一种代血浆明胶灭菌制剂及其制备方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于医药技术领域，涉及代血浆明胶制剂的制备方法，具体涉及一种以牛 骨明胶为原料制备代血浆明胶灭菌制剂的方法，以及通过所述方法制备的代血浆明胶灭菌 制剂。
【背景技术】
[0002] 代血浆明胶为新一代改良明胶，是医学领域常用的药物。其注射液是世界卫生组 织《基本药物指南》推荐的明胶类血浆代用品，在临床上被广泛用于各种原因引起的失血性 休克、失体液性休克等症。具有迅速补充血容量、维持血压的作用。适用于临床急救，在输 血时无需血型匹配，可避免交叉传染，具有人体血液所不具备的优势。
[0003]目前，明胶注射液存在不同的制备方法，尚存在不足。
[0004] 如申请号为CN02115961. 0的中国专利申请公开了一种明胶注射液的制备工艺。 该申请中制备方法采用高温水解，因温度较高，反应条件激烈会产生较多的氨基酸、小分子 肽等小分子物质和未知的物质，增加了交联难度，不利于产品质量的控制。
[0005] 又如申请号为CN201010271416. 9的专利申请公开的明胶的制备技术中同样采用 高温水解，并使用了有机溶剂丙酮，而丙酮具有较强的毒性，虽然该技术有去除丙酮的步 骤，但仍然会存在安全隐患。
[0006] 上述申请号以及申请号为CN200410068941. 5、CN200510132242.的专利申请中均 未说明其中制剂的灭菌方法。目前已上市的注射液灭菌通常采用湿热灭菌或是采用全程无 菌操作，全程无菌操作要求较高，大大增加生产成本。采用湿热灭菌的常规热压灭菌方法 115°C，30min或121°C，8min，因明胶注射液为酰化多肽溶液，组分多，具有一定粘度，在灭 菌过程中会导致热传导不均匀，出现灭菌不够彻底和产品质量不均一等问题。
[0007] 本发明的制备工艺采用碱法水解，具有高度的专一性，能有效避免氨基酸、小分子 肽等小分子物质的产生。交联酰化工序不需要添加除交联剂之外的有机溶剂，安全性较高。 使用优选的酰化条件，能得到分散度最佳的网状酰化多肽分子，保证产品质量。将明胶注射 液灭菌工序的常规热压灭菌改用旋转式灭菌，确保溶液受热的均一性，既能达到无菌指标 要求，又能保证用药的安全。
【发明内容】
[0008] 本发明提供了一种代血浆明胶灭菌制剂的制备方法及通过所述方法制备的代血 浆明胶灭菌制剂。所述制备方法包括：
[0009] (1)溶胶：
[0010] 用注射用水溶解明胶，所述注射用水温度为70~80°C，溶解时间为10~30min。
[0011] 其中明胶可以是药用牛骨明胶，可以购于广东罗赛洛、辽源嘉利达、黑龙江普邦等 厂家。
[0012] ⑵碱水解：
[0013] 向步骤（1)的溶解后的明胶水溶液中加入碱进行碱法水解，所加入的碱的量为能 将明胶溶液的pH值调节为9. 0~13. 0的量，升温至80~100°C，维持这一温度至碱水解 后，测得明胶重均分子量在28000~35000道尔顿时，立即降温至30~45°C。
[0014] 其中，所加入的碱可以是氢氧化钠、氢氧化钾和氢氧化钙。
[0015] 其中，明胶重均分子量的测定采用中国药典2010年版二部附录VΗ记载的多糖分 子量与分子量分布测定法进行测定。1.用凝胶色谱柱（TSK-G3000PWXL7.8X300mm)，以磷 酸盐缓冲液（取磷酸二氢钾7. 0g，二水合磷酸氢二钠16. 2g，叠氮化钠0. 8g，加水4000ml溶 解，混匀）为流动相，流速为每分钟0. 5ml，柱温35°C，示差折光检测器；2.称取5种已知分 子量的右旋糖苷分子量对照品（分子量分别为7100、10000、21400、41100和84400)适量， 分别用流动相溶解制成每lml溶液中约含10mg溶质的溶液，吸取上述各对照品溶液20μ1， 依次分别注入液相色谱仪，记录色谱图，以不同分子量的对照品与其相应的保留时间计算 回归方程；3.取待测样品，测定同步骤2,记录分子量分布曲线，计算待测样品的重均分子 量。
[0016] (3)交联酰化：
[0017] 向步骤（2)的溶液中加入酸调节明胶水解液pH值为8. 0~10. 0,加入明胶重量 3%~7%的交联剂进行酰化，交联酰化温度为30~45°C，交联酰化时间为1.0~2.Oh。
[0018] 明胶交联酰化的核心反应为：
[0019]
[0020] 影响交联酰化反应涉及的变量有交联温度，交联时间，交联剂用量，交联反应pH 值，明胶浓度等，最优范围如下表。
[0021]
[0022] 其中，所加入的酸可以是盐酸、乙酸或枸缘酸，
[0023] 其中，交联酰化过程中使用的交联剂为丁二酸酐、乙二醛或环己烷二异氰酸酯，优 选丁二酸酐，且
[0024] 其中，交联酰化过程不需要添加交联剂之外的有机溶剂，安全性高，通过该优选的 酰化条件，能得到分散度最佳的网状酰化多肽分子。
[0025] (4)电解质的调节：
[0026] 称取适量氯化钾、氯化钠、氯化钙加入步骤（3)所得的溶液中，加入的量至明胶制 剂中每11111中含钾应为2.0~4.(^111〇1，钠139~152 4 111〇1，钙0.2~2.(^111〇1，搅拌使电 解质完全溶解，再补加适量注射用水。
[0027] (5)吸附澄清：
[0028] 向步骤（4)的溶液中加入0. 1 %~2% (W/V)、优选0. 5%~1. 0% (W/V)的活性炭 搅拌，在70~KKTC下搅拌吸附0. 5~lh，吸附结束后采用高效澄清板多级深层过滤脱炭， 脱炭后采用3级精密过滤，灌装，
[0029] 其中高效澄清板可以是购于沈阳市长城过滤纸板有限公司型号为scp-1120的澄 清过滤板。
[0030] (6)灭菌：
[0031] 置于灭菌温度为115~125°C，时间为3~30min，旋转速度为1~30转/min的 旋转灭菌柜中灭菌，
[0032] 其中，所使用的旋转灭菌柜为购于山东新华医疗器械有限公司XASM型、MPSM型旋 转灭菌柜。
[0033] 通过本发明的方法制备的代血浆明胶灭菌制剂的重均分子量为28000~35000， 且10%大分子部分重均分子量在90000以下，10%小分子部分重均分子量在8000以上，分 布系数Mw/Mn在2. 5以下。
[0034] 本发明提供的代血浆明胶灭菌制剂及其制备方法的有益效果在于：
[0035] 1.米用碱水解技术可使断裂的多肽链分子其重均分子量在28000~35000道尔 顿，解决了热压水解工艺中，因条件剧烈产生氨基酸、小分子肽等产物影响交联，在碱性溶 液中还有利于交联反应的发生。
[0036] 采用适量的交联剂、适合的pH值、适宜温度及浓度，让小分子肽链连接成空间球 状结构。参照明胶肽注射液国家药品标准YBH10312006项下游离氨基的检测方法检测表 明，本发明所获得产品较同类产品游离氨基少，避免了同类产品因交联不完全导致在临床 上扩容效果差的缺点，保证临床疗效稳定、效果好。
[0037] 2.首次采用旋转式灭菌，在很短的时间内将热敏性的物质进行灭菌，产品的冷热 转换速度快且均衡。经该灭菌工艺制备的明胶注射液其无菌、热原指标符合要求。
【具体实施方式】
[0038] 实施例1
[0039] (1)溶胶：取市售的药用牛骨明胶180g，加入2000ml的注射用水进行低温溶胀，将 其温度升至70°C进行溶解，溶解时间30min，直至明胶完全溶解。
[0040] (2)碱水解：加lmol/L氢氧化钠溶液调节明胶溶液的pH值为9. 0,升温至95°C， 维持这一温度至水解后明胶重均分子量为28000~35000道尔顿时，降温至30°C，得到降解 液。
[0041] (3)交联酰化：加入盐酸调节明胶水解液pH值为8. 0时，加入交联剂丁二酸酐6g 进行酰化，将酰化温度控制在30°C，搅拌交联2.Oh。
[0042](4)电解质的调节：加入氯化钾0·8g、氯化钠24g、氯化钙0·36g，加适量的注射用 水使电解质完全溶解，加盐酸溶液调pH值至7. 0,共配制成4000ml。
[0043] (5)吸附澄清：加入活性炭4g，在40°C温度下搅拌吸附lh，吸附结束后采用高效澄 清板多级深层过滤脱炭，脱炭后趁热依次经〇. 8μm、0. 45μm、0. 22μm滤膜过滤，罐装。
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