一种组合物及其在抗病毒药物中的应用
【技术领域】
[0001] 本发明设及有机合成和药物化学领域，具体设及组合物、制备方法及其用途。
【背景技术】
[0002] 单纯瘤疹病毒1型Ofe巧essimplexvirus,服V-1)和单纯瘤疹病毒2型Ofe巧es simplexvirus,服V-2)属于瘤疹科病毒，服V-I和服V-2不仅引起口唇或生殖粘膜瘤疹，同 时也是引起脑炎、肝炎、全身严重感染甚至宫内感染的重要病原。
[0003] 呼吸道合胞病毒巧espiratcxrySyn巧tialVirus,RSV)主要引起呼吸系统感染， 在婴幼儿、老年W及免疫缺陷人群引起严重肺炎，是人类上呼吸道感染的重要病原之一。
[0004] 甲型流感病毒（InfluenzaAvirus,Flu-A)属于正粘科病毒，在人类和其他生物 每年都有小范围的流行，引起上呼吸系统感染。大流行时，可引起严重呼吸系统感染，甚者 引起肺炎、脑炎甚至死亡。
[0005] 上述=种病毒的治疗目前已有的药物存在毒性大、安全性低的问题，从天然产物 中寻找化合物或先导化合物并进行结构修饰获得其衍生物，从而得到高效低毒的潜在药物 最有重要价值。 |；0006] 本发明设及的化合物I是一个2011年发表（AyumiOhsakietal. , 2011.SalviskinoneA,aditerpenewithanewskeletonfromSalviaprzewalskii. Tetr址e化onLetters52(2011) 1375 - 1377)的化合物，我们对化合物I进行了结构修饰， 获得了两个新的衍生物即化合物HI和化合物IV，并用化合物HI和化合物IV制备了组合 物，并对该组合物抗病毒活性进行了评价，其具有抗病毒活性。
【发明内容】
[0007] 本发明公开了一个新的组合物，该组合物由化合物III和化合物IV组成，该组合 物中化合物III和化合物IV的质量百分数分别为15%和85%。
[0008]
[0009] 本发明公开的组合物可W制成药学上可接受的盐或药学上可接受的载体。
[0010] 药效学实验表明，本发明的组合物具有较好的抗病毒作用。本发明的药学上可接 受的盐具有同样的药效。
[0011] 组合物的体外实验表明，组合物具有很强的抗服V-1、服V-2、RSV和fluA的活性， 因此本发明的组合物有望被用于制备新型抗病毒药物。
[0012] W下通过实施例对本发明作进一步详细的说明，但本发明的保护范围不受具体实 施例的任何限制，而是由权利要求加W限定。
【具体实施方式】
[0013] 实施例1化合物SalviskinoneA的制备
[0014] 化合物SalviskinoneA(I)的制备方法参照Ayumi化saki等人发表的文献 (AyumiOhsakietal. , 2011.SalviskinoneA,aditerpenewithanewskeletonfrom Salviaprzewalskii.TetrahedronLetters52 (2011) 1375 - 1377)的方法。
[0015]
[0016] 实施例2SalviskinoneA的0-漠乙基衍生物（II)的合成
[0017] 将化合物I(312mg，1.OOmmol)溶于15血苯，向溶液中加入四下基漠化锭灯BAB) (0. 08g)，1，2-二漠乙烧化760g，20.OOmmol)和6血的50 %氨氧化钢溶液。混合物在35 摄氏度揽拌12h。1化之后将反应液倒入冰水中，立即用二氯甲烧萃取两次，合并有机相 溶液。然后对有机相溶液依次用水和饱和食盐水洗涂4次，再用无水硫酸钢干燥，最后减 压浓缩去除溶剂得到产物粗品。产物粗品用硅胶柱层析纯化（流动相为：石油酸/丙酬 =100:1.5,v/v)，收集栋色集中洗脱带并挥去溶剂即得到化合物II的栋色粉末（327mg， 78% )O
[0018] 咱NMR巧00MHz，DMS0-de) 5 6. 63(s, 1H)，6. 3^s, 1H)，5. 81(s, 1H)，4. 51(s，2H)，3. 84 (s,IH), 3. 79 (s, 2H), 2. 15 (s,IH), 2. 04 (s,IH) ,1-91 (s,IH),I. 65 (s,IH),I. 39 (s, 3H),I. 08(s，6H)，0. 99(s，6H).
[0019]"cNMR(125MHz,DMS0-d6) 5 188. 07 (S)，183. 70 (S)，154. 38 (S)，147. 57 (S)，140. 2 I(S)，136. 40 (S)，134. 71 (S)，131. 25 (S)，128. 40 (S)，118. 83 (S)，72. 12 (S)，45. 49 (S)，37. 5 4 (S)，33. 58 (S)，31. 78 (S)，26. 17 (S)，25. 12 (S)，24. 66 (S)，23. 51 (S)，23. 17 (S)，22. 65 (S).
[0020] HRMS(ESI)m/z[M+H]+calcdforCzzHzsBrCV419. 1222;found419. 1220.
[0021]
[0022]实施例3 Salviskinone A的0-(咪挫基）乙基衍生物（III)的合成 阳02引将化合物II(209mg，0. 5mmol)溶于30血乙腊当中，向其中加入无水碳酸钟 (690mg，5. Ommol)，舰化钟（252mg，1. 5mmol)和咪挫（870mg，IOmmol)，混合物加热回流地。 反应结束后将反应液倒入45mL冰水中，用等量二氯甲烧萃取3次，合并有机相。依次用水 和饱和食盐水洗涂合并之后的有机相，再用无水硫酸钢干燥，减压浓缩去除溶剂得到产物 粗品。产物粗品用硅胶柱层析纯化（流动相为：石油酸/丙酬=100:0.2, v/v)，收集栋色 集中洗脱带并挥去溶剂即得到化合物III的淡栋色固体（144. Img, 71%)。
[0024]电NMR巧OOMHz, DMS0-d6) 5 7. 91(S,1H)，7. 16(S,1H)，6. 65化J = 103.細Z,2H)，6 .41(S,1H)，5. 76(S,1H)，4. 50(S,2H)，4. 39(S,2H)，3. 82(S,1H)，2. 05(S,1H)，1. 94(S,1H)，1 .87(S,1H)，1. 61(S,1H)，1. 30(S,3H)，0. 99(S, 6H)，0. 90(S, 6H). 阳0巧]"C NMR (125MHz, DMS0-d6) 5 187. 81(S)，183. 33(S)，153. 90(S)，147. 28(S)，139.8I(S)，139. 19(S)，136. 14(S)，134. 34(S)，130. 77(S)，128. 43(S)，128.Ol(S),118. 85(S)，11 8. 53(S)，69. 03(S)，45. 02(S)，43. 70(S)，37. 46(S)，33. 09(S)，25. 87(S)，25. 06(S)，24. 29 ( s), 23. 03(S)，23. 05(S)，22. 41(S).
[0026] HRMS(ESI) :m/z[M+H]+calcd for C25H3抓03:407 . 2 3 3 5 ;found:407. 2331。
[0027]
[0028] 实施例4SalviskinoneA的0-(S挫基）乙基衍生物（IV)的合成
[0029] 将化合物II(209mg，0. 5mmol)溶于20血乙腊当中，向其中加入无水碳酸钟 (345mg，2.Smmol)，舰化钟（84mg，0.Smmol)和 1, 2, 3-S氮挫（2760mg，40mmol)，混合物加热 回流4h。反应结束后将反应液倒入20mL冰水中，用等量二氯甲烧萃取3次，合并有机相。 依次用水和饱和食盐水洗涂合并之后的有机相，再用无水硫酸钢干燥，减压浓缩去除溶剂 得到产物粗品。产物粗品用硅胶柱层析纯化（流动相为：石油酸/丙酬=100:0.5,v/v)， 收集黄色集中洗脱带即得到化合物IV的黄色粉末（134. 3mg，66% )。
[0030]电NMR巧OOMHz,Chloroform-dl)5 8. 37 (S, 1H)，7. 95 (S, 1H)，6. 35 (S, 1H)，6. 14 (S, 1H)，5. 35 (S, 1H)，4. 13 (S, 1H)，4. 42(d,J=16. 4Hz, 3H)，3. 71 (S, 1H)，2. 13 (S, 1H)，2. 05 (S, IH)，I. 81(s, IH)，I. 63(s,IH)，I. 30(s,3H)，I. 08(s,6H)，0. 97(s,6H). 阳的1]"CNMR(125MHz,DMS0-d6) 5 188. 09 (S), 183. 61 (S), 154. 18 (S), 147. 26 (S), 139. 7 2 (s), 136. 40 (s), 136. 32 (s), 134. 52 (s), 130. 95 (s), 127. 99 (s), 120. 16 (s), 118. 62 (s), 67 .14 (S)，46. 27 (S)，45. 18 (S)，37. 69 (S)，33. 32 (S)，26. 14 (S)，25.Ol(S)，24. 41 (S)，23. 23(s )，23. 06 (S)，22. 47 (S).
[0032] HRMS(ESI) :m/z[M+H]+calcdfor〔24&心3〇3:408. 2287 ;found:408. 2282。
[0033]
[0034] 实施例5组合物抗病毒活性
[0035] ( 一）实验例：组合物对瘤疹病毒的作用研究：
[0036] (1)细胞株与病毒株：
[0037] 人胚肾细胞（肥K293,为服V-1、服V-2病毒敏感细胞）购自美国Clontech公司； 单纯瘤疹病毒1型化SV-1)Sm44株、单纯瘤症病毒2型化SV-2) 333株引自中国CDC病毒病 研究所。 阳〇3引 似细胞毒性测定：
[0039] 组合物的制备：将研磨之后过200目网的15mg化合物III的粉末和研磨之后过 200目网的85mg化合物IV的粉末装入带盖的小管中并用满轮揽拌仪混合即得到IOOmg组 合物，使用时用水溶解运IOOmg的组合物即得到组合物的溶液。
[0040] 参照文献（汪受传，王霖，陈超等，清肺口服液含药血清对病毒抑制作用的实验研 究，南京中医药大学学报，2008 ;24(1) :25~27)的方法，将各样品W2倍比做系列稀释 (2°一 5)，然后按稀释顺序横向接种于96板孔中的肥K293上，每孔100祉，每稀释度纵向重 复3孔（A、B、C行），平行设微孔板D的1~6孔为细胞对照，7~12孔不接种细胞为空白 对照，显微镜下每日观察CPE，连续观察7山中性红染色，在540nm波长测定OD值，将实验组 与细胞对照组OD值相比计算细胞存活率，用Reed-Muench方法计算药物半数细胞中毒浓度 (TDso)O 阳OW (4)抑毒试验：
[0042] 参照文献（汪受传，王霖，陈超等，清肺口服液含药血清对病毒抑制作用的实验研 究，南京中医药大学学报，2008 ;24(1) :25~27)的方法，将样品按稀释顺序（2M)横向 接种于96板孔中的单层细胞上，每孔IOOuL每稀释度纵向重复4孔，微孔板的A、B、C行 加含100个TCI^。的病毒IOOuL作为试验组，D行补充等容量细胞维持液为不同浓度药物 对照，平行设F行作为病毒对照，E行的1~12作为细胞对照。37°C、5%C〇2培养，每日观