一种伪狂犬病病毒疫苗耐热冻干保护剂及其制备方法
【技术领域】
[0001] 本发明设及疫苗助剂领域，具体设及一种伪狂犬病病毒疫苗耐热冻干保护剂及其 制备方法。
【背景技术】
[0002] 本发明所设及重组伪狂犬病毒，保藏于中国典型培养物培养中屯、、保藏号为： CCTCC-V201408,可用于制备猪伪狂犬病防治用疫苗。
[0003] 目前，在我国兽用生物制品中，活的冻干疫苗占相当大的比例，国内常用的保护剂 主要为牛奶、薦糖、明胶等，组方简单，保护功能差。如果在2°C~8°C条件下，保存期只有4 ~6月，多需要在-15°CW下保存。加上国内传统的兽用生物制品保护剂的研制相对滞后，使 成品的长期保存和运输受限。所W，耐热冻干保护剂的研究是非常急需的，在20世纪80年 代，发达国家就已开始进行耐热冻干保护剂的研究。我国在耐热冻干保护剂方面的研究起 步较晚，加上中国市场巨大，国外生物制品涌入，市场竞争加剧。为了本国生物制品业的生 存和发展，新型有效的耐热冻干保护剂的研究和应用显得尤为迫切。
[0004] 中国专利申请201310553466.X公开了一种动物活疫苗耐热冻干保护剂，各成分含 量为：乳糖80-200g/L、水解乳白蛋白10-40g/L、聚乙締化咯烧酬5-20g/L、甘露醇0-2〇g/L、谷氨酸钢5-20g/L、精氨酸盐酸盐5-15g/L、水解蚕丝蛋白10-30g/L，制得的疫苗安 全无菌、质量稳定，具有耐热、保存时间长的特点，解决了疫苗在运输过程中需要低溫冷冻、 胆存不便等问题。但该保护剂在36°C溫度下保存时间不长。
[000引因此，有必要提供一种在较高溫度和低溫下保存时间长，病毒损失率低，耐老化程 度高的耐热冻干保护剂。
【发明内容】
[0006] 本发明的目的在于提供一种外观良好，病毒损失率低，耐老化程度高，保存期长的 重组伪狂犬病病毒疫苗耐热冻干保护剂，相应地，本发明还提供该耐热冻干保护剂的制备 方法。
[0007] 为解决上述问题，本发明所采用的技术方案如下：一种伪狂犬病病毒疫苗耐热冻 干保护剂，所述保护剂包括W下重量百分数的组分:水解明胶2-6%、乳糖0.2-4%、薦糖2-5%、植物多糖0.1-0.5%、山梨醇l-3%、k谷氨酸1-1.5%组氨酸0.1-1 %、维生素C 0.2-0.5%、维生素E 0.1-0.3%、无水憐酸二氨钟1-2%、叔下醇0.5-1%和人血清白蛋白0.1-1 %， 余量为注射用水。
[000引优选地，所述保护剂包括W下重量百分数的组分:水解明胶2%、乳糖0.2%、薦糖 2%、植物多糖0.1%、山梨醇i%a-谷氨酸1 % a-组氨酸0.1 %、维生素C 0.2%、维生素E 0.1%、无水憐酸二氨钟1%、叔下醇0.5%和人血清白蛋白0.1 %，余量为注射用水。
[0009]优选地，所述保护剂包括W下重量百分数的组分：水解明胶6%、乳糖4%、薦糖 5%、植物多糖0.3%、山梨醇3%a-谷氨酸1.5% a-组氨酸1 %、维生素C 0.5%、维生素E 0.3%、无水憐酸二氨钟2%、叔下醇1%和人血清白蛋白I %，余量为注射用水。
[0010] 优选地，所述保护剂包括W下重量百分数的组分：水解明胶4%、乳糖2%、薦糖 3.5 %、植物多糖0.5%、山梨醇2%、k谷氨酸1.5 %、k组氨酸0.5 %、维生素C 0.4%、维生素E 0.2%、无水憐酸二氨钟1.5%、叔下醇0.8%和人血清白蛋白0.5%，余量为注射用水。
[0011] 优选地，所述伪狂犬病病毒为重组伪狂犬病病毒，所述重组伪狂犬病病毒保藏于 中国典型培养物培养中屯、，保藏号为:CCTCC-V201408。
[0012] 优选地，所述植物多糖由黄巧多糖和香茹多糖按(1-1.5):(0.5-1)的重量比组成。
[0013] 优选地，所述保护剂还包括W下重量百分数的组分:天冬氨酸0.5-1%。
[0014] 相应地，本发明还提供了一种所述伪狂犬病病毒疫苗耐热冻干保护剂的制备方 法，包括如下步骤： а. 取水解明胶、乳糖、薦糖、植物多糖、山梨醇、无水憐酸二氨钟和叔下醇溶于部分注射 用水中，该部分的注射用水占注射用水总量的2/5-4/5,然后在115-125°C的溫度下进行灭 菌处理15-25min，得到溶液A; б. 取心谷氨酸组氨酸、维生素C、维生素EW及人血清白蛋溶于剩余部分的注射用水 中，用孔径为0.15-0.20WI1的滤膜过滤除菌，得到溶液B; C.将a步骤得到的溶液A与b步骤得到的溶液B按1:1的体积比混合，即得产品。
[0015] 优选地，在所述b步骤中加入天冬氨酸。
[0016] 优选地，所述a步骤中，在115°C的溫度下进行灭菌处理15min，所述b步骤中，滤膜 孔径为0.20皿。
[0017] 与现有技术相比，本发明具有如下优点： (1)本发明耐热冻干保护剂能够使疫苗在2-8°C下保存期由原来的1年提高到2年， 保存时间显著延长。
[0018] (2)本发明耐热冻干保护剂保护的冻干产品（疫苗），耐热后病毒含量仅下降约 0.1-0.2个滴度，现有的耐热冻干保护剂下降0.8个滴度。
[0019] 下面结合【具体实施方式】对本发明进行详细说明。
【具体实施方式】
[0020] 本发明部分组分的厂家和货号等信息如下：
实施例1 一种重组伪狂犬病毒疫苗耐热冻干保护剂 所述保护剂包括W下重量百分数的组分:水解明胶2%、乳糖0.2%、薦糖2%、植物多糖 0.1%、山梨醇l%、k谷氨酸1%组氨酸0.1%、维生素C 0.2%、维生素E 0.1%、无水憐酸二 氨钟1%、叔下醇0.5%和人血清白蛋白0.1 %，余量为注射用水，其中，所述植物多糖由黄巧多 糖0.05%和香茹多糖0.05%组成。
[0021 ]制备方法： а. 取水解明胶、乳糖、黄巧多糖、香茹多糖、薦糖、山梨醇、无水憐酸二氨钟和叔下醇溶 于部分注射用水中，该部分的注射用水占注射用水总量的2/5,然后在115°C的溫度下进行 灭菌处理15min，得到溶液A; б. 取心谷氨酸组氨酸、维生素C、维生素EW及人血清白蛋溶于剩余部分的注射用水 中，用孔径为0.20WI1的滤膜过滤除菌，得到溶液B; C.将a步骤得到的溶液A与b步骤得到的溶液B按1:1的体积比混合，即得产品。 实施例2 -种重组伪狂犬病毒疫苗耐热冻干保护剂 所述保护剂包括W下重量百分数的组分:水解明胶6%、乳糖4%、薦糖5%、植物多糖 0.3%、山梨醇3%a-谷氨酸1.5%a-组氨酸1 %、天冬氨酸0.6%、维生素C 0.5%、维生素 EO.3%、无水憐酸二氨钟2%、叔下醇1%和人血清白蛋白1%，余量为注射用水，其中，所述植物 多糖由黄巧多糖0.2%和香茹多糖0.1%组成。
[002引制备方法： а. 取水解明胶、乳糖、黄巧多糖、香茹多糖、薦糖、山梨醇、无水憐酸二氨钟和叔下醇溶 于部分注射用水中，该部分的注射用水占注射水总量的3/5,然后在115°C的溫度下进行灭 菌处理15min，得到溶液A; б. 取心谷氨酸组氨酸、天冬氨酸、维生素C、维生素EW及人血清白蛋溶于剩余部分 的注射用水中，用孔径为0.20WI1的滤膜过滤除菌，得到溶液B; C.将a步骤得到的溶液A与b步骤得到的溶液B按1:1的体积比混合，即得产品。
[0023] 实施例3-种重组伪狂犬病毒疫苗耐热冻干保护剂 所述保护剂包括W下重量百分数的组分:水解明胶4%、乳糖2%、薦糖3.5%、植物多糖 0.5%、山梨醇2%、1^-谷氨酸1.5 % a-组氨酸0.5 %、天冬氨酸1%、维生素C 0.4%、维生素E 0.2%、无水憐酸二氨钟1.5%、叔下醇0.8%和人血清白蛋白0.5 %，余量为注射用水，其中，所 述植物多糖由黄巧多糖0.3%和香茹多糖0.2%组成。
[0024] 制备方法如实施例2。
[0025] 对比例1 一种重组伪狂犬病毒疫苗耐热冻干保护剂 所述植物多糖为黄巧多糖，其余成分如实施例2。
[0026] 制备方法参考实施例2。
[0027] 对比例2-种重组伪狂犬病毒疫苗耐热冻干保护剂 所述植物多糖由黄巧多糖0.1%和香茹多糖0.2%组成。
[002引制备方法参考实施例2。
[0029] 对比例3-种重组伪狂犬病毒疫苗耐热冻干保护剂 所述保护剂包括W下重量百分数的组分:水解明胶6%、乳糖4%、薦糖5%、植物多糖 0.3%、山梨醇3%、k谷氨酸1.5%组氨酸1 %、天冬氨酸0.6%、维生素EO. 3%、无水憐酸二氨 钟2%、叔下醇1%、人血清白蛋白1 %，余量为注射用水，其中，所述植物多糖由黄巧多糖0.2% 和香茹多糖0.1%组成。
[0030] 制备方法参考实施例2。
[0031 ]性能测试 1.制苗用毒液的制备 1.1材料 1.1.1病毒和细胞 重组伪狂犬病病毒巧RV-0RF2为发明人自主构建与保存，该重组伪狂犬病病毒保藏在 中国典型培养物培养中屯、、保藏号为：CCTCC-V201408 ;该重组伪狂犬病病毒可有效表达 PCV2的0RF2基因，可用于制备PCV2-PRV二联基因工程疫苗。ST细胞购自中国兽药监察所。
[00创 1.1.2血清、培养基和膜蛋白酶类试剂 胎牛血清、DMEM培养基购自Gibco公司，膜蛋白酶为Sigma公司产品。氯化钢、氯化钟、 葡萄糖、Na肥03、抓TA为分析纯试剂。
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