氨基葡萄糖衍生物阳离子脂质体纳米颗粒的制备方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一系列氨基葡萄糖衍生物阳离子脂质体纳米颗粒的制备方法。
【背景技术】
[0002] 基因治疗是近年来医学界公认的治疗方法，该方法是将外来遗传基因导入靶细胞 或组织，通过特定细胞的遗传表达从而达到治疗目的的一种生物医学技术。其中，非病毒载 体相关研究日趋广泛，涉及载体种类颇多，在基因治疗中的应用也越来越活跃，且在提高转 基因效率和深入研究转染机制等方面取得了重大进展。非病毒载体具有低毒性、免疫反应 低、化学结构可修饰、生物相容性优良等特点。而作为非病毒性载体种类之一，阳离子脂质 体在临床医学试验中具有广阔的发展前景。阳离子脂质体本身带有正电荷，所以可作为带 负电荷药物的传递载体，特别适用于蛋白、多肽、DNA和RNA类药物，故在抗病毒、抗癌症等 方面的基因治疗研究中有独特应用。
[0003] 以氨基葡萄糖盐酸盐为原料，通过全乙酰化、脱1-0-乙酰基、三氯乙酰亚胺酯化、 糖苷化、叠氮化、脱全部乙酰基、4, 6异丙叉基保护、苄氧基保护、脱叉基、醚化、还原氨化和 季铵盐化反应，合成不同疏水链长度和不同物理结构的一系列氨基葡萄糖衍生物阳离子脂 质体：办-(： 12-6111嫩^獻、办-(：14-6111嫩^獻、办-(：16-6111嫩^獻和办-(： 18-6111嫩^獻； 以氨基葡萄糖盐酸盐为原料，通过全乙酰化、脱1-0-乙酰基、三氯乙酰亚胺酯化、糖苷化、 叠氮化、脱全部乙酰基、还原氨化、叔胺化、和季铵盐化反应，合成不同疏水链长度、和不 同物理结构的一系列氨基葡萄糖衍生物阳离子脂质体：GluNAc-DiC 12MA、GluNAc-DiC14MA、 GluNAc-DiC16MA和GluNAc-DiClsMA ;利用上述八种氨基葡萄糖衍生物阳离子脂质体带正电 荷的季铵盐头部可通过静电作用结合核酸药物，利用带长链的疏水端可与细胞壁膦脂双分 子层结合的特征，通过融合细胞内吞作用和膜融合作用，实现核酸药物从胞外到胞内的转 运。
[0004] 氨基葡萄糖衍生物阳离子脂质体纳米颗粒具有结构稳定性好、粒度尺寸适中、粒 径分布窄、表面电荷适中、制备成本低廉等优点，能满足DNA转运载体应具备的基本要求。
【发明内容】
[0005] 本发明的目的是提供一种合成成本低、操作容易的一系列氨基葡萄糖衍生物阳离 子脂质体纳米颗粒的制备方法。
[0006] 本发明提供的这种氨基葡萄糖衍生物阳离子脂质体纳米颗粒的制备方法，包括如 下步骤： (1)以氨基葡萄糖盐酸盐为原料，以吡啶为反应溶剂和缚酸剂，乙酸酐为酰化试剂，进 行乙酰化反应。经柱层析分离纯化得到白色粉末状固体1，3, 4, 6-四-0-乙酰基-2-乙酰 氨基-2-脱氧-D-批喃匍萄糖； ⑵以一定比例为混合的四氢呋喃和甲醇溶剂，1，3, 4, 6-四-0-乙酰基-2-乙酰氨 基-2-脱氧-D-吡喃葡萄糖与氨气反应，选择性脱1-0-乙酰基，经柱层析分离纯化得到无 色浆状物3, 4, 6-三-0-乙酰基-2-乙酰氨基-2-脱氧-D-吡喃葡萄糖； (3) 以无水二氯甲烷为溶剂，无水碳酸钾固体提供弱碱性环境，3, 4, 6-三-0-乙酰 基-2-乙酰氨基-2-脱氧-D-吡喃葡萄糖与三氯乙腈发生反应，经柱层析分离纯化得到黄 色粉末状固体3, 4, 6-三-0-乙酰基-2-乙酰氨基-2-脱氧-ct -D-吡喃葡萄糖三氯乙酰亚 胺酯； (4) 以二氯甲烷为溶剂，TMSOTf为催化剂，步骤（3)的到得的黄色粉末状固 体3, 4, 6-三-0-乙酰基-2-乙酰氨基-2-脱氧-a -D-吡喃葡萄糖三氯乙酰亚胺 酯与3-氯-1-丙醇发生糖苷化反应，经柱层析分离纯化得到白色固体3' -氯丙基 3, 4, 6-三-0-乙酰基-2-乙酰氨基-2-脱氧-β -D-吡喃葡萄糖苷； (5) 以二甲基甲酰胺为溶剂，3'-氯丙基3, 4, 6-三-0-乙酰基-2-乙酰氨 基-2-脱氧-β -D-吡喃葡萄糖苷与叠氮化钠反应，经柱层析分离纯化得到白色固体3'-叠 氮基丙基2, 3, 4, 6-四-(?-乙醜基-2-乙醜氨基_2_脱氧-β -D-批喃匍萄糖苷； (6) 以甲醇为溶剂，3'-叠氮基丙基2, 3, 4, 6-四-0-乙酰基-2-乙酰氨基-2-脱 氧-β-D-吡喃葡萄糖苷与氨气反应脱去全部乙酰基，经柱层析分离纯化得到白色固体 3' -叠氮基丙基2-乙醜氨基_2_脱氧-β -D-批喃匍萄糖苷； (7) 以步骤（6)得到的3'-叠氮基丙基2-乙醜氨基-2-脱氧-β-D-批喃匍萄糖苷为 原料，2, 2-二甲氧基丙烷为溶剂及反应物，以浓硫酸为催化剂，室温反应，经柱层析分离纯 化得到无色油状液体3叠氮基丙基4, 6-0-异丙氧叉基-2-乙酰氨基-2-脱氧-β -D-吡 喃葡萄糖苷； (8) 以V，二甲基甲酰胺为溶剂，以氢化钠为催化剂，3'-叠氮基丙基4, 6-0-异丙氧 叉基-2-乙酰氨基-2-脱氧-β -D-吡喃葡萄糖苷与溴化苄反应，经柱层析分离纯化得到白 色固体3' -叠氮基丙基3-0-苄基-4, 6-0-异丙氧叉基-2-乙酰氨基-2-脱氧-β -D-吡 喃葡萄糖苷； (9) 以甲醇为溶剂，3'-叠氮基丙基3-0-苄基-4, 6-0-异丙氧叉基-2-乙酰氨基-2-脱 氧-β -D-吡喃葡萄糖苷与乙酰氯反应脱去异丙叉基，不经分离纯化直接进行下一步反应。 以Λ；#-二甲基甲酰胺为溶剂，以氢化钠为催化剂，3' -叠氮基丙基3-0-苄基-2-乙酰氨 基-2-脱氧-β -D-吡喃葡萄糖苷与正烷基溴发生威廉姆逊醚化反应，经柱层析分离纯化得 到3' -叠氮基丙基3-0-苄基-4, 6-二-0-烷基-2-乙酰氨基-2-脱氧-β -D-批喃葡萄 糖苷； (10) 以甲醇为溶剂，钯碳为催化剂，3'-叠氮基丙基3-0-苄基-4, 6-二-0-正烷 基-2-乙酰氨基-2-脱氧-β -D-吡喃葡萄糖苷与甲醛和氢气反应得到叔胺，经柱层析分 离纯化得到3' -㈧二-甲基氨基）丙基3-0-苄基-4, 6-二-0-正烷基-2-乙酰氨 基-2-脱氧-β -D-吡喃葡萄糖苷； (11) 步骤（10)得到的3' -㈧，二-甲基氨基）丙基3-0-苄基-4, 6-二-0-正烷 基-2-乙酰氨基-2-脱氧-β -D-吡喃葡萄糖苷与碘甲烷进行季铵盐化反应，经柱层析分离 纯化得白色固体； (12) 以步骤（6)得到的3' -叠氮基丙基2-乙醜氨基-2-脱氧-β -D-批喃匍萄糖苷 为原料，以四氢呋喃和水为溶剂，用三苯基膦还原叠氮得到伯胺，经柱层析分离纯化得黄色 油状液体3' -氨基丙基2-乙酰氨基-2-脱氧-β -D-吡喃葡萄糖苷； (13) 步骤（12)得到的3' -氨基丙基2-乙醜氨基-2-脱氧-β-D-批喃匍萄糖苷，以 一定比例为混合的四氢呋喃和甲醇溶剂，无水碳酸钾提供碱性环境，在加热的条件下与溴 代烷烃反应，经相应的分离纯化处理得白色固体3'-OV，二-正烷基）丙基2-乙酰氨 基-2-脱氧-β -D-吡喃葡萄糖苷； (14) 步骤（13)得到的3' -〇V，7V-二-正烷基）丙基2-乙醜氨基_2_脱氧-β -D-批 喃葡萄糖苷与碘甲烷进行季铵盐化反应，经柱层析分离纯化得白色固体； (15) 步骤（11)和步骤（14)得到的白色固体经超声波振荡水分散后得到相应的氨基葡 萄糖衍生物阳离子脂质体纳米颗粒。
[0007] 以氨基葡萄糖盐酸盐为原料，以吡啶为反应溶剂和缚酸剂，乙酸酐为酰化试剂，进 行乙酰化反应，反应温度：l〇°C - 20°C ;反应时间：12 h ;反应投料比为：氨基葡萄糖盐酸盐 (mol):乙酸酐（mol) = 1 : 7.5 ;结晶使用溶剂为：石油醚：乙酸乙酯=10 : 1(体积 比）；所得1，3, 4, 6-四-0-乙酰基-2-乙酰氨基-2-脱氧-D-吡喃葡萄糖，以四氢呋喃 和甲醇为混合溶剂（四氢呋喃：甲醇=5 : 2,体积比），常温下通入氨气反应，经柱层析 分离纯化得无色油状液体3, 4, 6-三-0-乙酰基-2-乙酰氨基-2-脱氧-D-吡喃葡萄糖， 反应时间：40 min - 50 min;柱层析分离洗脱剂为：石油醚：乙酸乙酯=1 : 1(体积 比）；所得3, 4, 6-二-(?-乙醜基-2-乙醜氨基_2_脱氧-D-批喃匍萄糖，以无水二氯甲烧 为溶剂，无水碳酸钾提供弱碱性环境，常温下与三氯乙腈反应，经柱层析分离纯化得黄色固 体3, 4, 6-三-0-乙酰基-2-乙酰氨基-2-脱氧-ct -D-吡喃葡萄糖三氯乙酰亚胺酯，反应 时间：4 h ;反应投料比为：3, 4, 6-三-0-乙酰基-2-乙酰氨基-2-脱氧- a -D-吡喃葡萄 糖三氯乙酰亚胺酯（mol):三氯乙腈（mol):无水碳酸钾（mol) = 1 : 2.5 : 1;柱层析 分离洗脱剂为：石油醚：乙酸乙酯=1: 1 (体积比）；所得3, 4, 6-三-0-乙酰基-2-乙 酰氨基-2-脱氧-a -D-吡喃葡萄糖三氯乙酰亚胺酯，以无水二氯甲烷为溶剂，4A分子筛 为除水剂，以TMSOTf为催化剂，在氮气的保护下与3-氯-1-丙醇反应，经柱层析分离纯化 得白色晶体3' -氯丙基3, 4, 6-三-0-乙酰基-2-乙酰氨基-2-脱氧-β -D-吡喃葡萄糖 苷，反应温度：_20°C至室温；反应时间：10min ;反应投料比为：3,4,6_三-0-乙酰基-2-乙 酰氨基-2-脱氧-ct-D-批喃葡萄糖三氯乙酰亚胺酯（mol) : 3-氯-1-丙醇（mol): TMSOTf (mol) = 1 : 3 : 0.01;柱层析分离洗脱剂为：石油醚：乙酸乙酯=1 : 2(体 积比）；所得3'-氯丙基3, 4, 6-二-(?-乙醜基-2-乙醜氨基_2_脱氧-β-D-批喃匍萄 糖苷，以二甲基甲酰胺为溶剂，在加热条件下与叠氮化钠反应，经柱层析分离纯化得 3'_叠氮基丙基2, 3, 4, 6-四-0-乙酰基-β -D-吡喃葡萄糖苷，反应温度：75°C，反应时间： 24 h ;反应投料比为：3' -氯丙基2, 3, 4, 6-四-0-乙酰基-β -D-吡喃葡萄糖苷（mol): 叠氮化钠（mol) = 1 : 6;柱层析分离洗脱剂为：石油醚：乙酸乙酯=1 : 1(体积比）。 3' -叠氮基丙基2, 3, 4, 6-四-(?-乙醜基-2-乙醜氨基_2_脱氧-β -D-批喃匍萄糖苷，以 甲醇为溶剂，通入氨气至饱和条件下反应，经柱层析分离纯化得3'-叠氮基丙基2-乙酰氨 基-2-脱氧-β -D-吡喃葡萄糖苷，反应时间：12 h ;柱层析分离洗脱剂为：乙酸乙酯：甲 醇=4 : 1(体积比）；所得3'-叠氮基丙基2-乙醜氨基_2_脱氧-β-D-批喃匍萄糖苷， 以2, 2-二甲氧基丙烷为溶剂及反应物，以浓硫酸为催化剂，室温反应，经柱层析分离纯化 得3'-叠氮基丙基4, 6-(9-异丙氧叉基-2-乙醜氨基_2_脱氧-β -D-批喃匍萄糖苷，反应 时间：4 h，柱层析分离洗脱剂为：石油醚：乙酸乙酯=1 : 1(体积比）；所得3'-叠氮基 丙基4, 6-0-异丙氧叉基-2-乙酰氨基-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖苷，以二甲基甲 酰胺为溶剂，氢化钠为催化剂，常温下与溴化苄反应，经柱层析分离纯化得3' -叠氮基丙基 3-0-苄基-4, 6-0-异丙氧叉基-2-乙酰氨基-2-脱氧-β -D-吡喃葡萄糖苷，反应时间：10 h ;反应投料比：3'_叠氮基丙基4, 6-(9-异丙氧叉基-2-乙醜氨基_2_脱氧-β -D-批喃匍 萄糖苷（mol):氢化钠（mol):溴化节（mol) = 1 : 4 : 2。柱层析分离洗脱剂为：石油 醚：乙酸乙酯=8 : 1(体积比）；所得3'-叠氮基丙基4, 6-0-异丙氧叉基-2-乙酰氨 基-2-脱氧-β -D-吡喃葡萄糖苷，以甲醇为溶剂，与乙酰氯反应脱除异丙叉基，反应结束后 不经分离纯化直接进行下一步反应。以二甲基甲酰胺为溶剂，氢化钠为催化剂，常温 下与月桂基溴反应，经柱层析分离纯化得3 ' -叠氮基丙基3-0-苄基-4, 6-二-0-正十二烷 基_2_乙醜氨基_2_脱氧-β-D-批喃匍萄糖苷，反应时间：10 h ;反应投料比：3'_叠氮基丙 基3-(9-苄基_2_乙醜氨基_2_脱氧-β-D-批喃匍萄糖苷（mol):氢化钠（mol):月桂基 溴（mol) = 1 : 6 : 4 ;柱层析分离洗脱剂为：石油醚：乙酸乙酯=8 : 1 (体积比）。以 甲醇为溶剂，钯碳为催化剂，与甲醛和氢气反应，经柱层析分离纯化得3'-㈧二-甲基氨 基）丙基3-(9-苄基_4,6_二-(?-正十二烷基-2-乙醜氨基-2-脱氧-β-D-批喃匍萄糖苷， 反应时间：24 h;反应投料比：3'_叠氮基丙基3-0-苄基-4, 6-二-0-正十二烷基-2-乙酰 氛基_2_脱氧-β-D-批喃匍萄糖昔(mol):甲酸(mol) = 1 : 10,3'_叠氣基丙基3-(9_节 基_4,6_二-(?-正十二烷基_2_乙醜氨基_2_脱氧-β-D-批喃匍萄糖苷（g):把碳（g)= 1 : 0.3;柱层析分离洗脱剂为：乙酸乙酯：甲醇=5 : 1(体积比）；所得3'-㈧二-甲 基氨基）丙基3-0-苄基-4, 6-二-0-正十二烷基-2-乙酰氨基-2-脱氧-β -D-吡喃葡 萄糖苷，以四氢呋喃为溶剂，常温下与碘甲烷反应，分离纯化得3' -㈧三甲基碘化铵 基）丙基3-(9-苄基-4, 6-二-(?-正十二烷基-2-乙醜氨基-2-脱氧-β -D-批喃匍萄糖 苷，反应时间：3 h;反应投料比：3'-冰#_二-甲基氨基）丙基3-0-苄基-4,6-二-0-正 十二烷基-2-乙酰氨基-2-脱氧-β-D-批喃葡萄糖苷（mol):碘甲烷（mol) = 1 : 4;纯 化：反应混合液经冰浴冷却析晶；所得白色固体经超声波振荡水分散后得到阳离子脂质体 3 ' -㈧W 三甲基碘化铵基）丙基3-0-苄基-4, 6-二-0-正十二烷基-2-乙酰氨基-2-脱 氧-β -D-吡喃葡萄糖苷（简写为i/i-C12-GluNAc-TMA)纳米颗粒。
[0008] 所得3' -叠氮基丙基4, 6-0-异丙氧叉基-2-乙酰氨基-2-脱氧-β -D-吡喃葡 萄糖苷，以二甲基甲酰胺为溶剂，氢化钠为催化剂，常温下与肉豆蘧基溴反应，经柱层 析分离纯化得3' -叠氮基丙基3-0-苄基-4, 6-二-0-正十四烷基-2-乙酰氨基-2-脱 氧-β-D-批喃匍萄糖苷，反应时间：10 h;反应投料比：3'_叠氮基丙基3-(9-苄基_2_乙 酰氨基-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖苷（mol):氢化钠（mol):肉豆蘧基溴（mol) = 1 :6 : 4;柱层析分离洗脱剂为：石油醚：乙酸乙酯=8 : 1(体积比）。以甲醇为溶剂， 钯碳为催化剂，与甲醛和氢气反应，经柱层析分离纯化得3' -㈧二-甲基氨基）丙基 3-0-苄基-4, 6-二-0-正十四烷基-2-乙酰氨基-2-脱氧-β -D-吡喃葡萄糖苷，反应时 间：24 h;反应投料比：3'_叠氮基丙基3-0-苄基-4, 6-二-0-正十四烷基-2-乙酰氨 基_2_脱氧-β-D-批喃匍萄糖昔（mol):甲酸（mol) = 1 : 10,3'_叠氣基丙基3-(9_节 基-4, 6-二-0-正十四烷基-2-乙酰氨基-2-脱氧-β -D-批喃葡萄糖苷（g):钯碳（g)= 1 : 0.3;柱层析分离洗脱剂为：乙酸乙酯：甲醇=5 : 1(体积比）；所得3'-㈧二-甲 基氨基）丙基3-0-苄基-4, 6-二-0-正十二烷基-2-乙酰氨基-2-脱氧-β -D-吡喃葡 萄糖苷，以四氢呋喃为溶剂，常温下与碘甲烷反应，分离纯化得3' -㈧三甲基碘化铵 基）丙基3-0-苄基-4, 6-二-0-正十四烷基-2-乙酰氨基-2-脱氧-β -D-吡喃葡萄糖 苷，反应时间：3 h;反应投料比：3'-冰#_二-甲基氨基）丙基3-0-苄基-4,6-二-0-正 十四烷基-2-乙酰氨基-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖苷（mol):碘甲烷（mol) = 1 : 4;纯 化：反应混合液经冰浴冷却析晶；所得白色固体经超声波振荡水分散后得到阳离子脂质体 3 ' -㈧W 三甲基碘化铵基）丙基3-0-苄基-4, 6-二-0-正十四烷基-2-乙酰氨基-2-脱 氧-β -D-吡喃葡萄糖苷（简写为i/i-C14-GluNAc-TMA)纳米颗粒。
[0009] 所得3' -叠氮基丙基4, 6-0-异丙氧叉基-2-乙酰氨基-2-脱氧-β -D-吡喃葡 萄糖苷，以二甲基甲酰胺为溶剂，氢化钠为催化剂，常温下与鲸蜡基溴反应，经柱层 析分离纯化得3' -叠氮基丙基3-0-苄基-4, 6-二-0-正十六烷基-2-乙酰氨基-2-脱 氧-β-D-批喃匍萄糖苷，反应时间：10 h;反应投料比：3'_叠氮基丙基3-(9-苄基_2_乙 酰氨基-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖苷（mol):氢化钠（mol):鲸蜡基溴（mol) = 1 : 6 : 4;柱层析分离洗脱剂为：石油醚：乙酸乙酯=8 : 1(体积比）。以甲醇为溶剂， 钯碳为催化剂，与甲醛和氢气反应，经柱层析分离纯化得3' -㈧二-甲基氨基）丙基 3-0-苄基-4, 6-二-0-正十六烷基-2-乙酰氨基-2-脱氧-β -D-吡喃葡萄糖苷，反应时 间：24 h;反应投料比：3'_叠氮基丙基3-0-苄基-4, 6-二-0-正十六烷基-2-乙酰氨 基_2_脱氧-β-D-批喃匍萄糖昔（mol):甲酸（mol) = 1 : 10,3'_叠氣基丙基3-(9_节 基_4,6_二-(?-正十六烷基_2_乙醜氨基_2_脱氧-β-D-批喃匍萄糖苷（g):把碳（g)= 1 : 0.3;柱层析分离洗脱剂为：乙酸乙酯：甲醇=5 : 1(体积比）；所得3'-㈧二-甲 基氨基）丙基3-0-苄基-4, 6-二-0-正十六烷基-2-乙酰氨基-2-脱氧-β -D-吡喃葡 萄糖苷，以四氢呋喃为溶剂，常温下与碘甲烷反应，分离纯化得3' -㈧三甲基碘化铵 基）丙基3-0-苄基-4, 6-二-0-正十六烷基-2-乙酰氨基-2-脱氧-β -D-吡喃葡萄糖 苷，反应时间：3 h;反应投料比：3'-冰#_二甲基氨基）丙基3-0-苄基-4, 6-二-正十六 烷基-2-乙酰氨基-2-脱氧-β-D-批喃葡萄糖苷（mol):碘甲烷（mol) = 1 : 4;纯化： 反应混合液经冰浴冷却析晶；所得白色固体经超声波振荡水分散后得到阳4离子脂质体 3 ' -㈧W 三甲基碘化铵基）丙基3-0-苄基-4, 6-二-0-正十六烷基-2-乙酰氨基-2-脱 氧-β -D-吡喃葡萄糖苷（简写为i/i-C16-GluNAc-TMA)纳米颗粒。
[0010] 所得3' -叠氮基丙基4, 6-0-异丙氧叉基-2-乙酰氨基-2-脱氧-β -D-吡喃葡 萄糖苷，以二甲基甲酰胺为溶剂，氢化钠为催化剂，常温下与硬脂基溴反应，经柱层 析分离纯化得3' -叠氮基丙基3-0-苄基-4, 6-二-0-正十八烷基-2-乙酰氨基-2-脱 氧-β-D-批喃匍萄糖苷，反应时间：10 h;反应投料比：3'_叠氮基丙基3-(9-苄基_2_乙 酰氨基-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖苷（mol):氢化钠（mol):硬脂基溴（mol) = 1 : 6 : 4;柱层析分离洗脱剂为：石油醚：乙酸乙酯=8 : 1(体积比）。以甲醇为溶剂， 钯碳为催化剂，与甲醛和氢气反应，经柱层析分离纯化得3' -㈧二-甲基氨基）丙基 3-0-苄基-4, 6-二-0-正十八烷基-2-乙酰氨基-2-脱氧-β -D-吡喃葡萄糖苷，反应时 间：24 h;反应投料比：3'_叠氮基丙基3-0-苄基-4, 6-二-0-正十八烷基-2-乙酰氨 基_2_脱氧-β-D-批喃匍萄糖昔（mol):甲酸（mol) = 1 : 10,3'_叠氣基丙基3-(9_节 基_4,6_二-(?-正十八烷基_2_乙醜氨基_2_脱氧-β-D-批喃匍萄糖苷（g):把碳（g)= 1 : 0.3;柱层析分离洗脱剂为：乙酸乙酯：甲醇=5 : 1(体积比）；所得3'-㈧二-甲 基氨基）丙基3-0-苄基-4, 6-二-0-正十八烷基-2-乙酰氨基-2-脱氧-β -D-吡喃葡 萄糖苷，以四氢呋喃为溶剂，常温下与碘甲烷反应，分离纯化得3' -㈧三甲基碘化铵 基）丙基3-0-苄基-4, 6-二-0-正十八烷基-2-乙酰氨基-2-脱氧-β -D-吡喃葡萄糖 苷，反应时间：3 h;反应投料比：3'_㈧二甲基氨基）丙基3-0-苄基-4, 6-二-0-正 十八烷基-2-乙酰氨基-2-脱氧-β-D-批喃葡萄糖苷（mol):碘甲烷（mol) = 1 : 4;纯 化：反应混合液经冰浴冷却析晶；所得白色固体经超声波振荡水分散后得到阳离子脂质体 3 ' -㈧W 三甲基碘化铵基）丙基3-0-苄基-4, 6-二-0-正十八烷基-2-乙酰氨基-2-脱 氧-β -D-吡喃葡萄糖苷（简写为i/i-Cls-GluNAC-TMA)。
[0011] 以四氢呋喃和水为溶剂，用三苯基膦还原3' -叠氮基丙基2-乙酰氨基-2-脱 氧-β-D-批喃匍萄糖苷的叠氮基为氨基，分尚纯化得到3'-氨基丙基2-乙醜氨基_2_脱 氧-β-D-吡喃葡萄糖苷，反应温度：75°C ;反应时间：6 h ;反应投料比：3' -叠氮基丙基 2-乙醜氨基_2_脱氧-β-D-批喃匍萄糖苷（mol):二苯基勝（mol) = 1 : 1.2;纯化：加 水除去杂质；所得3' -氨基丙基2-乙醜氨基_2_脱氧-β -D-批喃匍萄糖苷，以甲醇和乙 醇为混合溶剂，无水碳酸钾为缚酸剂，在加热的条件下与月桂基溴反应，经柱层析分离纯化 得3'-〇V，yV-二正十二烷基）丙基2-乙醜氨基_2_脱氧-β-D-批喃匍萄糖苷，反应温度： 75°C ;反应时间：48 h ;反应投料比：3'_氨基丙基2-乙酰氨基-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖 苷：月桂基溴(mol):无水碳酸钾=1 : 4 : 2,柱层析分离洗脱剂为：乙酸乙酯：甲醇 =4 : 1(体积比）；所得β'-Ον,Λ"-二正十二烷基）丙基2-乙醜氨基_2_脱氧-β-D-批 喃葡萄糖苷，以四氢呋喃为溶剂，常温下与碘甲烷反应，丙酮结晶的到3'-〇V-甲基-#，#-二 正十二烷基碘化铵基）丙基2-乙酰氨基-2-脱氧-β-D-批喃葡萄糖苷，反应时间：3 h，反 应投料比：3' -0V，#-二正十二烷基）丙基2-乙酰氨基-2-脱氧-β -D-吡喃葡萄糖苷： 碘甲烷（mol) = 1 : 4;纯化：丙酮结晶；所得白色固体经超声波振荡水分散后得到阳离子 脂质体3'-〇V-甲基-#，#-二正十二烷基碘化铵基）丙基2-乙酰氨基-2-脱氧-β-D-吡 喃葡萄糖苷（简写为GluNAc-DiC 12MA)纳米颗粒。
[0012] 以甲醇和乙醇为混合溶剂，无水碳酸钾为