甲基阿魏酸在制备预防和治疗酒精性肝病药物中的应用

文档序号:9818771阅读:1125来源:国知局
甲基阿魏酸在制备预防和治疗酒精性肝病药物中的应用
【技术领域】
[0001] 本发明涉及医药技术领域,具体地说是甲基阿魏酸在制备预防和治疗酒精性肝病 药物中的应用。
【背景技术】
[0002] 酒精性肝病(alcoholic liver disease ALD)是由于长期大量饮酒所导致的肝脏 疾病,初期通常表现为脂肪肝,如果损伤持续存在,进而可发展成酒精性肝炎、肝纤维化和 肝硬化,严重酗酒时可诱发广泛肝细胞坏死甚至肝功能衰竭。酒精滥用和酒精依赖己成为 当今世界上日益严重的公共卫生问题,在我国酒精性肝病是仅次于病毒性肝炎的第二大肝 脏疾病。随着我国居民生活方式、膳食结构的改善和酒类产量及变种的增加,我国酒精性肝 病在所有肝病中的比例有逐年增加趋势。因此研究有明确疗效的治疗酒精性肝损伤的药物 显得非常必要。积极开展有效中草药及其单体药物防治酒精性肝病的临床研究,成为肝病 领域面临的新课题。
[0003] 酒的主要成份乙醇,经胃肠消化器官后约有90%在肝脏中被代谢。乙醇代谢过程 会产生大量的活性氧(reactive oxygen species,R0S) AOS包括超氧阴离子(〇2_)、过氧化 氢(H202)、羟自由基(0H-),过量的R0S使得机体抗氧化因子耗竭,打破体内氧化还原状态的 平衡,表现在肝脏超氧化物歧化酶(S0D)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)和过氧化氢酶 (CAT)等酶的活力下降,丙二醛(MDA)含量增加,肝脏损伤,导致脂质代谢异常,肝脏炎症反 应,肝脏纤维化,是ALD发病的重要机制。
[0004] 甲基阿魏酸是从蝉翼藤茎皮提取得到的有机酸类化合物,化学名为3,4_二甲氧 基-苯丙烯酸,分子结构式如下:
[0005]
[0006] 现有报道表明,甲基阿魏酸具有较强的抗病毒、免疫增强和抗纤维化等多种活性。 甲基阿魏酸抗肝纤维化的作用体现在可以抑制肝星状细胞HSC-T6的增殖与胶原分泌;可以 影响四氯化碳(CCL 4)及D-氨基半乳糖造成的急性肝损伤小鼠模型血清谷丙转氨酶(ALT)、 谷草转氨酶(AST)的活性及肝组织MDA、SOD和GSH-Px的含量;可以影响CCL 4造成的慢性肝纤 维化大鼠模型的血清AST、ALT、胆红素(BIL)、血清中层粘蛋白(LN)、透明质酸(ΗΑ)、ΙΠ 型前 胶原(PC-m)、IV胶原(IV-C)和肝组织中羟脯氨酸(HyP)含量,来实现抗纤维化的作用。
[0007] 甲基阿魏酸对乙醇诱导的酒精性肝病的预防与治疗作用却未见报道。

【发明内容】

[0008] 本发明的目的是提供甲基阿魏酸的新用途,即在制药中的应用。
[0009] 本发明的技术方案是:一种甲基阿魏酸的新用途,它是用于治疗酒精性肝病,即是 将从蝉翼藤中提取出的甲基阿魏酸制成片剂、胶囊、颗粒或注射剂等剂型以治疗酒精性肝 病,其剂量为l-l〇〇mg/kg甲基阿魏酸/日,可分成2-3次服用。
[0010]本发明所述甲基阿魏酸是从蝉翼藤茎皮提取得到的有机酸类化合物,其提取工艺 为:将蝉翼藤茎皮粉碎,95%乙醇回流提取3次-浸膏用100~200目硅胶拌样-以氯仿回流 洗脱-洗脱液减压浓缩-中压硅胶色谱三氯甲烷:乙醚(1:5)梯度洗脱-收集洗脱液,挥去 溶剂得白色粉末结晶-再经重结晶和Sephadex LH220凝胶柱色谱纯化(甲醇洗脱)-得到 白色针状结晶。
[0011] 本发明通过乙醇诱导L-02细胞损伤模型证实甲基阿魏酸可以降低MDA水平,并提 高S0D、GSH-Px与CAT的活性。通过动物试验证明,甲基阿魏酸可以显著降低急性酒精性肝损 伤大鼠的ALT、AST、MDA含量,显著提高S0D、GSH-Px和CAT活性;甲基阿魏酸可以明显降低慢 性酒精性肝损伤大鼠的甘油三酯(TG)、ALT、AST和MDA含量,显著提高S0D、GSH-Px和CAT活 性。以上细胞与动物实验结果表明:甲基阿魏酸具有确切的预防和治疗酒精性肝病作用,可 单方或复方用于制备预防和治疗酒精性肝病的药物。
【具体实施方式】
[0012] 以下通过实施例对本发明作进一步的阐述:
[0013] 实施例1甲基阿魏酸对乙醇诱导人正常肝细胞系(L-02)的影响
[0014] 1.1不同浓度甲基阿魏酸对L-02细胞存活率的观察。
[0015] 取对数期细胞接种于96孔板,每孔5000个细胞,24h后加入一定浓度的甲基阿魏 酸,每个药物浓度设5个复孔,加药44h后加入MTT( 5mg/ml) 20ul继续孵育4h,将培养基倒尽, 吸干,每孔加入二甲亚砜200ul,混匀后置自动酶标仪(检测波长490nm)读取各孔光密度值 (0D值),记录结果,并计算存活率。存活率(%) = (实验组一空白对照组)/(正常对照组一空 白对照)X 100 %。结果见表1。
[0016] 表1.甲基阿魏酸对L-02细胞存活率的影响
[0017]
[0018] 从结果可知,500 . Oμg/ml以下的甲基阿魏酸细胞存活率大于90 %,对L-02细胞没 有毒性。
[0019] 1.2甲基阿魏酸对5%乙醇诱导L-02细胞模型的影响
[0020] L-02细胞接种于96孔板,每孔2万个细胞,24小时后弃去培养液,将细胞分为10组, 每孔加含10%胎牛血清的DMEM培养基0.2ml和诱导药物。1为正常组、2为5%乙醇模型组、3-10依次为5 %乙醇模型组+MFA药物干预,MFA的浓度依次为0.78125、1.5625、3.125、6.25、 12.5、25、50、lOOyg/万个细胞,每个药物浓度设5个复孔,细胞培养8h后加 MTT (5mg/ml) 20ul 继续孵育4h,测0D值并计算存活率。结果见表2。
[0021] 表2甲基阿魏酸对5%乙醇诱导的L-02细胞存活率的影响
[0022]
[0023] bcl-2 备注:**P<0 · 01,ΛΛΡ<0 · 01,ΛΡ<0 · 05。
[0024] 结果通过SPSS的单因数方差分析,模型组与正常组有显著性差异,Ρ〈0.01,除3、4 药物干预组外,其余药物干预组与模型组均有差异(ρ〈0.01或?〈〇.〇5)。7、8、9、10组药物干 预组对细胞存活率影响接近,组间差异不显著?>〇.〇5,5、6、7组间差异显著0〈〇.〇1或?〈 0.05),因此选择3.125、6.25和12.5yg/万个细胞浓度的甲基阿魏酸作为干预细胞的3个药 物浓度。
[0025] 1.3甲基阿魏酸对5%乙醇诱导L-02细胞内MDA含量和S0D、GSH-Px、CAT酶活性的测 定
[0026]取对数期细胞接种于6孔板,每孔32万个细胞,在5 %⑶2,37 °C培养箱培养24h,弃 去培养液,将细胞分为正常对照组,5%乙醇模型组和5%乙醇+药物低、中、高剂量组。每组 加含10%胎牛血清的DMEA培养基0.32ml,模型组入加乙醇使终浓度为5%,药物组加终浓度 为5%乙醇和甲基阿魏酸(浓度依次为3.125、6.25和12.5yg/万个细胞),各设3个复孔。培养 箱孵育12h后收集细胞,反复冻融破碎后,按MDA、S0D、GSH-Px和CAT检测试剂盒方法测定含 量与酶活性,结果见表3。
[0027] 表3.甲基阿魏酸对乙醇诱导L-02细胞MDA、S0D、GSH-Px和CAT的影响
[0028]
[0029] 注:与正常对照组比较叩<0.05,bP<0.01;与模型组比较叩<0.05,dP<0.01。
[0030] 由表3可知,与正常对照组相比,乙醇模型组MDA水平显著上升,S0D和GSH-Px、CAT 的活性明显下降(P<〇.01),经甲基阿魏酸处理,MDA含量下降,S0D、GSH-Px和C
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