一种药用组合物的新用图
【技术领域】
[0001] 本发明公开中药复方苦参注射液(商标名：岩舒）的一种新用途。所述的新用途是 在制备治疗结直肠癌，特别涉及晚期结直肠癌疾病药物的新用途。
【背景技术】
[0002] 结肠癌和直肠癌的总称为大肠癌，即所谓的结直肠癌，是指大肠粘膜上皮在环境 或遗传等多种致癌因素作用下发生的恶性病变，即大肠粘膜上皮起源的恶性肿瘤，是最常 见的消化道恶性肿瘤之一，处于全球恶性肿瘤的第三位，且随着生活水平的提高，饮食结构 的变化，大肠癌的发病率在持续上升。手术治疗是大肠癌治疗的首选方法，5年生存率仅在 50%左右。目前西医治疗结直肠癌是以手术、放疗、化疗为首选。但直肠癌由于早期症状不 明显，许多患者确诊的时候多数已经是中晚期患者了，进行手术治疗固然能切除癌肿，但还 有残癌、或区域淋巴结转移、或血管中癌栓存在，手术对于全身治疗与机体防御反应的提高 毫无作用。通过采用中药治疗配合放化疗来控制晚期症状，可缓解症状、控制病情，且毒副 作用小。
[0003] 结直肠癌在中医学中多属"肠覃"、"肠癖"等范畴。其病因多为饮食不节，恣食肥 甘、燥热或不洁之物，导致脾不健运，湿热蕴毒下迫大肠，热伤肠络，毒邪成痈而逐渐发生癌 瘤。根据中医理论，针对直肠癌的发病机理，宜清肠解毒、补益脾肾、清热散结，进行辩证配 伍组方，以达到标本兼治的目的。
[0004] 复方苦参注射液是由苦参、白土苓在传统中医理论指导下，科学组方，在现代中药 注射液技术指导下制备而成，具有清热利湿，凉血解毒，散结止痛之功效。复方苦参注射液 是国家二级中药保护品种，临床上多年应用于癌肿疼痛、出血。CN1062181C公开了复方苦参 注射液用于肺癌、肝癌、胃癌的治疗及缓解癌性疼痛的作用；CN1876016A公开了复方苦参 注射液抗实体肿瘤、辅助化疗药增效减毒、镇痛、止血、升白细胞、提高免疫力、抗肝炎等作 用。我们对该药在结直肠癌方面的治疗作用进行了体内外探索和临床研究。结果表明：复 方苦参注射液对人结直肠癌细胞株SW480和HT29的生长具有明显的抑制作用，对L0V0细 胞体外增殖具有不同程度的抑制和杀伤作用，对人结直肠癌SW480移植瘤的浸润、转移的 具有明显的抑制作用。临床实验表明：单用或与化疗药物联用治疗直肠癌，复方苦参注射液 疗效显著，可延缓病情进展，改善症状，且毒副作用较轻，病死率、生存期、中位生存期、疾病 进展期、及生活质量等指标均有较明显的改善。
【发明内容】
[0005] 本发明公开复方苦参注射液的一种新用途。
[0006] 本发明涉及的新用途是在制备治疗结直肠癌，特别涉及晚期结直肠癌疾病药物的 新用途。
[0007] 本发明所述的复方苦参注射液的原料药组成为： 苦参1000~1500重量份白土苓400~800重量份。
[0008] 本发明所述的复方苦参注射液的原料药优选组成为： 苦参1400重量份白土苳600重量份。
[0009] 本发明所述的复方苦参注射液的制备方法包括如下步骤： 将二味原料药粉碎成粗粉，混匀，置渗漉缸中，加相当于药量3~8倍的0. 5~3%醋酸 浸渍30~50小时，而后进行渗漉，收集漉液，减压75°C以下浓缩至适量，另器存放，药渣加 3~8倍量注射用水，煎煮二次，每次0. 5~2小时，合并滤液，浓缩至适量，放冷，离心，上清 液与酸浓缩液合并，调整至800~1200体积份，加乙醇沉淀2次，先使溶液醇含量达50~ 70%，静置过夜，离心，上清液减压回收乙醇，浓缩至300~600体积份，再加乙醇使醇含量 达80~95%，同上处理，加注射用活性炭适量，加热处理，滤过，用氢氧化钠调pH值至6~ 8,放置过液，滤过，再调pH至9~11，同法处理，以醋酸调pH至4~6,同法处理，再以氢氧 化钠调pH至7~9,加注射用水调至1000体积份，微孔薄膜抽滤，灌封，灭菌，即得。
[0010] 本发明所述的复方苦参注射液的制备方法优选包括如下步骤： 将二味原料药粉碎成粗粉，混匀，置渗漉缸中，加相当于药量5倍的1 %醋酸浸渍48小 时，而后进行渗漉，收集漉液，减压75°C以下浓缩至适量，另器存放，药渣加5倍量注射用 水，煎煮二次，每次1小时，合并滤液，浓缩至适量，放冷，离心，上清液与酸浓缩液合并，调 整至1000体积份，加乙醇沉淀2次，先使溶液醇含量达65 %，静置过夜，离心，上清液减压回 收乙醇，浓缩至500体积份，再加乙醇使醇含量达90%，同上处理，加注射用活性炭适量，加 热处理，滤过，用氢氧化钠调pH值至7,放置过液，滤过，再调pH至11，同法处理，以醋酸调 pH至5,同法处理，再以氢氧化钠调pH至8,加注射用水调至1000体积份，微孔薄膜抽滤，灌 封，灭菌，即得。
[0011] 本发明所述的重量份与体积份的比例为克/_升。
[0012] 下述实验例和实施例用于进一步说明但不限于本发明。
[0013] 药效学实验 药效学研究试验结果表明，本发明药物组合物对人结肠直肠癌细胞株SW480和HT29具 有明显的抑制作用，对L0V0细胞的体外增殖具有不同程度的抑制和杀伤作用，对人结直肠 癌SW480移植瘤细胞的生长有明显抑制作用。
[0014] 实验例1. 本发明药物组合物对人结肠直肠癌细胞株SW480和HT29的影响研究 采用噻唑蓝比色法（MTT法）测定本发明药物组合物制剂（按实施例1方法制备）对 人结直肠癌细胞株SW480和HT29的生长抑制作用，以培养液作为对照。取对数生长期细 胞，接种于96孔培养板，每孔加100微升细胞悬液（每孔5000个细胞）。药物组梯度稀释 为不同浓度后加入到培养板中，每孔加药液100微升，每种浓度设3个复孔，轻轻混匀后将 培养板置于〇) 2培养箱中，在37°C、体积分数为5%的C0 2条件下连续培养48h后，每孔加 10微升MTT溶液（5g/L，生理盐水配制），继续培养4h。测定前小心吸出培养液，每孔加 入DMS0150微升，缓慢振荡，待结晶完全溶解后用酶标仪于波长570nm下测定0D值并计 算其抑制率。
[0015] 抑制率=(1-实验组0D值/对照组0D值）X 100 % 观察药物对人结肠直肠癌细胞株SW480和HCT-29的细胞毒作用 结果见表1 : 表1药物对SW480和HT29细胞株的细胞毒作用（n= 3)
结果表明，本药物在l〇〇mg/ml的剂量条件下对人结直肠癌细胞株SW480和HT29具有 明显的抑制作用。
[0016] 实验例2 复方苦参注射液（按实施例1方法制备）对结肠癌LOVO细胞体外增殖的影响。
[0017] 用MTT比色法检测不同浓度的复方苦参注射液作用后6h、24h、48h、72h、96h、 120hL0V0细胞的存活率，与空白对照细胞比较，计算细胞增殖的抑制率。
[0018] 结果显示：不同浓度的复方苦参注射液对LOVO细胞的增殖具有不同程度的抑制 和杀伤作用，且呈现出明显的剂量依赖关系。2mg/ml复方苦参注射液组有明显的时间依赖 性，随着时间的延长，细胞浮起、破碎、死亡等表现明显增多；l、〇. 5、0. 25mg/ml复方苦参注 射液组作用从6h-72h，对细胞生长的抑制作用呈明显增加态势，但当作用时间超过72h，对 LOVO细胞增殖的抑制作用逐渐减弱。
[0019] 用流式细胞仪检测了不同浓度复方苦参注射液作用L0V0细胞后的凋亡率和细胞 周期分布情况。结果显示当药物作用6h，各浓度复方苦参注射液与对照组比较均出现G1、 S期阻滞趋势；lmg/ml、2mg/ml复方苦参注射液组作用24h，与对照组相比进入G2/M期的细 胞增多；2、1、0. 5mg/ml加药组作用48h进入G2/M期的细胞较对照组均有增加。
[0020] 表2不同浓度、不同时间岩舒对结肠癌L0V0细胞作用后的增殖抑制率 (n=18, X土s)
注：与对照组相比，#P < 0. 01，*P < 0. 05 表3不同浓度岩舒对L0V0细胞周期分布的影响 (n=3, X土s)
注：与对照组相比，#P < 0. 01，*P < 0. 05 实验例3 复方苦参注射液（按实施例2方法制备）对人结肠癌SW480移植瘤E-cadherin表达 的影响。
[0021] 选健康SPF级BALB/c小鼠2只，雌性，年龄4-6周，体重20 ± 2g ;健康SD大鼠40 只，体重（180±15)g。接种人结肠癌SW480原位移植瘤，造模成功后，按随机数字表分组 的方法将40只健康SD大鼠分为4组，每组10只：A组：模型对照组；B组：阳性