丁烯基苯酞的用途及将其制备为医药组合物的方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及化合物的用途，特别涉及丁烯基苯酞的用途及将其制备为医药组合物 的方法。
【背景技术】
[0002] 阿兹海默症为全球发生率最高的神经退化性疾病，其主要的病理特征在于脑内 有过量的β类淀粉样蛋白质（β-amyloidprotein,Αβ)沉积，形成Αβ斑块（plaque) (GlennerandWong1984 ;Masters，C.L.etal·，1985)以及细胞内缠结的神经纤维 (neurofibrillarytangles,NFT) (Grundke-Iqbal,I.etal. , 1986 ；Goedert,M.etal., 1988)。而Αβ斑块由淀粉样前驱蛋白质（amyloidproteinprecursor，APP),经过BACE酵 素（β-siteamyloidprecursorproteincleavingenzyme)(Hussain，I.etal·，1999 ; Vassar，R.etal·，1999)以及γ分泌酶（γ-secretase)切割后所产生（Wolfe，M.S.et al·，1999 ;Yu，G.etal·，2000)，主要包含有Aβ40 以及Aβ42 两种形式（Jarrett，J.T.et al.，1993)。当β类淀粉样蛋白质在细胞内外大量累积时，会成为神经细胞死亡的主要因 素。
[0003] 唐氏症患者为第21对染色体减数分裂时，染色体分离不均，导致细胞内多带一条 染色体所致。而由于淀粉样前驱蛋白质的基因位于第21条染色体上（Rumble，B.etal.， 1989 ;Selk〇e，D.J.，1996)，因而大多认为淀粉样前驱蛋白质过量表现会使唐氏症患者具有 早发性认知障碍的症状（Burger,P.C.andF.S.Vogel, 1973)。目前许多研究显示，Αβ斑 块会出现在唐氏症患者的脑内（Masters，C.L.etal·，1985 ;Beyreuther，Κ.etal·，1992 ; Gyure，K.A.etal·，2001 ;Mori，C.etal·，2002)。另有研究指出，利用来自唐氏症患者的 诱导型万能干细胞（inducedpluripotentstemcells,iPSCs)所产生的神经细胞，可用 以重现典型阿兹海默症的病理特征，例如Αβ42及Αβ40的累积、高度磷酸化的Tau蛋白质 等。因此，利用唐氏症患者的诱导型万能干细胞分化系统可用以作为筛选治疗或预防与β 类淀粉样蛋白质相关神经退化性疾病的药物平台。
[0004] 目前临床上治疗阿兹海默症的药物包含胆碱酯酶抑制剂（cholinesterase inhibitors) (Birks，J.，2006)以及NMDA接受体措抗剂（NMDAreceptorantagonist) (McShane，R.etal. ,2006)，而该两种药物皆适用以改善阿兹海默症患者认知功能，然 而，对于由阿兹海默症所衍生的疾病，如忧郁、失眠等，须通过其他适合的药物进行治疗 (Tariot，P.N.etal·，2004 ;Feldman，H.etal·，2006 ;Howard，R.etal·，2012)，并且，该两 种药物仅能用于改善症状，不能达到治愈阿兹海默症的功效（Farlow，M.R.etal. ,2010)。 除此之外，许多研究针对减低脑内Αβ的累积而设计治疗阿兹海默症的新药（Hong-Qi， Y.etal.，2012)，具体来说，包含有BACE抑制剂（BACEinhibitors)，例如MK-8931 以及 八(：1-91(]\1111131(1八.，2012)，或^分泌酶抑制剂，例如1^450139(5丨61116^4.6七31.，2005) 及813-7〇8163(1'〇即，6^七31.，2〇12)，或以免疫途径对抗4 0的抗体等。
[0005] 由此可知，如阿兹海默症的神经退化性疾病确实对于人体健康造成莫大的威胁， 而基于目前临床上仍未有疗效较佳的药物，因此，开发治疗或预防神经退化性疾病的医药 组合物是科学家的重要课题。
【发明内容】
[0006] 本发明的主要目的在于提供丁烯基苯酞的用途，其用于制备治疗或预防神经退化 性疾病的医药组合物。
[0007] 为能达成上述目的，本发明揭露丁烯基苯酞、其类似物或上述成分的组合用于制 备治疗或预防神经退化性疾病的医药组合物的用途。
[0008] 较佳地，所述神经退化性疾病为脑内累积过量β类淀粉样蛋白质的病征。
[0009] 较佳地，所述神经退化性疾病为阿兹海默症。
[0010] 较佳地，所述丁烯基苯酞可自天然植物中萃取而得，例如伞形科植物、菊科植物 等，其中，所使用的萃取技术为该技术领域且具通常知识者周知。
[0011] 较佳地，所述丁烯基苯酞可由化学合成技术制备而得，其中，所使用的化学合成技 术为该技术领域且具通常知识者周知的化学合成方法。
[0012] 本发明的另一目的在于提供一种上述医药组合物的制备方法，其用以降低医药组 合物内活性成分的细胞毒性，达到提升医药组合物安全性及减少副作用的功效。
[0013] 为能达成该目的，本发明所揭一种医药组合物的制备方法，其将丁烯基苯酞与高 分子物质以重量比1 : 1~1 : 2混合后，加入一极性有机溶剂及水，使丁烯基苯酞与高分 子物质在水相通过分子间引力进行吸附作用而使该高分子物质包覆丁烯基苯酞，再去除该 极性有机溶剂。
[0014] 较佳地，所述极性有机溶剂为类杂环醚类化合物。
[0015] 较佳地，所述极性有机溶剂为四氢呋喃（tetrahydrofuran)。
[0016] 较佳地，所述高分子物质为F127高分子物质。
[0017] 较佳地，所述去除该极性有机溶剂的方法为加热法。
[0018] 本发明的有益效果为：
[0019] 本发明所揭丁烯基苯酞能显著降低神经细胞内的Αβ40浓度，并且其效果类似于 投予Υ分泌素抑制剂DAPT，具有改善或减缓细胞内累积过量β类淀粉样蛋白质的能力。本 发明所揭医药组合物制备方法能以高分子物质作为药物载体，减缓或降低丁烯基苯酞的细 胞毒性，确实能有效提升医药组合物的安全性。而通过本发明的方法所制得的医药组合物 具有降低细胞内β类淀粉样蛋白质浓度的功能，通过投予有效量的医药组合物至生物体， 能达到治疗或预防神经退化性疾病的功效。
【附图说明】
[0020] 图1为以包覆高分子物质F127的丁烯基苯酞及未包覆高分子物质F127的丁烯基 苯酞进行细胞毒性试验的结果。
[0021] 图2为Τ21诱导性万能干细胞进行神经分化培养的流程图。
[0022] 图3为Τ21诱导性万能干细胞进行神经分化培养后，以免疫荧光染色分析观察其 内N-cadherin表现的结果，其中，红色为经免疫荧光染色的N-cadherin，蓝色为以DAPI染 色的细胞核。
[0023] 图4为T21诱导性万能干细胞进行神经分化培养后，以免疫荧光染色分析观察其 内nestin表现的结果，其中，绿色为经免疫荧光染色的nestin，蓝色为以DAPI染色的细胞 核。
[0024] 图5为T21诱导性万能干细胞进行神经分化培养后，以免疫荧光染色分析观察其 内Pax-6蛋白质表现的结果，其中，红色为经免疫荧光染色的Pax-6蛋白质，蓝色为以DAPI 染色的细胞核。
[0025] 图6为T21诱导性万能干细胞进行神经分化培养后，以免疫荧光染色分析观察 其内βIII微管蛋白质表现及神经突起生长情形的结果，其中，绿色为经免疫荧光染色的 βIII微管蛋白质，蓝色为以DAPI染色的细胞核。
[0026] 图7为经不同细胞所分化的神经细胞，分别以酵素连结免疫吸附分析法统计分析 各细胞内Αβ40表现量的结果。
[0027] 图8为Τ21诱导性万能干细胞所分化的神经细胞经不同处理条件进行培养后，以 酵素连结免疫吸附分析法统计分析各细胞内Αβ40表现量的结果。
【具体实施方式】
[0028] 本发明揭露丁烯基苯酞（butylidenephthalide，Bdph)的用途及将之制备为医药 组合物的方法。由于丁烯基苯酞具有降低神经细胞内β类淀粉样蛋白质的含量，而过量累 积β类淀粉样蛋白质在细胞内会导致神经退化性疾病，如阿兹海默症，因此，通过投予有 效量的丁烯基苯酞至生物体中，能达到预防或治疗神经退化性疾病的功效。再者，本发明通 过有机合成反应制备该医药组合物，通过如F127的高分子物质与丁烯基苯酞间产生共价 键结，使高分子物质包覆丁烯基苯酞，达到减少医药组合物对于生物体细胞毒性的功效。
[0029] 除非另有定义，在本发明的说明书及权利要求书所使用的技术及科学名词的意 义，其与本发明所属技术领域且具通常知识者的一般理解相同。若有矛盾的情形，以本发明 内容为准。
[0030] 本发明所揭丁烯基苯酞的结构式为如式（I) 取得方式为该所属技术领域且具通常知识者的一般知识，并且非本发明的技术特征，故在 本发明不加以赘述。举例来说，中国专利申请第200910066666号中揭露丁烯基苯酞得以有 机溶剂自伞形科或菊科植物萃取而得；中国专利公告第1041725C号揭露丁烯基苯酞以化 学合成方式合成。
[0031] 本发明所揭高分子物质F127,其为聚氧乙烯-聚氧丙烯-聚氧乙烯的三嵌段聚合 物，化学式如式（II):
[0032]
其中，x、y、z分别为大于1 的整数。由于高分子物质F127两端的聚氧乙烯具有亲水性，中段的聚氧丙烯属于疏水性， 因此，高分子物质F127为两性物质。当高分子物质F127存在于水溶液中时，其会逐渐向界 面扩散并吸附于界面上，使表面张力下降，并且，通过控制高分子物质内亲疏水基的比例， 能达到控制高分子物质的表面活性。
[0033] 本发明所揭"分子间引力"包含有，但不限于，范德华力、库伦作用力、氢键、疏水键 力。
[0034] 本发明所揭"医药组合物"一词包含一有效量的欲产生特定效果的所需化合物或 活性成分，以及至少一药学上能接受的载体。如同本发明所属技术领域中具通常知识者所 了解，医药组合物的型态可以随着欲引起特定效果的投予方式有所不同，如锭剂、粉剂、针 剂等，并且，该载体也随着医药组合物的型态而可以为固态、半固态或液态。举例来说，载体 包含，但不限于，明胶