分别为20%和80%。
[0008]
[0009] 本发明公开的组合物可以制成药学上可接受的盐或药学上可接受的载体。
[0010] 药效学实验表明，本发明的组合物具有较好的抗病毒作用。本发明的药学上可接 受的盐具有同样的药效。
[0011] 组合物的体外实验表明，组合物具有很强的抗HSV-1、HSV-2、RSV和flu A的活性， 因此本发明的组合物有望被用于制备新型抗病毒药物。
[0012] 以下通过实施例对本发明作进一步详细的说明，但本发明的保护范围不受具体实 施例的任何限制，而是由权利要求加以限定。
【具体实施方式】
[0013] 实施例1化合物Salviskinone A的制备
[0014] 化合物Salviskinone A(I)的制备方法参照Ayumi Ohsaki等人发表的文献 (Ayumi Ohsaki et al. , 2011. Salviskinone A, a diterpene with a new skeleton from Salvia przewalskii. Tetrahedron Letters 52 (2011) 1375 - 1377)的方法。
[0016] 实施例2 Salviskinone A的0-溴乙基衍生物（II)的合成
[0017] 将化合物I (312mg，1. OOmmol)溶于15mL苯，向溶液中加入四丁基溴化铵（TBAB) (0. 08g)，1，2-二溴乙烷（3. 760g，20.0 Ommol)和6mL的50 %氢氧化钠溶液。混合物在35 摄氏度搅拌12h。12h之后将反应液倒入冰水中，立即用二氯甲烷萃取两次，合并有机相 溶液。然后对有机相溶液依次用水和饱和食盐水洗涤4次，再用无水硫酸钠干燥，最后减 压浓缩去除溶剂得到产物粗品。产物粗品用硅胶柱层析纯化（流动相为：石油醚/丙酮 =100:1.5, v/v)，收集棕色集中洗脱带并挥去溶剂即得到化合物II的棕色粉末（327mg， 78% ) 〇
[0018] 4匪1?(5001抱，0150-(16)5 6.63(8，1!1)，6.37(8，1!1)，5.81(8，1!1)，4.51(8,2!1)，3· 84 (s, 1H), 3. 79 (s, 2H), 2. 15 (s, 1H), 2. 04 (s, 1H) ,1-91 (s, 1H), 1. 65 (s, 1H), 1. 39 (s, 3H), 1. 08 (s, 6H), 0. 99 (s, 6H).
[0019] 13C NMR(125MHz, DMS0-d6) δ 188. 07 (s)，183. 70 (s)，154. 38 (s)，147. 57 (s)，140. 2 1 (s), 136. 40 (s), 134. 71 (s), 131. 25 (s), 128. 40 (s), 118. 83 (s), 72. 12 (s), 45. 49 (s), 37. 5 4 (s), 33. 58 (s), 31. 78 (s), 26. 17 (s), 25. 12 (s), 24. 66 (s), 23. 51 (s), 23. 17 (s), 22. 65 (s).
[0020] HRMS(ESI)m/z[M+H]+calcd for C22H28Br03:4 1 9. 12 2 2 ；found 419. 1220.
[0021]
[0022] 实施例3 Salviskinone A的0-(哌嗪基）乙基衍生物（III)的合成
[0023] 将化合物II (209mg，0. 5mmol)溶于25mL乙腈当中，向其中加入无水碳酸钾 (690mg，5.0mmol)，鹏化钾（168mg，1.0mmol)和无水哌嗪（3446mg，40mmol)，混合物加热回 流6h。反应结束后将反应液倒入冰水中，用等量二氯甲烷萃取3次，合并有机相。依次用水 和饱和食盐水洗涤合并之后的有机相，再用无水硫酸钠干燥，减压浓缩去除溶剂得到产物 粗品。产物粗品用硅胶柱层析纯化（流动相为：石油醚/丙酮=100:1. 5, v/v)，收集棕色 集中洗脱带并挥去溶剂即得到化合物ΠΙ的淡棕色固体（154. 8mg，73% )。
[0024] 4匪1?(5001抱，0150-(16)5 6.57(8，1!1)，6.37(8，1!1)，5.81(8，1!1)，4.27(8,2!1)，3· 84 (s, 1H), 3. 12 (s, 2H), 2. 69 (s, 4H), 2. 36 (s, 4H), 2. 14 (s, 1H), 2. 05 (s, 1H), 1. 94 (s, 1H), 1. 70 (s, 1H), 1. 35 (s, 3H), 1. 15 (s, 1H), 1. 07 (s, 6H), 1. 00 (s, 6H).
[0025] 13C NMR (125MHz, DMS0-d6) δ 188. 23 (s)，183. 96 (s)，154. 74 (s)，148. 03 (s)，140. 7 7 (s), 136. 56 (s), 134. 97 (s), 131. 61 (s), 128. 86 (s), 119. 35 (s), 69. 37 (s), 54. 95 (s), 54. 5 2 (s), 45. 97 (s), 45. 84 (s), 37. 68 (s), 33. 82 (s), 26. 51 (s), 25. 61 (s), 25. 25 (s), 23. 65 (s), 23. 41(s), 22. 99 (s).
[0026] HRMS(ESI) :m/z[M+H]+calcd for C26H37N203:425. 2804 ；found:425. 2801 〇
[0027]
[0028] 实施例4 Salviskinone A的〇-(1Η-四氮唑基）乙基衍生物（IV)的合成
[0029] 将化合物II (209mg，0. 5mmol)溶于20mL乙腈当中，向其中加入无水碳酸钾 (345mg，2. 5mmol)，鹏化钟（84mg，0· 5mmol)和 1H-四氣唑（1401mg，20mmol)，混合物加热 回流l〇h。反应结束后将反应液倒入25mL冰水中，用等量二氯甲烷萃取2次，合并有机 相。依次用水和饱和食盐水洗涤合并之后的有机相，再用无水硫酸钠干燥，减压浓缩去除 溶剂得到产物粗品。因为互变异构作用，在反应条件下会生成1H-四氮唑基和2H-四氮唑 基两种取代产物。产物粗品用硅胶柱层析纯化（流动相为：石油醚/丙酮=100:1，v/V)， 收集黄色集中洗脱带，再将洗脱带浓缩，用硅胶柱层析纯化（流动相为：石油醚/丙酮= 100:0. 5, v/v)，依次收集两个淡黄色的洗脱带，浓缩前1个洗脱带即得到化合物IV的黄色 粉末（85.7mg，42% )。
[0030] 4 NMR (500MHz，Chloroform-dl) δ 10.21 (s，1H)，6.53 (d，J = 95.4Hz，1H)，6.31 (S ,1H), 5. 73 (s, 1H), 4. 41 (t, J = 7. 8Hz, 4H), 4. 04 (s, 1H), 2. 09 (s, 1H), 1. 98 (s, 1H), 1. 85 (s, 1H), 1. 59 (s, 1H), 1. 33 (s, 3H), 1. 02 (s, 6H), 0. 93 (s, 6H).
[0031] 13C NMR(125MHz，DMS0-d6) δ 188. 01(s), 183. 52(s), 154. 09(s), 147. 15(s), 144. 6 0(s), 140. 11 (s), 136. 23 (s), 134. 42 (s), 130. 84 (s), 127. 86 (s), 118. 73 (s), 66. 79 (s), 46. 45 (s), 45. 42 (s), 37. 35 (s), 33. 27 (s), 25. 74 (s), 24. 62 (s), 24. 60 (s), 23. 32 (s), 22. 86 (s) ,22. 22 (s).
[0032] HRMS(ESI) :m/z[M+H]+calcd for C23H29N403:409 . 2 2 40 ;found:409. 2245。
[0033]
[0034] 实施例5组合物抗病毒活性
[0035] (一）实验例：组合物对疱疹病毒的作用研究：
[0036] (1)细胞株与病毒株：
[0037] 人胚肾细胞（HEK293,为HSV-1、HSV-2病毒敏感细胞）购自美国Clontech公司； 单纯疱疹病毒1型（HSV-1) Sm44株、单纯疱症病毒2型（HSV-2) 333株引自中国⑶C病毒病 研究所。
[0038] (2)细胞毒性测定：
[0039] 组合物的制备：将研磨之后过200目网的20mg化合物III的粉末和研磨之后过 200目网的80mg化合物IV的粉末装入带盖的小管中并用涡轮搅拌仪混合即得到100mg组 合物，使用时用水溶解这l〇〇mg的组合物即得到组合物的溶液。
[0040] 参照文献（汪受传，王霖，陈超等，清肺口服液含药血清对病毒抑制作用的实验研 究，南京中医药大学学报，2008 ;24(1) :25~27)的方法，将各样品以2倍比做系列稀释 (2°~5)，然后按稀释顺序横向接种于96板孔中的HEK293上，每孔100uL，每稀释度纵向重 复3孔（A、B、C行），平行设微孔板D的1~6孔为细胞对照，7~12孔不接种细胞为空白 对照，显微镜下每日观察CPE，连续观察7d，中性红染色，在540nm波长测定0D值，将实验组 与细胞对照组0D值相比计算细胞存活率，用Reed-Muench方法计算药物半数细胞中毒浓度 (TD5〇) 〇
[0041] (4)抑毒试验：
[0042] 参照文献（汪受传，王霖，陈超等，清肺口服液含药血清对病毒抑制作用的实验研 究，南京中医药大学学报，2008 ;24(1) :25~27)的方法，将样品按稀释顺序（2 14)横向 接种于96板孔中的单层细胞上，每孔100uL，每稀释度纵向重复4孔，微孔板的A、B、C行 加含100