治疗高脂肪食品诱发肝脏脂肪蓄积的组合物的制作方法
【技术领域】
[0001] 本发明设及一种赃嗦基类似物的药物组合物与其它活性剂的组合治疗方法 (combinationtherapymethod)，能够用于消除高脂肪食品诱发肝脏脂肪蓄积、抑制肥胖 过度、非酒精性脂肪肝炎，并可用于该等疾病的治疗。 现有技术
[0002] 已知咖啡因可经由增加能量消耗、解偶联蛋白1(uncouplingproteinl)令褐色 脂肪组织产生热量W及启动肾上腺素等作用，用于肥胖的治疗。然而即使长期间投予麻黄 碱/咖啡因的治疗，肌肉解偶联蛋白3(muscle-uncouplingprotein3)的表达并无变化。 KMUP-1与西地那非（sildenafil) -样，能增加内皮细胞一氧化氮合成酶（eNO巧/cGMP，但 是后者缺乏G蛋白偶合受体（G-protein-couplereceptors,GPCR)括抗剂的活性。已经证 实咖啡摄入量伴随着较低的肝脏疾病罹患率，并降低肝细胞癌、肝硬化的风险。
[0003] 经由增强eNOS/guanosine3'，5'-环巧（cGMP)途径，包括增加可溶性鸟酸环化酶 αUsGCa1)和蛋白激酶G(PKG)的表达，黄嚷岭结构的KMUP-1已证实，可放松血管和气道 平滑肌肉收缩。
[0004] 对于脂质代谢已知KMUP-1和西地那非可增加cGMP/PKG，可作为憐酸二醋酶类型 5A(PDE-5A)抑制剂W及eNOS-增强剂，但其对于肥胖的影响情况未明确。增加cGMP可W促 进和降低白色脂肪组织，与对于内脏附睾脂肪垫（visceral巧ididymalfatpads)不同。 事实上在肥胖组织，皮下脂肪组织的脂肪分解可经由eNOS和服L呈现减少；抑制NOS导致 白色组织的脂肪分解呈现增加现象，而添加一氧化氮（NO)造成脂肪分解受到抑制。
【发明内容】
[0005] 根据本发明的一构想，本发明掲示一抑制因脂质蓄积引发肝脏疾患的方法。该方 法包括步骤：提供一肝脏疾患动物；投予足供疗效用量的药物组合物于该动物，其制剂是 选自KMUPs-RX，KMUPs-RX-RX复合化合物之一所组成的药物或是食品组合物。
[0006] 根据本发明的另一构想，本发明掲示一抑制因脂质蓄积引发肝脏疾患的方法。该 方法包括步骤：提供一肝脏疾患动物；经口投予足供疗效用量的药物组合物于该动物，其 制剂是选自西地那非类似物（SildenafilAnalogs),西地那非类似物-RX复合化合物之一 所组成的药物或是食品组合物。
[0007] 根据本发明的另一构想，本发明掲示一治疗肝脏疾病的方法。该方法包括步骤： 对于溫血动物的疾病患者；投予足供疗效用量，选自赃嗦基类似物（Piperazin^Analogs) 和赃嗦基复合类似物（Piperazin^ComplexAnalogs)之一组成物，上述疾病，包括非酒精 性脂肪肝、过度肥胖化yperadiposity)、肝脏脂肪变性化巧aticsteaotosis)、高脂肪食品 诱发肝脏脂质蓄积、炎症反应而脂质蓄积（lipidaccumulation)和其组合。
[0008] 根据本发明的其它构想，本发明掲示一投予足供疗效用量的赃嗦基类似物W 及补充活性化合物（differentactiveagent)于溫血动物，W治疗疾病的组合投药 (combinationadminister)方法。
[0009] 根据本发明的其它构想，本发明掲示一治疗疾病的方法。该方法包括步骤：提供一 肝脏患者；投予足供疗效用量的药物组合物，其主成分是选自西地那非类似物，西地那非类 似物-RX复合化合物之一所组成的药物或是食品组成物。
[0010] 抑制肝脏疾患的药物组合物，包括选自足供疗效用量如结构式II或III所示 KMUPs复合化合物，其中R2和R4各自选自C1~巧烷氧基团、氨原子、硝基和面素原子； RX包括提供簇酸基团的Statin(他汀）类似物、共聚物（co-polymer)、聚丫 -聚教胺酸衍 生物（pol厂丫-polyglutamicacidderivative)、D-抗坏血酸值-ascorbicacid)、心抗 坏血酸（X-ascorbicacid)、Dk抗坏血酸值kascorbicacid)、油酸（oleicacid)、憐酸 (phosphoricacid)、巧樣酸托;[付;[0acid)、烟碱酸（nicotinicacid)和簇甲基纤维素 (sodiumcarboxylmethylcellulose,sodiumCMC);和-RX为提供簇酸基团的带负电阴离子 包括Statin(他汀）类似物、共聚物、聚γ-聚教胺酸衍生物、D-抗坏血酸、k抗坏血酸、 0心抗坏血酸、油酸、憐酸、巧樣酸、烟碱酸和簇甲基纤维素；和药学上可接受的赋形剂。
[0011] 结构式II
[0012]
[001引 结构式III
[0014]
【附图说明】
[0015] 图1是KMUP-1影响喂饲高脂肪食品小鼠的体重
[001引 1…Η抑组2…预防组
[0017] 3…治疗组（KMUP-1, 2. 5mg/200ml)
[001引 图2A-2C是肝脏的整体形态
[0019] 图2A是喂饲Η抑小鼠肝脏的整体形态
[0020] 图2Β是KMUP-1影响肝脏的整体形态
[0021] 图2C是预防组的肝脏整体形态
[0022] 图 3Α-3Β是KMUP-1 影响SR-B1、ΡΚΑ的表达
[0023] 图3A是KMUP-1影响喂饲Η抑小鼠其SR-Bl的表达
[0024] 1…Η抑组2…治疗组
[00巧]3…预防组（KMUP-1, 2. 5mg/200ml)
[002引 图3B是KMUP-1影响喂饲Η抑小鼠其PKA的表达
[0027] 1…Η抑组2…治疗组
[0028] 3…预防组（KMUP-1, 2. 5mg/200ml)
[0029] 图4A-4B是肝脏切片蓄积的组织油滴形态
[0030] 图4A是油滴的标准
[0031] 图4B是油滴直径与数目的改变
[0032] 1…Η抑组2…KMUP-1预防组 [003引图5A-5C是发炎肝脏内油滴的形态
[0034] 图5Α是肝脏内油滴与玻璃样透明体的形态
[0035] 图5Β是预防组的形态
[0036] 图5C是治疗组的形态
[0037] 图6A-6C是发炎TNF-α的I肥染色
[003引 图6Α是喂食HFD小鼠的肝脏切片
[003引 图她是治疗组
[0040] 图6C是预防组
[0041] 图7Α-7Ε是肝脏内油滴直径与数目的改变
[0042] 1…Η抑组2…治疗组3…预防组
[0043] 4…直径 5…数量
[0044] 图7Α是喂食Η抑小鼠于肝脏脂肪变性TNF-α的I肥染色 [004引图7Β是喂食Η抑小鼠于肝脏脂肪变性ΜΜΡ-9的I肥染色
[0046] 图7C是喂食Η抑小鼠于肝脏脂肪变性服L的I肥染色
[0047] 图7D是喂食Η抑小鼠于肝脏脂肪变性Ρ-服L的I肥染色
[004引 图7Ε是喂食Η抑小鼠于肝脏脂肪变性ATCL的I肥染色
[0049] 图8A-8C是巨隧细胞Ml的CDllc染色
[0050] 图8A是喂食Η抑小鼠Ml的CD11C染色 [005。 图8B是治疗组
[005引 图8C是预防组
[005引 图9A-9C是巨隧细胞M2的CD209a染色 [0054] 图9A是喂食Η抑小鼠M2的CD209a染色 [005引 图9B是治疗组
[005引 图9C是预防组
[0057] 图10A-10B是巨隧细胞Ml内油滴直径与数目的改变 [005引 1…Η抑组2…治疗组3…预防组
[0059] 4…直径 5…数量
[0060] 图 10Α是F4/80 染色
[0061] 图 10Β是CDllc染色
[006引图llA-1IB是巨隧细胞M2内油滴直径与数目的改变
[0063] 1…Η抑组2…治疗组3…预防组
[0064] 4…直径 5…数量
[0065] 图 11Α是CD206 染色
[0066] 图 11Β是CD209a染色
[0067] 图12是KMUP-1于喂食Η抑小鼠肝脏附睾脂肪垫的影响
[006引 1…对照组左侧附睾脂肪垫
[0069] 2…对照组右侧附睾脂肪垫
[0070] 3…治疗组左侧附睾脂肪垫（KMUP-1)
[0071] 4…治疗组右侧附睾脂肪垫（KMUP-1)
[0072] 5…对照组附睾脂肪垫6…投予KMUP-1
[0073] 图13是KMUP-1于喂食HFD小鼠肝脏脂肪细胞直径的影响
[0074] 1…对照组2…治疗组（KMUP-1)
[007引 图14是KMUP-1影响小鼠附睾脂肪垫的eNOS表达
[0076] 1…对照组2…治疗组（KMUP-1)
[0077] 图15是KMUP-1影响小鼠附睾脂肪垫的服L表达
[0078] 1…对照组2…治疗组（KMUP-1)
[0079] 图16是KMUP-1影响小鼠附睾脂肪垫的比-10表达
[0080] 1…对照组2…治疗组（KMUP-1)
[0081] 图17是KMUP-1影响小鼠附睾脂肪垫的TNF-α表达
[008引 1…对照组2…治疗组（KMUP-1)
[0083] 图 18 是KMUP-1 影响小鼠肝脏的HMGCoAreductase
[0084] 1…对照组2…治疗组（KMUP-1，阳性对照）
[00财 3…治疗组（KMUP-1，Img/kg)
[0086] 4…治疗组（KMUP-1, 2. 5mg/kg)
[0087] 5…治疗组（KMUP-1, 5mg/kg)
[0088] 6…治疗组（simvastatin, 5mg/kg)
[0089] 图19是KMUP-1影响小鼠肝脏的ROCKII表达
[0090] 1…对照组2…治疗组（KMUP-1，阳性对照）
[00川 3…治疗组（KMUP-1，Img/kg)
[0092] 4…治疗组（KMUP-1, 2. 5mg/kg)
[0093] 5…治疗组（KMUP-1, 5mg/kg)
[0094] 6…治疗组（simvastatin, 5mg/kg)
[009引 图20是KMUP-1影响小鼠肝脏的PPAR丫表达 [009引 1…对照组2…治疗组（KMUP-1，阳性对照）
[0097] 3…治疗组（KMUP-1，Img/kg)
[0098] 4…治疗组（KMUP-1, 2. 5mg/kg)
[0099] 5…治疗组（KMUP-1, 5mg/kg)
[0100] 6…治疗组（simvastatin, 5mg/kg)
[0101]图21是KMUP-1影响小鼠肝脏的ABCAl表达 [010引 1…对照组2…治疗组（KMUP-1，阳性对照）
[010引 3…治疗组（KMUP-1，Img/kg)
[0104] 4…治疗组化MUP-1, 2. 5mg/kg)
[010引 5…治疗组（KMUP-1，5mg/kg)
[0106] 6…治疗组（simvastatin, 5mg/kg)
[0107] 图 22A-22B是KMUP-1、simvastatin影响血液的HMGCoAreductase
[0108]图 22A是KMUP-1 影响血液的HMGCoAreductase
[0109] 1…对照组2…治疗组化MUP-1, 10-9M)
[0110] 3 …治疗组化MUP-1, 10-8M)
[0111] 4 …治疗组化MUP-1, 10-7M)
[0112] 5 …治疗组化MUP-1, 10-6M)
[0113] 6 …治疗组化MUP-1, 10-5M)
[0114]图 22B是simvastatin影响血液的HMGCoAreductase
[011引 1…对照组2…溶媒
[0116] 3…治疗组（simvastatin, 10-9M)
[0117] 4…治疗组（simvastatin, 10-8M)
[011 引 5…治疗组（simvastatin, 10-7M)
[0119] 6…治疗组（simvastatin, 10-6M)
[0120] 7…治疗组（simvastatin, 10-5M)
[0121] 图 23A-23B是KMUP-1、mevalonate影响血液的HMGCoAreductase
[0122] 图 23A是mevalonate影响血液的HMGCoAreductase
[0123] 1 …对照组 2···mevalonate, 20μΜ
[0124] 3···mevalonate, 40μΜ 4···mevalonate, 60μΜ
[0125] 5···mevalonate, 80μΜ 6…mevalonate, 100μΜ
[0126]图 23Β是mevalonate+KMUP-1 影响血液的HMGCoAreductase
[0127]1…对照组2…溶媒
[012引 3…治疗组（mevalonate,阳性对照）
[0129] 4…治疗组（simvastatin, 10-5M)
[0130] 5 …治疗组化MUP-1, 10-5M)
[0131] 图24A-24D是影响化oA/ROCKII的表达
[0132]图 24A是C3exoenzyme、Y27632 的影响
[0133]1…对照组2…溶媒
[0134] 3…simvastatin, 10-5M4…KMUP-1, 10-5M
[0135]日…C3exoenzyme, 5ng/ml
[0136] 6 …Y27632, 10-5M
[0137] 图 24B是化-8-pCPT-cGMPS的影响
[013引 1 …对照组 2 …化-8-pCPT-cGMPS(10yM)
[0139] 3 …化-8-pCPT-cGMPS(10μΜ) +KMUP-1 (10μΜ)
[0140] 图24C是影响PPAR丫的表达
[0141] 1…对照组2…溶媒
[014引3…simvastatin, 10-5M 4…KMUP-l, 10-5M
[014引5…C3exoenzyme, 5ng/ml6…Y27632, 10-5M
[0144] 图24D是影响ABCA1的表达
[0145] 1…对照组2…溶媒
[014引3…simvastatin, 10-5M4…KMUP-1, 10-5M
[0147] 5…C3exoenzyme, 5ng/ml6…Y27632, 10-5M
[0148] 图25A-25C是影响化oA/ROCKII的表达
[0149] 图25A是GGPP的影响
[0150] 1…对照组2…治疗组（KMUP-1，阳性对照）
[0151] 3 …治疗组化MUP-1, 10-9M)
[0152] 4 …治疗组化MUP-1, 10-8M)
[0153] 5 …治疗组化MUP-1, 10-7M)
[0154] 6 …治疗组化MUP-1, 10-6M)
[0155] 7 …治疗组化MUP-1, 10-5M)
[0156] 图25B是FPP的影响
[0157] 1…对照组2…治疗组（KMUP-1，阳性对照）
[015引 3…治疗组化MUP-1, 10-9M)
[0159] 4 …治疗组化MUP-1, 10-8M)
[0160] 5 …治疗组化MUP-1, 10-7M)
[0161] 6…治疗组（KMUP-1, 10-6M)
[0162] 7 …治疗组化MUP-1, 10-5M)
[016引图25C是simvastatin的影响
[0164] 1…对照组2…治疗组（simvastatin,阳性对照）
[0165] 3…治疗组（simvastatin, 10-9M)
[0166] 4…治疗组（simvastatin, 10-8M)
[0167] 5…治疗组（simvastatin, 10-7M)
[0168] 6…治疗组（simvastatin, 10-6M)
[0169] 7…治疗组（simvastatin, 10-5M)
[0170]图 26A-26C是PPAR丫 的表达
[0171] 图26A是单独WFPP培养下KMUP-1的影响
[017引 1…对照组2…治疗组（KMUP-1，阳性对照）
[0173] 3 …治疗组化MUP-1, 10-9M)
[0174] 4…治疗组（KMUP-1, 10-8M)
[0175] 5 …治疗组化MUP-1, 10-7M)
[0176] 6 …治疗组化MUP-1, 10-6M)
[0177] 7 …治疗组化MUP-1, 10-5M)
[0178] 图2她是单独WGGPP培养下KMUP-1的影响
[0179] 1…对照组2…治疗组（KMUP-1，阳性对照）
[0180] 3 …治疗组化MUP-1, 10-9M)
[0181] 4…治疗组（KMUP-1, 10-8M)
[0182] 5 …治疗组化MUP-1, 10-7M)
[0183] 6 …治疗组化MUP-1, 10-6M)
[0184] 7 …治疗组化MUP-1, 10-5M)
[018引 图26C是simvastatin的影响
[0186] 1…对照组2…溶媒
[0187] 3…治疗组（simvastatin,阳性对照）
[018引 4…治疗组（simvastatin, 10-9M)
[0189] 5…治疗组（simvastatin, 10-8M)
[0190] 6…治疗组（simvastatin, 10-7M)
[0191] 7…治疗组（simvastatin, 10-6M)
[0192]