苯丁酸联合三唑类抗真菌药物的应用及其产品的制作方法
【技术领域】
[0001] 本发明设及医药技术领域，具体设及苯下酸联合=挫类抗真菌药物的应用及其产 品。
【背景技术】
[0002] 随着获得性免疫缺陷综合征患者的增多W及广谱抗菌药物的广泛应用，器官移植 技术和导管技术等医疗技术的开展，侵袭性真菌感染的发病率和病死率也在逐年上升，侵 袭性念珠菌的发病率和致死率到达40%，在医院获得性血流感染中占据第四位。其中，白色 念珠菌(Candida a化icans，CA)是临床真菌感染中常见的分离菌，通常用挫类抗真菌药氣 康挫氣康挫（FluconazoIe,FLC)、伏立康挫（Voriconazole，VRC)、伊曲康挫（Itraconazole， ITC)治疗。FLC作为安全、有效、价廉的挫类抗真菌药物，临床应用非常广泛，使得真菌的耐 药率不断增加，真菌感染的治疗越来越困难。新药研究与联合用药研究均是解决真菌耐药 的途径。其中，联合用药其前期投入少、效果显著，受到国内外的关注。联合用药研究包括两 种抗真菌药联合及非抗真菌药与抗真菌药联合，由于抗真菌药物品种有限，新的抗真菌作 用价格昂贵且副作用明显，使得非抗真菌药物与抗真菌药物的联合应用研究备受关注。因 此，选择非抗真菌药物与化C的联用成为近年来研究的热点。
[0003] 组蛋白去乙酷化酶抑制剂具有多种药理作用，其研究目前备受关注。组蛋白去乙 酷化酶抑制剂按照其结构分为四类:脂肪酸，如丙戊酸，临床用作抗癒痛药物;氧目亏酸盐，曲 古抑菌素A;环肤，如天然产物缩酪酸肤FK-228、制晒菌素和环氧朽酸;苯酷胺类，如MS-275、 MGCD0103。各类组蛋白去乙酷化酶抑制剂来源不同，结构相差较大，药理作用不同。其中，曲 古抑菌素A来源于链霉菌属的抗生素，是一种有效的、非竞争性可逆的组蛋白去乙酷化酶抑 制剂，用于抗肿瘤研究；制晒菌素是镶刀菌代谢产物，属环四肤类分子，具有广谱抗顶复亚 口原虫和广谱抗肿瘤作用；下酸钢广泛用于畜禽饲料添加剂。Smith,W丄.，and Edlind, T.D.2002.Histone deacetylase inhibitors enhance Candida albicans sensitivity to azoles and related antifungals:correlation with reduction in CDR and ERG upregulation.Antimicrob Agents Qiemother 46(11) :3532-3539.,公开了组蛋白去乙酷 化酶抑制剂（曲古抑菌素A、制晒菌素与下酸钢)与挫类联用(氣康挫、伊曲康挫和咪康挫)合 用，可增强抗敏感白色念珠菌的作用。
[0004] 苯下酸(Pheny化Utyric acid,PBA)的钢盐苯下酸钢，是一种I和IIa组蛋白去乙酷 化酶抑制剂，属于含有苯环的脂肪酸盐，已被FDA批准用于治疗所有新生儿酶缺乏（出生后 28d内表现为完全酶缺乏的）、有高血氨性脑病家族史的迟发性酶缺乏（出生的第一个月后 表现为部分酶缺乏）的患者。可辅助治疗因氨基甲酯憐酸合成酶(CPS)、鸟氨酸氨甲酯基转 移酶(OTC)或精氨基班巧酸合成酶(AS)缺乏而致的慢性尿素循环素乱导致的高氨血症。关 于其抗肿瘤研究是现在研究的热点，脑肿瘤研究处于II期临床试验中，苯下酸钢还被用于 探索在卵巢癌，膜岛素抵抗，囊性纤维化及枫糖浆尿病治疗中的作用。
[0005] 苯下酸钢是前体药物，在体内可迅速代谢成苯乙酸盐，苯乙酸盐是相对无毒的抗 肿瘤药物。目前的研究多集中在其作为一种组蛋白去乙酷化抑制剂诱导癌细胞调亡、抑制 癌细胞增殖等方面。另外研究表明，苯下酸(Pheny化Utyric acid,PBA)具有抗革兰氏阳性 菌和阴性菌作用，对于其是否具有抗真菌作用，尚无报道。
[0006] 虽然已有研究表明曲古抑菌素A、制晒菌素和下酸钢可增强抗敏感白色念珠菌的 作用，但由于不同的组蛋白去乙酷化酶抑制剂药理作用相差较大，且尚无抗真菌耐药研究 报道，因此，从上述文献中不能推断出苯下酸是否能逆转挫类抗真菌药对耐药白色念珠菌 的敏感性。
【发明内容】
[0007] 本发明的目的就是为了克服目前真菌感染和=挫类抗真菌药物耐药率增加问题， 提供一种苯下酸联合=挫类抗真菌药物的应用及其产品。
[0008] 为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案：
[0009] 苯下酸联合=挫类抗真菌药物在制备抗真菌产品中的应用，所述产品为药品。
[0010] 所述应用为苯下酸联合氣康挫、伊曲康挫或伏立康挫中的两种或=种在制备抗真 菌产品中的应用。
[0011] 优选:所述应用为苯下酸联合氣康挫、伊曲康挫或伏立康挫在制备抗真菌产品中 的应用。
[0012] 优选:所述真菌为白色念珠菌。
[0013] 优选:联合应用时苯下酸与氣康挫的最低抑菌浓度为:3化g/ml与化g/ml;
[0014] 联合应用时苯下酸与伊曲康挫的最低抑菌浓度为:3化g/ml与0.12化g/ml;
[0015] 联合应用时苯下酸与伏立康挫的最低抑菌浓度为：1化g/ml与0.25iig/ml。
[0016] 结果表明，大于32μg/ml的苯下酸与大于化g/ml的氣康挫联合应用或者大于32蛇/ ml的苯下酸与大于0.12扣g/ml的伊曲康挫联合应用或者大于16iig/ml的苯下酸与大于0.25 μg/ml的伏立康挫联合应用均有强的协同抗耐药白色念珠菌作用。
[0017] -种抗真菌产品，W苯下酸联合氣康挫、伊曲康挫或伏立康挫为主要活性成分，所 述苯下酸与氣康挫联合时的有效浓度配比为氣康挫：苯下酸= 1:32,所述苯下酸与伊曲康 挫联合时的有效浓度配比为伊曲康挫：苯下酸=1:256，所述苯下酸与伏立康挫联合时的有 效浓度配比为伏立康挫：苯下酸=1:64;苯下酸与氣康挫联合时的最低抑菌浓度为:3化g/ ml与化g/ml，苯下酸与伊曲康挫联合时的最低抑菌浓度为：3化g/ml与0.12化g/ml，苯下酸 与伏立康挫联合时的最低抑菌浓度为16iig/ml与0.25iig/ml。
[0018] 本研究系统评价了苯下酸与=挫类抗真菌药物的联合抗真菌作用，受试菌株是耐 药白色念珠菌，测定方法采用微量稀释法与动态杀菌曲线法，其微量稀释法测得的结果W 基于两种理论即Loewe additivity (LA)理论与BI理论的最低抑菌浓度分数法(FICI)与生 长率差值法（AE)进行评价。由此可见，研究苯下酸联合=挫类抗真菌药物对耐药白色念珠 菌的作用，不仅具有创新性，且经过多种方法的系统评价，能够明确二者联合在抗真菌耐药 中的作用，W期发现对抗耐药真菌感染的方法与手段，并且PBA是重要的药物合成中间体， 来源广泛，价格低廉，若有抗真菌作用，将具有重要的意义。且苯下酸单用具有抗念珠菌作 用。
[0019] 本发明采用耐药白色念珠菌细胞进行研究，利用棋盘肉汤微量稀释法，分别评价 不同联合用药组合的联合抗真菌作用。具体内容如下：
[0020] A:苯下酸与S挫类抗真菌药物联合抗耐药CA作用:采用棋盘肉汤微量稀释法测定 联合用药时最低有效浓度，WFICI法选择最佳药物组合浓度及评价药物联合用药的作用。 此外，为更直观地表现联合用药对耐药CA作用的程度，将联合药敏测定数据用生长百分数 差值模型（AE)进行了进一步分析。
[0021] B:苯下酸现在越来越多的用于临床研究，如果能在抗真菌方面发挥作用，特别是 对耐药真菌感染的治疗，意义重大。本研究表明，苯下酸联合应用=挫类抗真菌药物可产生 协同抗耐药CA作用，可扩大其应用范围，具有良好的应用前景。
[0022] 总之，本发明包含苯下酸与S挫类抗真菌药物联合应用产生协同抗耐药CA的作 用。上述发现为临床联合用药作为治疗耐药真菌感染的方案提供了思路。
[0023] 发明人从文献阅读中发现，苯下酸具有抗革兰氏阳性菌和阴性菌的作用，发明人 通过实验研究发现苯下酸也具有抗真菌的作用，特别是与=挫类抗真菌药物联用时具有明 显的协同抗真菌作用。苯下酸与S挫类抗真菌药物联合应用在体外均具有协同抗耐药CA作 用，且效果明显。低剂量的苯下酸可使氣康挫对耐药CA的MIC值从51化g/ml W上降至Iiig/ ml，使伊曲康挫对耐药CA的MIC值从祉g/ml降到0.12扣g/ml，使伏立康挫的MIC值从祉g/ml 降到0.25μg/ml，因此，苯下酸除具有抗革兰氏阳性菌和阴性菌作用，还能对增强S挫类抗 真菌药物对真菌细胞的抗菌作用、使其在抗感染领域有新的用途。
[0024] 本发明与现有技术相比，具有W下优点与效果：
[0025] 1.本发明表明，苯下酸与=挫类抗真菌药物联合应用时，可W增强=挫类抗真菌 药物对耐药CA的抗菌活性，可W产生协同抗真菌作用，并能够逆转耐药CA对氣康挫的耐药 性，为新药的开发及老药新用提供了研究方向。对化CJTC、VRC共同耐药的CA(MIC含51化g/ ml )，联合用药可使其最低抑菌浓度明显降低，32iig/ml的PBA与化g/ml的FLC合用，3化g/ml 的PBA与0.12扣g/ml的ITC合用，及16iig/ml的PBA与0.25iig/ml的VRC联合应用，均可W杀灭 80 % W上的真菌，浓度再增大，效果更强。
[0026] 2.苯下酸在临床上的广泛应用，苯下酸对=挫类抗真菌药物的抗真菌的增效作 用，可扩大其应用范围，并且降低化C、ITC、VRC的最低有效抑菌浓度，降低抗真菌药物的用 药量，从而降低药物的不良反应的发生，克服临床上真菌耐药问题。
[0027] 3.真菌耐药机制及其复杂，尚有许多机制仍不是很清楚，如能将苯下酸对=挫类 抗真菌药物的增敏机制研究透彻，必定能为克服真菌耐药问题提供新的思路。
【附图说明】
[00%]图1为A E法评价氣康挫联合苯下酸应用协同抗耐药白色念珠菌作用结果的=维 图;FLC:氣康挫，PBA:苯下酸，X轴代表化C的浓度，Y轴代表苯下酸的浓度，Z轴代表的是各个 药物组合下的AE值，高于或低于平面（AE = O)的值分别表示协同或括抗作用，平面周围的 值表示无关作用，图