使用PD-1拮抗剂和dinaciclib的组合治疗癌症的制作方法
【专利说明】使用PD-1拮抗剂和d i nac i c I i b的组合治疗癌症 发明领域
[0001] 本发明涉及可用于治疗癌症的联合治疗。具体地，本发明涉及包含程序性死亡蛋 白质I (PD-I)的诘抗剂和dinaciclib的联合治疗，所述dinaciclib是一种泛细胞周期蛋白 依赖性激酶(CDK )抑制剂。
[0002] 发明背景 ro-Ι被公认在免疫调节和外周耐受维持中起重要作用。PD-I在幼稚T、B和NKT细胞上适 度表达，且通过淋巴细胞、单核细胞和骨髓细胞上的T/B细胞受体信号转导上调（1)。
[0003] ro-l、PD-Ll (B7-H1)和ro-L2 (B7-DC)的两种已知配体在多种组织中出现的人癌 症中表达。在例如卵巢癌、肾癌、结肠直肠癌、胰腺癌、肝癌和黑素瘤的大量样品集合中，显 示出ro-Ll表达与不良预后和减少的总体生存相关联，而与后续治疗无关(2-13)。相似地， 发现肿瘤浸润淋巴细胞上的ro-Ι表达标记了乳腺癌和黑素瘤中失能的T细胞（14-15)，且与 肾癌的不良预后相关联（16)。因此，已提出表达PD-Ll的肿瘤细胞与表达ro-i的T细胞相互 作用，以减弱T细胞活化且逃避免疫监控，从而造成针对所述肿瘤的受损的免疫应答。
[0004] 抑制PD-I和其配体PD-Ll和PD-L2中之一或两者相互作用的数种单克隆抗体正处 于治疗癌症的临床开发中。已提出如果与其它已许可或实验性的癌症治疗(例如，辐射、手 术、化学治疗剂、靶向治疗、抑制在肿瘤中异常调节(disregulate)的其它信号通路的药剂 和其它免疫增强剂)组合施用，此类抗体的功效可能提高。
[0005] 细胞循环控制的异常调节是所有人癌症的标志，且经常与细胞周期蛋白依赖性激 酶(CDK)的异常活化/调节相关。然而，CDK级联对以环境依赖的方式维持T细胞的自身功能 是重要的。因此，作为抗癌剂的CDK抑制剂(CKDI)的开发已经由于免疫细胞毒性和随之产生 的潜在的免疫抑制效果而变得复杂（17) dinaciclib，一种选择性抑制⑶Kl、CDK2XDK5和 CDK9的泛CDK抑制剂，已经作为在多种癌症中的潜在治疗被研究，其中中性白细胞减少症是 在临床试验中观察到的最常见的剂量限制性毒性(17、18)。
[0006] 发明概述 本发明是部分基于令人惊讶的发现，即dinaciclib和鼠源化的抗小鼠 PD-I抗体对荷瘤 小鼠的共同施用（concurrent administration)导致了相对于任一种药剂单独施用显著更 高的抗肿瘤功效。这一发现是未曾料到的，因为预期dinaciclib在有力地抑制转录和细胞 增殖中的已知活性与抗-PD-I治疗的功效相互抵消，据信所述抗-PD-I治疗很大程度上涉及 存在于肿瘤中和募集至肿瘤的T细胞的活化和增殖。
[0007] 因此，在一个实施方案中，本发明提供了用于治疗个体癌症的方法，其包括对个体 施用包括I3D-I拮抗剂和dinac i c I ib化合物的联合治疗。
[0008] 在另一个实施方案中，本发明提供了用于治疗癌症的、包含与dinaciclib化合物 组合使用的ro-i的药物。
[0009] 在还另一个实施方案中，本发明提供了用于治疗癌症的、包含与PD-I拮抗剂组合 使用的dinacicI ib化合物的药物。
[0010]其它实施方案提供了当与dinaciclib化合物组合施用时PD-I诘抗剂在制备用于 治疗个体中癌症的药物中的用途，和当与F1D-I诘抗剂组合施用时dinaciclib化合物在制备 用于治疗个体中癌症的药物中的用途。
[0011]在还进一步的实施方案中，本发明提供了F1D-I诘抗剂和dinaciclib化合物在制备 用于治疗个体中癌症的药物中的用途。在一些优选的实施方案中，所述药物包括药盒，且所 述药盒还包括包含了使用PD-I诘抗剂与dinaciclib化合物组合以治疗个体中癌症的指导 的包装说明书。
[0012]在上文的所有治疗方法、药物和用途中，所述TO-I拮抗剂抑制PD-Ll与PD-I结合， 且优选地还抑制ro-L2与ro-i结合。在上文的治疗方法、药物和用途的一些优选的实施方案 中，所述PD-I拮抗剂是单克隆抗体或其抗原结合片段，其特异地结合PD-I或PD-Ll，且阻断 PD-Li与ro-i结合。在一个特别优选的实施方案中，所述ro-i拮抗剂是抗PD-I抗体，所述抗 体包含重链和轻链，且其中所述重链和轻链包含在图6中显示的氨基酸序列（SEQ ID NO:21 和SEQ ID NO:22)。
[0013] 在上文的所有治疗方法、药物和用途的实施方案中，所述dinaciclib化合物是式I 的化合物
或式I的化合物的药学可接受的盐。
[0014] 在上文的治疗方法、药物和用途的一些实施方案中，所述个体是人且所述癌症是 实体瘤，且在一些优选的实施方案中所述实体瘤是膀胱癌、乳腺癌、透明细胞肾癌、头/颈鳞 状细胞癌、肺鳞状细胞癌、恶性黑色素瘤、非小细胞肺癌(NSCLC)、卵巢癌、胰腺癌、前列腺 癌、肾细胞癌、小细胞肺癌（SCLC)或二阴性乳腺癌。在一些优选的实施方案中，所述癌症是 未使用易普利单抗的晚期黑素瘤（ipilimumab-nai：ve advanced melanoma)，而在其它优选 的实施方案中，所述人患有易普利单抗难治的晚期黑素瘤。
[0015] 在上文的治疗方法、药物和用途的其它实施方案中，所述个体是人且所述癌症是 血红素恶性肿瘤，且在一些优选的实施方案中，所述血红素恶性肿瘤是急性淋巴细胞白血 病(ALL)、急性髓细胞性白血病(AML)、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、慢性髓细胞性白血病 (CML)、弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)、EBV阳性DLBCL、原发性纵隔大B细胞淋巴瘤、T细胞/ 富组织细胞-大B细胞淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤、霍奇金氏淋巴瘤(HL)、套细胞淋巴瘤(MCL)、多 发性骨髓瘤(MM)、髓样细胞白血病-1蛋白（MCL-1)、骨髓增生异常综合征(MDS)、非霍奇金氏 淋巴瘤(NHL)、或小淋巴细胞性淋巴瘤(SLL)。
[0016] 还在上文任意的治疗方法、药物和用途的优选的实施方案中，所述癌症表达PD-Ll 和TO-L2之一或两者。在特别优选的实施方案中，在所述癌症中ro-Li表达升高。
[0017] 在上文的治疗方法、药物和用途的一个特别优选的实施方案中，所述个体是人且 所述癌症是表达人ro-Ll的慢性淋巴细胞性白血病(CLL)。
[0018] 附图简述 图1显示可用于本发明的示例性的抗ro-i单克隆抗体的轻链和重链CDR的氨基酸序列 (SEQ ID N0s:l-6)。
[0019] 图2显示可用于本发明的另一个示例性的抗ro-i单克隆抗体的轻链和重链⑶R的 氨基酸序列（SEQ ID N0s:7-12)。
[0020] 图3显示可用于本发明的示例性的抗ro-ι单克隆抗体的重链可变区和全长重链的 氨基酸序列（SEQ ID NO: 13和SEQ ID NO: 14)。
[0021 ]图4显示可用于本发明的示例性的抗ro-ι单克隆抗体的可选的轻链可变区的氨基 酸序列（SEQ ID NOs: 15-17)。
[0022]图5显示可用于本发明的示例性抗ro-Ι单克隆抗体的可选轻链的氨基酸序列（SEQ ID NOs:18-20)。
[0023] 图6显示MK-3475的重链和轻链的氨基酸序列（分别为SEQ ID NOs. 21和22)。
[0024] 图7显示nivolumab的重链和轻链的氨基酸序列（分别为SEQ ID NOs. 23和24)。
[0025]图8阐明了在荷瘤小鼠中F1D-I诘抗剂和dinaciclib共同施用的抗肿瘤效果优于单 独使用两者之一的单一治疗，图8A显示了在使用对照、鼠抗小鼠 PD-I mAb(抗PD-I )、 dinaciclib或抗F1D-I和dinaciclib两者治疗期间不同天数的平均肿瘤体积，且图8B显示了 在治疗第一天(左侧表，第〇天)或在治疗25天后(右侧表，第25天)在每个治疗组中个体小鼠 的肿瘤体积值。在下文实施例1中描述了实验细节。
[0026] 发明详述 缩写.在本发明的所有详细描述和实例中将使用以下缩写： ⑶R 互补决定区 CHO 中国仓鼠卵巢 FFPE福尔马林固定，石蜡包埋 FR 框架区 IgG 免疫球蛋白G IHC 免疫组化或免疫组化的 Q2W 每两周一剂量 Q3W 每三周一剂量 VH 免疫球蛋白重链可变区 VK 免疫球蛋白κ轻链可变区。
[0027] I.定义 为了更容易理解本发明，在下文特别定义了某些技术和科学术语。除非在该文件中其 它位置特别定义，在本文中使用的所有其它技术和科学术语具有本发明所属领域的普通技 术人员通常理解的含义。
[0028] 如在本文所用的(包括所附权利要求），词语的单数形式诸如"一个"、"一种"和"所 述"包括其相应的复数引用，除非上下文明确地另外指出。
[0029] 当应用于动物、人、实验受试者、细胞、组织、器官或生物流体时，"施用"和"治疗" 指的是将外源性药剂、治疗剂、诊断剂或组合物与动物、人、受试者、细胞、组织、器官或生物 流体进行接触。细胞的治疗包括将试剂与所述细胞接触，以及将试剂与流体接触，所述流体 与所述细胞相互接触。"施用"和"治疗"还意为例如，通过试剂、诊断剂、结合化合物，或通过 另一种细胞对细胞进行体外和先体外后体内治疗。术语"受试者"包括任何生物体，优选动 物，更优选哺乳动物(例如大鼠、小鼠、狗、猫、兔)且最优选人。
[0030] 如本文使用的，术语"抗体"指的是展示了期望的生物学活性或结合活性的抗体的 任何形式。因此，其以最广泛含义使用且特别涵盖，但不限于单克隆抗体(包括全长单克隆 抗体）、多克隆抗体、多特异性抗体(例如，双特异性抗体）、人源化的、全人抗体、嵌合抗体和 驼化单结构域抗体。"亲本抗体"是在将抗体修饰用于预期用途之前(诸如用于人治疗的抗 体的人源化），通过将免疫系统暴露于抗原获得的抗体。
[0031] 通常，基本的抗体结构单元包括四聚体。每个四聚体包括两个相同的多肽链对，每 对具有一条"轻"链(约25 kDa)和一条"重"链(约50-70 kDa)。每条链的氨基末端部分包括 约100至110或更多个氨基酸的可变区，其主要负责抗原识别。重链的羧基末端可以定义为 恒定区，其主要负责效应器功能。通常，人轻链被分类为κ、λ轻链。此外，人重链通常被分类 为μ、δ、γ、α或ε，且将抗体的同种型分别定义为IgM、IgD、IgG、IgA和IgE。在轻链和重链中， 所述可变区和恒定区由约12或更多个氨基酸的"J"区相连，所述重链区还包括约10或更多 个氨基酸的"D"区。通常参见，Fundamental Immunology Ch. 7 (Paul, W·，ed·，2nd ed. Raven Press, Ν·Υ· (1989)〇
[0032] 每个轻链/重链对的可变区形成抗体的结合位点。因此，通常，完整的抗体具有两 个结合位点。除了双功能或双特异性抗体，所述两个结合位点通常是相同的。
[0033] 通常，重链和轻链两者的可变结构域包括三个高变区，也被称为互补决定区 (CDR)，其位于相对保守的框架区(FR)中。所述CDR通常通过框架区排列，使得能够结合特异 性表位。通常，从N-末端至C-末端，轻链和重链可变结构域均包括FRl、CDRl、FR2、CDR2、 FR3、CDR3和FR4〇通常根据Sequences of Proteins of Immunological Interest, Kabat, 等人；National Institutes of Health, Bethesda, Md. ; 5th ed. ; NIH Publ. No. 91-3242 (1991); Kabat (1978) Adv. Prot. Chem. 32:1-75; Kabat，等人，（1977)了· Biol. Chem. 252:6609-6616; Chothia,等人，（1987) J Mol. Biol. 196:901-917 或 Chothia，等人，（1989) Nature 342:878-883的定义将氨基酸分配至各个结构域。
[0034]如在本文中使用的，术语"高变区"指的是负责抗原结合的抗体的氨基酸残基。所 述高变区包括来自"互补决定区"或"⑶R"（即，轻链可变结构域中的⑶RLl、⑶RL2和⑶RL3和 重链可变结构域中的CDRH1、CDRH2和CDRH3)的氨基酸残基。参见Kabat等人（1991) Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, Md.(通过序列定义抗体CDR区 域）；还参见Chothia和Lesk (1987) J. Mol. Biol. 196: 901-917(通过结构定义抗体CDR 区域）。如本文使用的，术语"框架"或"FR"残基指的是在本文中定义为CDR残基的除高变区 残基以外的那些可变结构域残基。
[0035]如本文使用的，除非另外说明，"抗体片段"或"抗原结合片段"指的是抗体的抗原 结合片段，即保留有特异性结合由全长抗体结合的抗原的能力的抗体片段，例如，保留有一 个或多个CDR区的片段。抗体结合片段的实例包括，但不限于? &13、？&13'、？(&13'）2和?￥片段； 双体;线性抗体;单链抗体分子，例如SC-Fv;由抗体片段形成的纳米抗体和多特异性抗体。
[0036] "特异性地结合"特定靶蛋白的抗体是展示出相比于其它蛋白优先结合所述靶标 的抗体，但该特异性不需要绝对的结合特异性。如果抗体的结合对于样品中靶蛋白的存在 是决定性的（例如，不产生不期望的结果诸如假阳性），则对于意图的靶标，该抗体被认为是 "特异性的"。可用于本发明的抗体或其结合片段将以比非靶蛋白的亲和力高至少2倍，优选 地高至少10倍，更优选地高至少20倍和最优选地至少高100倍的亲和力结合靶蛋白。如本文 使用的，所述抗体特异地结合包含给定氨基酸序列的多肽，例如成熟人ro-i或人ro-Li分子 的氨基酸序列(如果其结合包含所述序列的多肽但不结合缺乏所述序列的蛋白）。
[0037] "嵌合抗体"指的是这样的抗体以及这类抗体的片段（只要所述片段展示了期望的 生物学活性），其重链和/或轻链的一部分与从特定物种(例如人)衍生的或属于特定抗体亚 类或亚型的抗体中对应序列相同或同源，而所述链的剩余部分与从另一个物种(例如小鼠） 衍生的或属于另一抗体亚类或亚型的抗体中对应序列相同或同源。
[0038] "人抗体"指的是仅包含人免疫球蛋白蛋白质序列的抗体。如果在小鼠中、小鼠细 胞中或在衍生自小鼠细胞的杂交瘤中产生，人抗体可以含有鼠的碳水化合物链。相似地， "小鼠抗体"或"大鼠抗体"指的是仅分别包括小鼠或大鼠免疫球蛋白序列的抗体。
[0039] "人源化抗体"指的是含有来自非人(例如鼠）抗体以及人抗体的序列的抗体形式。 这样的抗体含有尽可能少的衍生自非人免疫球蛋白的序列。通常，所述人源化抗体将包含 至少一种和通常两种可变结构域的基本全部，其中高变环的全部或基本全部对应于非人免 疫球蛋白的那些，且FR区的全部或基本全部是人免疫球蛋白序列的那些。所述人源化抗体 任选地还将包含免疫球蛋白恒定区(Fe)的至少一部分，其通常为人免疫球蛋白的。当需要 将人源化抗体和亲本啮齿类动物抗体区分时，将前缀"hum"、"hu"或"h"添加至抗体克隆命 名。虽然为增加亲和力，增加人源化抗体稳定性或为了其它原因可以包括某些氨基酸取代， 但啮齿类动物抗体的人源化形式将通常包含亲本啮齿类动物的相同的CDR序列。
[0040] 术语"癌症"、"癌性的"或"恶性的"指的是或描述的是在哺乳动物中通常表征为不 受调控的细胞生长的生理状况。癌症的实例包括但不限于，癌、淋巴瘤、白血病、胚细胞瘤和 肉瘤。此类癌症的更具体的实例包括鳞状细胞癌、骨