稳定的抗体组合物的制作方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于抗体组合物领域，具体地讲可用作用于治疗或诊断用途的药物制剂的 组合物。
【背景技术】
[0002] 近年来，基于抗体的治疗因为对多种疾病诸如癌症和自身免疫性疾病的有效治疗 方案，结合抗体工程和生产技术的许多新发展而走到前沿。
[0003] 与抗体制剂和输送相关联的主要挑战之一是维持抗体治疗的稳定性和形式，尤其 是对于长期储存和运输而言。抗体，与其它类型的基于蛋白质的治疗相同，容易受到应力条 件下物理和化学不稳定性的影响，应力条件诸如来自冻融或运输期间的温度变化、暴露于 光、氧气或化学品/溶剂、剪切应力和PH应力。
[0004] 它们可经历变性(例如，丧失三级和/或二级结构)或相互作用以形成聚集体。虽然 抗体聚集体可以液体和固体状态出现，但其在液体制剂中，尤其是在高浓度抗体下尤其是 有问题的。抗体在相对高剂量下通常是治疗有效的。因此在药物制剂中通常期望高抗体浓 度，以使剂量体积最小化并使给药更患者友好(例如，皮下注射而不是静脉滴注、减少注射 次数)。
[0005] 实际上，聚集可导致活性抗体治疗失效，从而导致不可靠和无效的给药。更重要的 是，聚集还可表现出毒性并触发不可取或严重的免疫反应。导致阻碍流动的大颗粒沉积的 聚集对于任一种胃肠外应用均是不可取的。
[0006] 经由化学途径(诸如氧化、脱酰胺、异构化、二硫键形成和其它不可逆交联反应)的 抗体改性和降解还可随时间推移进行并导致抗体失活，以及触发聚集。这些反应，连同聚 集，常常在升高的温度下加快；因此冷藏几乎经常是必要条件。在许多这些化学反应中，水 也诸如在酰胺键的水解裂解中起到重要作用，如作为中介物或作为反应中间体。因此，诸如 通过冻干或冷冻干燥排除水以形成固态粉末制剂可以是针对制备抗体治疗的稳定制剂的 有效措施。
[0007] 市售的治疗性抗体或抗体衍生物/片段的制剂中的一些基于冻干粉末制剂，所述 制剂需要由受过训练的医疗或医护专业人员在即将给药之前在无菌条件下用水性介质重 组。例如，奥马佐单抗(例如Xolair?.，由Genentech出售)可作为在一次性使用小瓶中的冻干 粉末获得。
[0008] 然而，在实际给药之前，作为额外步骤的冻干抗体在无菌水性介质中的重组携带 了不正确的处理(例如，振摇)或给药以及污染的风险。如果水性介质的PH和温度未达最佳 标准，允许再水合的时间太短或在溶解步骤期间过于剧烈地振摇小瓶，则重组步骤本身可 触发聚集。浪费的趋势也更高，因为不能在推荐时间阶段内适当溶解冻干抗体产品常常需 要丢弃样品。
[0009] 应当注意，冻干工艺步骤本身可引发聚集和/或降解。常常将附加的稳定赋形剂诸 如糖类或多元醇连同其它赋形剂诸如填充剂一起加入预冻干组合物中。也可要求在冻干之 后添加其它赋形剂以便支持较长的抗体储存寿命，从而增加最终制剂中的组分数。
[0010] 由于对于给药而言容易制备，所以即用型液体制剂通常是使用者优选的。如果稳 定，则液体制剂对于药品制造商而言也具有吸引力，这是由于避免了冻干，所述冻干在药物 开发和常规制造两者期间均是费时且昂贵的。实际上，抗体或抗体衍生物的许多市售制剂 是基于水的溶液。在含水制剂的情况下，鉴于促进或降低各种降解化学反应的可能性，介质 的pH可对抗体的稳定性具有显著影响。因此，常常需要优化的缓冲体系连同其它制剂赋形 剂，诸如抗氧化剂自由基清除剂、表面活性剂和其它抗聚集添加剂、或防腐剂以便向抗体提 供稳定性并抵消可在含水环境中储存期间随时间推移而出现的各种可能的降解过程。
[0011] 还已知对冻干和水溶液的可供选择的制剂选项，诸如使用非水性液体作为载体。 例如，W02012/121754描述了非水性高浓度悬浮液制剂，其包含疏水性载体诸如芝麻油，和 降粘剂诸如油酸乙酯，以及抗-TNFa抗体。这些组合物要求添加完全混溶于载体中的降粘 剂，以便使油载体更适用于注射。通常，脂质和油的肠胃外使用可在注射部位处造成疼痛和 其它不可取的副作用。这些类型的化合物还可减慢治疗剂的释放，并且在优选快速或立即 生物利用时，是不理想的。
[0012] 全氟化合物也已经被描述为诸如蛋白质和肽之类生物活性试剂的可能的非水性 液体载体。例如，US6458376描述了对于眼科应用（例如，局部施用的滴眼剂)所建议的组合 物，其中包括寡肽和蛋白质生长因子的治疗/诊断化合物悬浮于全氟化碳或氟化硅油中或 在至少一种表面活性剂存在下悬浮。然而，没有提及包含抗体或抗体片段和衍生物的此类 组合物。
[0013] US6730328描述了热稳定制剂，其中将非水性、疏水、非反应性载体(诸如矿物油、 全氟萘烷、甲氧氟烷、全氟三丁胺和十四烷）用于包含蛋白质、蛋白质化合物和核酸的悬浮 液组合物。提出用于胃肠外、透皮、粘膜、口腔和肠内给药方法的制剂，及其用于经由可植入 装置长期连续给药和输送的用途。然而，未公开抗体或抗体片段或衍生物在此类载体中的 悬浮液的具体实例，也不具有关于此类组合物在升高的温度下超过三个月时间点的稳定性 的任何教导。也未展示这些类型的组合物的实际组织相容性。
[0014] WO 2011/073134公开了环孢素，分子量为1202.31的环状多肽的半氟化烷烃溶液， 其任选在助溶剂诸如乙烷存在下。虽然以任选替代方式提及了悬浮液和乳液，但没有具体 公开此类组合物，或任何包含千道尔顿范围内的高分子量蛋白质物质，诸如抗体或抗体片 段或衍生物的组合物。
[0015] 因此本发明的主题是提出新型抗体组合物，其克服了与本领域当前已知的制剂相 关联的任何限制和缺点。
【发明内容】
[0016] 在第一方面，本发明提出抗原结合的多肽或蛋白质和液体载体的新型组合物，所 述液体载体包含式RFRH的半氟化烷烃，其中RF为具有4至12个碳原子的直链全氟化烃片段， 并且其中RH为具有4至8个碳原子的直链烷基基团。抗原结合的多肽或蛋白质掺入组合物中 从而形成分散体或悬浮液。
[0017] 在另一方面，抗原结合的多肽或蛋白质可选自单克隆抗体、抗体片段、多克隆抗 体、包含抗体片段的融合蛋白、或抗体-药物偶联物。
[0018] 在另一方面，本发明提供用于治疗、预防或诊断有需要的患者的疾病或病症的方 法，所述方法包括给药组合物的步骤，所述组合物包含抗原结合的多肽或蛋白质，以及液体 载体，所述液体载体包含式RFRH的半氟化烷烃，其中RF为具有4至12个碳原子的直链全氟化 烃片段，并且其中RH为具有4至8个碳原子的直链烷基基团，并且其中抗原结合的多肽或蛋 白质掺入组合物中从而形成分散体或悬浮液。
[0019] 在另一个实施方式中，本发明提供稳定抗原结合的多肽或蛋白质的方法，所述方 法包括将抗原结合的多肽或蛋白质与液体载体混合以形成分散体或悬浮液的步骤，所述液 体载体包含式RFRH的半氟化烷烃，其中RF为具有4至12个碳原子的直链全氟化烃片段，并且 其中RH为具有4至8个碳原子的直链烷基基团。
【具体实施方式】
[0020] 在第一方面，本发明提供组合物，所述组合物包含抗原结合的多肽或蛋白质以及 液体载体，所述液体载体包含式RFRH的半氟化烷烃，其中RF为具有4至12个碳原子的直链全 氟化烃片段，并且其中RH为具有4至8个碳原子的直链烷基基团。另外，抗原结合的多肽或蛋 白质掺入组合物中从而形成分散体或悬浮液；即抗原结合的多肽或蛋白质分散或悬浮于液 体载体中。
[0021] 从药物角度来看，半氟化烷烃提供了多种优点。它们基本上是非毒性的并且发现 在局部或胃肠外给药时被各种类型的人或动物组织很好地耐受。此外，它们是化学惰性的 并且通常与药物制剂中的活性或非活性成分相容。它们还能够溶解大范围的化合物，诸如 小分子活性成分和许多常用的药学上可接受的赋形剂，这可能是由于它们固有的两亲性。 另外，半氟化烷烃在充当不溶或难溶化合物(诸如抗原结合蛋白质或多肽）的载体时，形成 具有非常有用的物理或药物特性的分散体或悬浮液，即具有很少的或不具有形成固体的不 可分散的沉淀物的趋势。
[0022] 本发明人已经发现半氟化烷烃作为液体载体存在于包含抗原结合的蛋白质或多 肽的组合物中具有对这些组分的显著的稳定效应。具体地讲，包含作为液体载体的半氟化 烷烃的组合物能够基本上防止或抑制其在室温和甚至在较高的温度诸如40°C下在相当长 的时间段内聚集并减少化学降解，但不丧失生物活性。
[0023]还发现抗原结合蛋白质在半氟化烷烃中的分散体或悬浮液表现出显著的物理稳 定性程度。漂浮或沉淀的发生缓慢进行，留出足够的时间用于在将具有分散体或悬浮液的 容器(例如小瓶)温和振摇或涡旋之后取出剂量。半氟化烷烃中的抗原结合蛋白质颗粒呈现 出在很大程度上保留其原始粒度分布，并且容易再分散;差再分散性的聚集体看起来未形 成。重要的是，从精度和重复性来看，这提供了更高的给药精度水平。
[0024] 相反，在其它化学惰性载体中的悬浮液或分散体趋于不稳定，导致形成致密且再 分散性差的聚集体，并且使得精确给药具有挑战性，或在一些情况下不可能，诸如导致通常 用于皮下注射的细规格针堵塞。聚集的蛋白质颗粒还存在引发不良免疫反应的高风险。
[002