一种羊胚胎活细胞冻干制剂的制备方法及其应用
【专利说明】
[0001 ](一)
技术领域
本发明涉及营养保健品及生物制药领域，特别涉及一种羊胚胎活细胞冻干制剂的制备方法及其应用。
[0002](二)
【背景技术】
羊胎素包括羊胎盘素和羊胚胎素，羊胚胎素和羊胎盘素是两个很容易混淆的概念，两者有本质的不同。胎盘素是声明传递过程中的废弃物，而胚胎素则是生命生长最显活力的因子。从胚胎中提取的活性物质要比从胎盘中提取物质困难的多，也珍贵得多，活性物质的成分也大不相同。
[0003]羊胚胎素能调节人体内分泌，全面有效的改善人体皮肤状况，有美容养颜，美白肌肤，增强皮肤弹性、祛黑斑，防止皱纹、妊娠纹及延缓衰老，可防止女性不孕症，流产，早产；调节平衡荷尔蒙，增加血液制造，改善贫血、气虚，增强细胞活力，加速产后恢复，帮助产妇泌乳;提高人体免疫机能，推迟女性更年期，缓解更年期综合症病症等众多功效。
[0004]1931年，瑞士保罗尼翰医生(Dr.Paul Niehans)首次将从小羊胚胎中提取的一种鲜活细胞注射到一名甲状旁腺受损的临危病人体内，并成功挽救了其生命，后来这位病人于1962年仙逝，享年89岁，这就是羊胚胎素细胞活化疗法的最初起源，它的发现对人类在抗衰老领域的医学发展有着里程碑式的意义。及至今日，瑞士羊胚胎素的制取技术仍是瑞士的国家机密，瑞士是世界上唯一掌握羊胎素精炼提纯技术的国家，唯一持有正式的羊胎素注射许可，可以进行羊胎素抗衰老治疗的国家。注射的活性细胞经血液吸收，并最终作用于人体的免疫系统来产生作用。
[0005](三)
【发明内容】
本发明为了弥补现有技术的不足，提供了一种步骤简单、产品纯度高的羊胚胎活细胞冻干制剂的制备方法及其应用。
[0006]本发明是通过如下技术方案实现的:
一种羊胚胎活细胞冻干制剂的制备方法，以3个月龄的小羊胚胎为处理对象，包括如下步骤:
(1)将小羊胚胎用无菌水洗净，然后采用质量分数为75%的酒精进行表面消毒，于无菌操作台中切取肝脏、胰腺、肾脏、心脏、十二指肠、胸腺和脾脏各器官，用手术剪将其剪碎，分别收集；
(2)分别先后采用胰蛋白酶和胶原蛋白酶溶液将切碎的各器官组织酶解，以破坏细胞间蛋白联接，过滤得到相应的细胞悬液；
(3)将各种细胞悬液分别置于离心管中离心，得到各类细胞沉淀团块，重复操作2次；
(4)用质量分数为10%的海藻糖等渗溶液缓慢捶打细胞沉淀团块，使细胞悬浮，保温1min;
(5)将各类细胞悬液分别加入容器内，于-70°C冰箱内急速冷冻；
(6)将容器移入冻干装置，冻干一个冻干周期，使细胞脱水；
(7)将含有冻干细胞的容器在2-8°C下储存，得到可在蒸馏水中恢复原含水状态的产品O
[0007]本发明以新鲜的羊胚胎为原料，经生物技术提取胚胎活细胞，经冻干，最后制成具有生物活性的羊胚胎活细胞冻干制剂;得到的胚胎活细胞可以最大程度的保持羊胚胎素本应具备的各种营养成分与活性，使其发挥最大功效。
[0008]其优选的技术特征为:
步骤(2)中，各器官组织先用0.05g/L的胰蛋白酶溶液酶解lOmin，然后用lg/L的胶原蛋白酶酶解lOmin。
[0009]步骤(3)中，离心环境为4°C，离心力为50g，时间为15min。
[0010]步骤(6)中，一个冻干周期为15天，细胞冻干后的含水量为30%。
[0011]本发明所述的羊胚胎活细胞冻干制剂的应用，用于制备羊胚胎素胶囊、羊胚胎素口服制剂或羊胚胎素冻干粉，产品采用口服的方法，使羊胚胎素以最安全的形式作用于人体，有效增强细胞分裂的速度，改善老化细胞的再生功能，使人体衰老的进程得到有效地控制和缓解，机体重新焕发活力。
[0012]本发明选用新鲜羊胚胎，经过制备细胞悬液、分离提纯细胞、细胞冻干的方法，得到纯化的各部位活细胞冻干制剂，该活细胞冻干制剂可以最大限度的保持羊胚胎素的全部营养成分与活性成分。
[0013]本发明步骤简单，操作方便，设计合理，得到的产品质量高，可最大程度的保持其营养成分和活性，功效较大，适于广泛推广应用。
[0014](四)【具体实施方式】实施例:
(1)选择身体健壮，发情周期正常的母羊作为代孕羊，所有羊经检疫、防疫、药浴等处理后进行人工受孕；
(2)待胎羊长至约3个月，手术法取出胎羊，使用无菌水清洗干净，75%的酒精进行表面消毒；
(3)无菌条件下，切取胚胎的胸腺、肝脏等各器官，生理盐水清洗，75%酒精浸泡5min灭菌，最后用生理盐水冲洗干净，用无菌手术剪刀于无菌操作台中，将各器官剪碎置于平皿中，分别收集；
(4)首先使用0.05g/L的胰蛋白酶消化1min，然后使用lg/L的胶原酶消化1min;
(5)将各类细胞悬液分别置于湖南恒诺5-5R低速冷冻离心机中，4°(3，100印111离心15分钟，重复操作2次，得到细胞沉淀团块；
(6)弃去上清，用10%的海藻糖等渗溶液缓慢吹打细胞，使细胞悬浮，保温1min;
(7)将细胞悬液分别加入容器内，在_70°C冰箱内急速冷冻30min;
(8)将容器移入冻干装置，冻干一个冻干周期，使含水量为30%，一个冻干周期为15天；
(9)将含有冻干细胞的容器储存于2-8°C的冷冻温度下，以备之后在蒸馏水中恢复原含水状态。
【主权项】
1.一种羊胚胎活细胞冻干制剂的制备方法，以3个月龄的小羊胚胎为处理对象，其特征为，包括如下步骤:(I)将小羊胚胎用无菌水洗净，然后采用质量分数为75%的酒精进行表面消毒，于无菌操作台中切取肝脏、胰腺、肾脏、心脏、十二指肠、胸腺和脾脏各器官，用手术剪将其剪碎，分别收集;(2)分别先后采用胰蛋白酶和胶原蛋白酶溶液将切碎的各器官组织酶解，以破坏细胞间蛋白联接，过滤得到不同种类的细胞悬液；(3)将各种细胞悬液分别置于离心管中离心，得到各类细胞沉淀团块，重复操作2次；(4)用质量分数为10%的海藻糖等渗溶液缓慢捶打细胞沉淀团块，使细胞悬浮，保温1min; (5)将细胞悬液分别加入容器内，于_70°C冰箱内急速冷冻；(6)将容器移入冻干装置，冻干一个冻干周期；(7)将含有冻干细胞的容器在2-8°C下储存，得到可在蒸馏水中恢复原含水状态的产品。2.根据权利要求1所述的羊胚胎活细胞冻干制剂的制备方法，其特征在于:步骤(2)中，肝脏组织先用0.05g/L的胰蛋白酶溶液酶解lOmin，然后用lg/L的胶原蛋白酶酶解lOmin。3.根据权利要求1所述的羊胚胎活细胞冻干制剂的制备方法，其特征在于:步骤(3)中，离心环境为4°C，离心力为50g，时间为15min。4.根据权利要求1所述的羊胚胎活细胞冻干制剂的制备方法，其特征在于:步骤(6)中，一个冻干周期为15天，细胞冻干后的含水量为30%。5.根据权利要求1所述的羊胚胎活细胞冻干制剂的应用，其特征在于:用于制备羊胚胎素胶囊、羊胚胎素口服制剂或羊胚胎素冻干粉。
【专利摘要】本发明涉及营养保健品及生物制药领域，特别公开了一种羊胚胎活细胞冻干制剂的制备方法及其应用。本发明选用新鲜羊胚胎，经过制备细胞悬液、分离提纯细胞、细胞冻干的方法，得到纯化的各部位活细胞冻干制剂，该活细胞冻干制剂可以最大限度的保持羊胚胎素的全部营养成分与活性成分。本发明步骤简单，操作方便，设计合理，得到的产品质量高，可最大程度的保持其营养成分和活性，功效较大，适于广泛推广应用。
【IPC分类】A61K35/54, A61K9/19, A61P3/02, A23L33/00, A61K35/50
【公开号】CN105497070
【申请号】CN201510995069
【发明人】彭继先
【申请人】山东润泽制药有限公司
【公开日】2016年4月20日
【申请日】2015年12月28日