环吡司胺在制备治疗或预防癫痫药物中的应用
【技术领域】
[0001] 本发明涉及医药技术领域，具体地说是环化司胺在制备治疗或预防癒痛药物中的 应用。
【背景技术】
[0002] 癒痛（epilepsy)是慢性反复发作性短暂脑功能失调综合征，W脑神经元异常放电 引起反复痛性发作为特征。癒痛发作可表现运动、感觉、意识、精神、行为和自主神经等功能 异常。癒痛是神经系统常见疾病之一，全球约5000万患者，发病率约1%。癒痛可发生在任 何年龄段，与性别、社会经济地位无关。癒痛死亡率约为20%，给家庭、社会造成很大的负担。 目前，经过现有的抗癒痛药物治疗，仍有大约30%的患者耐药不能控制[1]。药物不能控制 的癒痛即难治性癒痛的死亡率更高，可达50%，尽管对于药物不能控制的癒痛目前多采用手 术治疗，但适合手术的患者只占一小部分。因此，寻找有效和安全的抗癒痛治疗药物是生物 医学重要的目标之一巧，3]。
[0003]喃齿类癒痛模型包括最大电休克模型，点燃模型，戊四哇（PTZ)、海仁酸、青霉素等 诱导癒痛模型，送些模型对于癒痛药物研发及机制研究起到了重要的作用。但是，现阶段癒 痛依然是一个棘手的医学问题，其机制尚不清楚。斑马鱼是一种脊椎动物，与人类基因同源 性高达85%，其信号传导通路与人类基本近似，生物结构和生理功能与哺乳动物高度相似， 具有体积小(可用微孔板分析)、发育周期短、体外受精、透明（可直接用肉眼和解剖显微镜 观察)、单次产卵数较高等特点[4]。斑马鱼模型既具有体外实验快速、高效、低廉、用药量小 等优势，又具有哺乳类动物实验预测性强、可比度高、可观察多个器官等优点，近年已在化 合物药效、毒性评价中得到广泛应用[5, 6]。在斑马鱼胚胎发育早期多己胺系统、5居色胺 系统和Y-氨基了酸(简称GABA)系统发育，并且具有相应的功能。送为斑马鱼在神经系统 疾病中的应用提供了可能[7]。PTZ是Y-氨基了酸受体枯抗剂，而GABA是脑内重要的抑 制性神经递质，抑制GABA后可诱导癒痛发作。按照送种诱导机制，PTZ诱导大鼠癒痛模型可 筛选各种作用机制的抗癒痛药物巧，9]，癒痛的分级参照1972年Racine制定的标准可W分 为；一级；静止不动伴随有嘴部/面部运动；二级；点头及落水狗样抖动；H级；前肢阵李； 四级；站立及双侧前肢阵李；五级；持续站立及跌倒；六级；狂奔及尖叫[10]。Bar油anand Berghmans应用同样的机制，建立了PTZ诱导斑马鱼癒痛模型，可模拟哺乳动物癒痛状态， 斑马鱼表现为运动增加、快速的"润旋行为"及阵李发作[11，12]。多位研究者利用PTZ诱 导斑马鱼癒痛模型验证了多种作用机制的抗癒痛药物在此模型中均能表现出一定的药效， 包括钢离子阻滞剂；卡马西平、苯妥因纳；巧通道阻滞剂：加己喷了；抑制囊泡释放药；左己 拉西坦；GABA受体激动剂；地西泮；改变GABA再摄取和分解的药物：丙戊酸钢等巧，13]。 2012年国外研究者利用斑马鱼癒痛模型从2000个已知活性的化合物中，筛选出46个有潜 在抗癒痛作用的化合物。送些化合物包括酱族化合物、抗炎、抗氧化、血管扩张剂、杀虫剂、 除草剂，相关药物进入后续研发阶段[14]。因此，斑马鱼癒痛模型可W高通量高效筛选抗癒 痛药物，送对癒痛药物的研发意义重大。
[0004] 综上所述，利用斑马鱼癒痛模型高通量筛选抗癒痛药物，寻求新的化合物来有效 治疗或预防癒痛已成为研发热点，开发具有自主知识产权的抗癒痛药物迫在眉睫。
[0005] 环化司胺(英文名称；CICL0PIR0XOLAMI肥；中文名称：环化司胺、环匹罗司己 醇胺；化学名称；6-环己基-1-居基-4-甲基化巧丽2-氨基己醇；分子式： C12H17N02C2H7N0,分子量：268. 35)对皮肤癖菌、酵母菌、放线菌、霉菌和其它真菌有较强的 抑菌和杀菌作用，对各种革兰氏阳性和革兰氏阴性细菌及支原体、衣原体、毛滴虫等也有一 定枯抗作用。环化司胺的化学结构式如下：
[0006] 至今尚未见有关环化司胺抗癒痛活性及抗癒痛祀点活性的相关报道。
【发明内容】
[0007] 本发明的目的在于提供环化司胺在制备治疗或预防癒痛药物中的新用途。
[0008] 本发明的目的是通过W下技术方案实现的；现有化合物环化司胺，结构式如下：
本发明利用PTZ诱导斑马鱼癒痛模型进行环化司胺治疗或预防癒痛药效学实验。PTZ是Y-氨基了酸(简称GABA)受体枯抗剂，PTZ诱导后，早期即刻基因C-Zbs上调，斑马鱼 立即表现出运动增加、快速的"润旋行为"及阵李发作，送与人类癒痛发作症状相似。利用 ViewPoint行为学分析仪记录斑马鱼运动轨迹，利用该软件分析快速运动距离，筛选抗癒 痛药物。该方法简单，高效，高通量。本发明提供了环化司胺在PTZ诱导斑马鱼癒痛模型中， 可W显著的降低癒痛斑马鱼快速运动距离(相当于哺乳动物的癒痛状态)，对总的运动距离 无影响，说明在无毒浓度下，环化司胺表现出较好的抗癒痛药效，送表明环化司胺可W治疗 或预防癒痛的发生。
[0009] 本发明环化司胺价格低廉、安全性高、原料来源广泛，辅W药学上可接受的辅料， 采用常规制剂技术即可制成各种口服、注射，具有良好的开发前景。
【附图说明】
[0010] 图1PTZ诱导斑马鱼癒痛模型轨迹图。红色代表V〉20mm/sec的运动轨迹，绿色代 表4mm/sec<V<20mm/sec的运动轨迹，黑色代表V<4mm/sec的运动轨迹。苯妥英钢在 300UM浓度下，能显著降低快速运动距离，癒痛治疗效率达78% (公< 0.01);筛选的化合 物Cmp3为环化司胺，单浓素筛选中100UM浓度下，能显著降低快速运动距离，癒痛治疗效 率达 75% (公 < 0.01)。
[0011] 图2环化司胺抗癒痛药效柱状图。空白组快速运动距离为100mm,溶剂组和模型 组与空白组相比，快速运动距离显著增加(公< 0. 01，公< 0. 01)，表明PTZ诱导斑马鱼癒 痛模型成功，且表现为快速运动距离增加。模型组与溶剂组相比，快速运动距离无差异，表 明溶剂DMS01. 0%对斑马鱼行为无影响。苯妥英钢在300UM浓度下，能显著降低快速运动 距离，癒痛治疗效率达78% (公< 0.01);环化司胺单浓素筛选中100UM浓度下，能显著降 低快速运动距离，癒痛治疗效率达75% (/?< 0.01)。
[0012] 图3环化司胺在10、30、100UM浓度下对正常斑马鱼总的运动距离抑制率分别为 25%、13%、35%(於0. 01)，同时在解剖显微镜下观察鱼的状态，100UM组触碰反应基本消失， 30UM、10UM组触碰反应正常，结果表明其在100UM浓度浓度时，斑马鱼有毒性反应； 30 -10UM浓度时，无毒性反应。
[0013] 图4在PTZ诱导癒痛模型中，环化司胺在10、30、100UM浓度下抗癒痛抑制率分 别为40% (p<0. 01)、86% (p<0. 01)、98% (p<0. 01)，结合对总的运动距离的影响结果，表明环 化司胺在100UM浓度时的抗癒痛药效为毒性表现，在10-30UM浓度时无毒性表现，表现 出明显的抗癒痛药效，且量效关系明确。
[0014] 图5环化司胺在100UM浓度对PTZ诱导斑马鱼癒痛模型轨迹图。红色代表 V〉20mm/sec的运动轨迹，绿色代表4mm/sec<V<20mm/sec的运动轨迹，黑色代表V<4mm/ sec的运动轨迹。
【具体实施方式】
[0015] 下面结合附图和实施例对本发明作进一步阐述，但本发明的保护范围并不限于 此。
[0016] 实施例一定量观察单浓度环化司胺在斑马鱼癒痛模型中的药效 斑马鱼： 本实施例使用的斑马鱼为野生型斑马鱼，饲养和使用标准严格参照美国实验动物管理 和使用委员会（IACUC)的要求进行。
[0017] 养鱼水（Fishwater): 配置方法；IL反渗透水（reverseosmosis(RO)water)加入 0.3g海盐（Instant Oceansalts)。
[001引二甲基亚讽值MSO,分析纯）： 购买于阿拉了（货号#1095515,批号#30573)。1%DMSO溶液（阴性对照）配置： 使用时，用养鱼水配置成浓度为1. 0%的工作液，现配现用。
[001引PTZ(戊四哇，诱导剂）； 购自美国Sigma公司，批号069K1245。使用时，用0. 1%DMSO溶液配置成实验所需的浓 度，本实验中PTZ的使用浓度为lOmM。
[0020] 苯妥英纳（阳性对照药）； 购自北京百灵威科技有限公司，批号GFOl-抑。使用时，用1. 0%DMSO溶液配置成实验 所需的浓度，本实验中苯妥因纳的使用浓度为300UM。
[0021] 环化司胺（Cl化OPIROXOLAMI肥）： 购买于sigma公司，批号67814。使用时，用1.0%DMSO溶液配置成100PM进行实验。
[0022] 实验方法： (1)实验分组及幼鱼处理：取96尾发育良好的斑马鱼幼鱼，幼鱼发育时相为受精后6 化f(day-postfertilization，化f)，随机分为12组（模型组、溶剂组、阳性药物组、药物 组），每组胚胎数量为8只。操作时将幼鱼随机分配至96孔细胞培养平板（Greiner,德国） 中，每孔1尾幼鱼，每孔饲养用水200UL。
[0023] (2)药物预处理；用移液器（量程100~1000化，Eppendorf)迅速将预先配置好 的药液加入96孔细胞培养平板对应的孔中，每孔180UL。加药液之前，用移液器（量程 10~1000化，化pendorf)将96孔板中赔育胚胎的饲养用水尽力移出，此操作需在短时间