大环内酯类抗生素或其药用盐在制备抗手足口病药物中的应用
【技术领域】
[0001] 本发明属于医药新用途领域。更具体地，设及一系列大环内醋类抗生素或其药用 盐在制备抗手足口病药物中的新用途。
【背景技术】
[0002] 手足口病化and-foot-and-mouth disease，HFMD)是由肠道病毒引起的急性传染 病，主要在5岁W下儿童中发病。HFMD主要临床症状为手、足、口腔等部位斑丘疹、瘤疹，重症 患者可出现严重的神经系统疾病，甚至死亡。引发HFMD的肠道病毒有20多种（型），其中W柯 萨奇病毒A16型(CVA16)和肠道病毒71型化V71)最为常见，其它不同型的肠道病毒和柯萨奇 病毒也可致病。EV71和CAV16具有高度传染性，感染呈全球性分布，特别是在亚太地区，所引 起的手足口病已成为一种严重危害社会公众健康的疾病。由于缺乏特异、高效的抗病毒药 物，根据手足口病诊疗指南(2013年版），目前主要采取隔离和对症治疗。因此，急需抗EV71 和CVA16等肠病毒药物的研制与开发。
[0003] 新药研发时间长、研发成本高昂，从现有药物中筛选抗病毒药物则是一种快速、经 济的有效策略。我们在W前的研究中发现四环素类抗生素具有抑制EV71和CAV16复制的活 性，具有外用治疗手足口病或成为先导化合物的潜在价值。婴幼儿为手足口病的主要患者 群，由于四环素类药物容易沉积于婴幼儿的骨骼和牙齿组织中、影响骨骼正常发育，因此8 岁W下儿童禁止口服和注射使用。四环素类药物外用虽然可W降低病毒的传播，但不能有 效治疗重症手足口病。
[0004] 大环内醋抗生素是一类W-个大环内醋为母核的弱碱亲脂性化合物，按母核含碳 数的不同分为14、15和16元大环内醋类抗生素，内醋环是该类抗生素的活性基团，W巧键和 一个或多个脱氧糖基相连，糖基通常为红霉支糖和红霉脱氧糖胺。大环内醋类抗生素对多 数革兰氏阳性菌、支原体W及少数革兰氏阴性菌有较强的抑制活性，临床上常用来治疗革 兰氏阳性菌如肺炎链球菌和流感嗜血杆菌引起的呼吸道和软组织感染。大环内醋类抗生素 的抑菌机制是通过结合核糖体50S亚基、阻断成肤和核糖体在mRNA上的移位，从而选择性地 抑制细菌蛋白质的合成。
[0005] 除抗菌活性外，大环内醋类抗生素还具有抗炎和免疫调节作用，在临床治疗病毒 性呼吸道感染中表现出潜在的巨大应用价值。导致呼吸道感染的常见病毒包括鼻病毒RV、 呼吸道合胞体病毒RSV和流感病毒。运些病毒感染呼吸道后可诱导不同细胞因子的产生，包 括：化-1β，化-6，化-8，and TNF-a等，它们在病理生理进程中发挥着重要作用，呼吸道感染 的高致死率就是由于过度的炎症反应。研究表明大环内醋类抗生素不但可W降低病毒感染 呼吸道所诱导的促炎因子的产生，还可有效抑制呼吸道病毒的复制，如:通过抑制胞内流感 血凝素的蛋白水解而干扰流感病毒的复制，通过降低RV受体ICAM-1和RSV受体活化的化oA 的表达而发挥抗RV和RSV活性。
[0006] 经文献检索，除感染呼吸道的病毒外，未发现大环内醋类抗生素具有抗其它病毒 活性的报道。
【发明内容】
[0007]本发明的目的是提供一种大环内醋类抗生素或其药用盐的新用途，即抗肠病毒 EV71和柯萨奇病毒CAV16等病毒，从而用于制备治疗手足口病的药物。同时为手足口病药物 研发提供可能的作用祀位和先导化合物，为进一步对大环内醋类抗生素进行结构改造、获 得更强的抗病毒化合物提供工作基础。
[000引为达到上述目的，本发明采取的技术方案为：
[0009] 本发明设及的大环内醋类抗生素是指W-个大环内醋为母核，通过径基，W巧键 和1-3个分子的糖相联结的一类抗生物质，按其大环结构含碳母核的不同分为14、15和16元 环大环内醋类抗生素。迄今为止，已研发出Ξ代大环内醋类抗生素。进一步地，运些大环内 醋类抗生素可W与酸成盐，或者对其结构改造，生成衍生物，运些可药用盐或衍生物只要具 有抗肠病毒EV71和柯萨奇病毒CAV16等病毒的能力，也都属于本发明的保护范围。在本发明 的具体实施方案中，所述大环内醋类抗生素包括但不限于，红霉素、硬脂酸红霉素、班乙红 霉素、依托红霉素、乳糖酸红霉素、克拉霉素、地红霉素、罗红霉素、阿奇霉素、交沙霉素、麦 迪霉素、螺旋霉素、乙酷螺旋霉素、柱晶白霉素或麦白霉素等。
[0010] 本发明所述药物是W大环内醋类抗生素或其药用盐为有效成分与药学可接受的 辅料组合制成。所述药学可接受的辅料包括:淀粉、微晶纤维素、薦糖、糊精、乳糖、糖粉、葡 萄糖、氯化钢、簇甲基纤维素钢、交联聚乙締化咯烧酬、硬脂酸儀、微粉硅胶、维生素 C、半脫 氨酸、巧樣酸和亚硫酸钢、木糖醇、麦芽糖、聚乙二醇、单糖浆、乙醇、丙二醇、植物油、甘露糖 中的一种或几种。
[0011] 进一步地，所述药物可W是口服制剂、注射制剂或局部施用制剂。剂型的选择和辅 料的用量均为本领域的常规选择。为了达到更好的疗效，针对婴幼儿患者，优先采用注射制 剂。
[0012] 本发明的有益效果：
[0013] 临床数据表明婴幼儿服用大环内醋类抗生素后出现不良反应的比例很低，是一类 生物安全性好、适用于婴幼儿的抗生素。本发明W大环内醋类抗生素作为有效成分，通过实 验研究运类抗生素是否具有抑制EV71和CVA16复制、治疗手足口病的作用。结果表明本发明 所举例的六种主要大环内醋类抗生素具有体外抗EV71和CVA16的活性，尤其W螺旋霉素抗 病毒效果最为显著。M0I为0.01时，螺旋霉素抑制EV71和CVA16产毒量的EC50分别为2.74μΜ 和5.19μΜ;阿霉素和交沙霉素抑制产毒的效果次之，抑制EV7巧日CVA16的EC50分别为11.9μΜ 和44.5μΜ、17.5μΜ和54.3μΜ。进一步的作用机制研究表明，螺旋霉素通过抑制病毒蛋白的合 成而发挥抗肠病毒作用，其作用祀位与EV715'UTR的翻译功能相关。大环内醋类抗生素的临 床副反应少、毒性低、安全性高，临床表明是一类安全的儿童抗细菌感染用药，是β-内酷胺 类抗生素过敏的儿童患者的首选用药选择。鉴于手足口病患者群主要为婴幼儿，因此，大环 内醋类抗生素，尤其是螺旋霉素和交沙霉素，具有开发为治疗手足口病的药物或先导化合 物的潜在应用价值。
【附图说明】
[0014] 图1流式分析螺旋霉素、阿奇霉素和交沙霉素对EV71-GFP所携带报告基因 GFP表达 的影响及抗病毒活性。将EV71-GFP按M0I = 1P即/cell感染Vero细胞后，去除感染液，加入含 有不同浓度的(A)螺旋霉素、（B)阿奇霉素或交沙霉素的培养基。37°C培养18-2化后用流式 细胞仪分析细胞的GFP巧光表达情况，W未加药物的GFP阳性细胞率作为100%，计算经药物 处理后的细胞GFP相对阳性率，数值为Ξ次重复实验的平均值±SD。流式图为Ξ次独立重复 实验中的一次。
[0015] 图2通过产毒量减少（virus titer reduction assay)分析螺旋霉素、阿奇霉素和 交沙霉素的抗病毒活性。将EV71-MZ201405和CVA16-MZ201509(M0I = 0.01P即/cell)分别与 RD细胞解育化后去除病毒上清，添加含有不同浓度螺旋霉素、阿奇霉素和交沙霉素的培养 基，药物浓度呈倍比稀释；W未加药物的感染细胞为对照。感染后4她后收集上清，采用空斑 法测定病毒滴度。将对照细胞上清测得的病毒滴度设定为100%，经药物处理的细胞上清中 的相对病毒滴度（％) =(对照组病毒滴度-药物处理组病毒滴度）/对照组病毒滴度X 100%。每种药物浓度下的相对病毒滴度百分比为Ξ次重复实验的平均值±SD。
[0016] 图3螺旋霉素加入时间对产度量的影响。将EV71-MZ感染RD细胞(M0I = 5)，分别在 感染前化(-化)及感染后化、化、化、地、化及化加入100μΜ螺旋霉素，未加药物的感染细胞为 对照，于感染后lOh收集上清并通过空斑法测定病毒滴度，将对照组上清的病毒滴度设定为 100%，计算药物处理组的相对产毒量。每种加药时间下的相对病毒量百分比为Ξ次重复实 验的平均值±SD。
[0017] 图4螺旋霉素对