包含没食子酸酯和没食子酸酰胺的组合物的制作方法
【专利说明】包含没食子酸酯和没食子酸酿胺的组合物
[0001] 背景 多酚是在广泛多种植物、水果和蔬菜中发现的天然化合物的大家族。近年来，多酚因为 其潜在的健康益处在科学界和大众传播媒介吸引非常多的注意。例如，已知多酚是强抗氧 化剂，因此据信其具有潜在的抗炎和抗癌性质。绿茶中多酚相对比较高，包括表没食子儿茶 素没食子酸酯(EGCG)，也称为表没食子儿茶素3-没食子酸酯，其是表没食子儿茶素和没食 子酸的酯。已知EGCG的抗氧化特性，也已知其抗菌特性。通过抑制口腔细菌，EGCG可抑制牙 龈炎，已知包含EGCG的口腔护理产品。
[0002] 作为对抗细菌感染的防御由哺乳动物细胞产生和释放抗微生物肽(AMP)比如LL-37。通过对阴离子细菌膜的静电吸引将AMP吸向细菌。它们是两亲性的，这允许AMP穿过和破 坏膜，产生孔和杀死细菌。AMP对细菌有特异性，因为人细胞由胆固醇和蛋白质稳定。W0 2010/121213 (其内容通过引用结合到本文中）假定天然多酚比如具有三羟基苯甲酸酯部 分的EGCG，除了其抗氧化特性以外因刺激上皮细胞产生某些内源性AMP特别是LL-37肽而有 效地作为抗菌剂，所述内源性AMP可杀死口腔内细菌，从而促进健康的牙周情况。
[0003] 但是，EGCG具有一些缺点。第一，因为其复杂的结构，它不能便宜和有效地合成，同 时来自天然来源的提取物可能在质量、纯度和浓度方面变化很大。第二，EGCG不稳定，相对 快地降解形成棕色产物，可能与氧化过程有关。EGCG可以用酸例如抗坏血酸稳定，但这需要 pH〈 4，这对于洁牙剂是不可接受的。在pH=7，抗坏血酸不能有效保护EGCG。在洁牙剂，通过 添加氯化亚锡和减小含水量可延缓变色的发生，但这对功效具有负面影响。
[0004] 已公开许多具有没食子酸酯部分的合成化合物，例如在Kazi等，Anticancer Res. (2004) 24: 943-954中作为蛋白酶体抑制剂用于潜在的抗癌用途，在W0 2010/ 043631中作为蛋白激酶抑制剂可潜在地用于治疗癌症、唐氏综合征或镰状细胞贫血，在US 2010/0137194中作为纤维蛋白溶酶原激活剂抑制剂-1 (PAI-1)抑制剂可潜在地用于调节 脂质代谢。但是这些文献未公开或教导描述的化合物具有潜在的抗菌活性或用途用于局部 应用或口腔或个人护理产品，或者它们对于此类用途相对于EGCG具有任何优点。
[0005] 因此，需要具有类似于或优于EGCG的抗菌活性但制备更便宜且在制剂中更稳定的 化合物。
[0006] 概述 本发明提供供局部使用的组合物，例如口腔护理或个人护理组合物，其包含抗菌有效 浓度的没食子酸或没食子酸酰胺化合物，所述化合物是多取代的环烷基或杂环烷基，其中 取代基选自羟基、羟基甲基、氟代、氯代、氨基、硝基或者式-X_(C0)-(3,4,5-三羟基苯基）的 部分，其中X选自〇和NH，前提是所述取代基包含至少2个与邻近的碳连接的式-X-(C0)-(3， 4,5_三羟基苯基)部分(为方便起见下文有时将该化合物称为环烷基没食子酸酯或CAG)。本 发明进一步提供CAG作为抗微生物剂的用途，例如用于局部个人护理或口腔护理制剂(例如 抗菌洗手皂，或者牙膏或漱口剂），以及治疗和减轻细菌感染和炎性病况如牙龈炎的方法， 所述方法包括将有效量的这些没食子酸酯或没食子酸酰胺化合物局部给予有需要的受试 者，例如治疗牙龈炎的方法，所述方法包括将包含有效量CAG的口腔护理组合物局部给予有 需要的患者的口腔。
[0007] 从下文提供的详述本发明的适用性的其它领域将变得显而易见。应当理解详述和 具体实施例虽然提示本发明的优选实施方案，只意图用于举例说明的目的，并非旨在限制 本发明的范围。
[0008] 详述 下列优选实施方案的描述本质上只是示例性的，决不意图限制本发明、其应用或用途。
[0009] 鉴定可用于口腔护理产品比如洁牙剂或漱口剂的EGCG类似物包括首先鉴定与活 性关联的结构元件然后筛选所选化合物。设计基于文献中可获得的构效关系研究、分子建 模、构象分析、稳定性预测和与容易合成有关的考虑。关于EGCG合成类似物的信息相当罕 见，通常涉及对EGCG结构的最小程度改变。只具有1个1，2,3_三羟基苯环的类似天然产物 (如表没食子儿茶素、儿茶素没食子酸酯)在产生LL-37方面明显不如EGCG有效。此外，在苯 环上的3个羟基及其1，2，3相对定向似乎也对其活性而言是必不可少的。我们利用分子力学 用Chem3D软件进行分子建模。EGCG的构象分析产生2种结构，其显示2个1，2，3-三羟基苯单 元相互堆叠(顺式构象异构体)或接近90度相对定向（反式构象异构体）。这提示功能性EGCG 类似物必须具有2个相互靠近的三羟基苯单元。
[0010] 为了增加物质抗氧化的稳定性，期望在芳环上添加吸电子取代基。羰基借出其自 身作为可能的连接基团以经由设计的支架将2个1，2,3_三羟基苯单元连接一起。这样的连 接可用酮、酰胺或酯促进。这样设计支架使得它迫使2个1，2,3_三羟基苯单元相互靠近，提 供天然EGCG的健康益处而没有变色和稳定性问题。此类支架优选为环烷基或环杂烷基，其 在相邻碳上具有至少2个羟基或氨基以与没食子酸形成酯或酰胺，并任选进一步被羟基、 氯、氟、硝基、氨基和/或携带1，2,3_三羟基苯部分的其它取代基取代。因此例如支架可以是 环戊烷、环己烷、反式-1，2_二羟基环己烷、顺式-1，2_二羟基环己烷、反式-1，2_环己二胺、 顺式-1，2-环己二胺、顺式-1，2-二羟基环戊烷、顺式-1，2-环戊二胺、六氢-哒嗪或吡唑烷， 或者可基于单糖环，如呋喃糖或吡喃糖，其对于更大规模生产具有成本优点。
[0011] 基于这些考虑和电脑模拟（in silico)实验，按照实施例描述特别是关于其从上 皮细胞引发LL-7肽的能力及其抗氧化能力方面，对化合物进行筛选和进一步表征。
[0012] 本发明因此提供供局部应用的组合物(组合物1)，如口腔护理或个人护理组合物， 其包含抗菌有效浓度的呈游离或口腔或局部可接受的盐形式的没食子酸酯或没食子酸酰 胺化合物，所述化合物是多取代的环烷基或杂环烷基(如环戊基、环己基、四氢呋喃或四氢 吡喃），其中取代基选自羟基、羟甲基、氟代、氯代、氨基、硝基或者式-X-(C0)-(3,4,5-三羟 基苯基)部分，其中X选自0和NH，前提是取代基包含至少2个与邻近的碳连接的式4-(0))-(3，4，5-三羟基苯基）部分;例如口腔护理或个人护理组合物，其包含抗菌有效浓度的呈游 离或口腔或局部可接受的盐形式的式1没食子酸酯或没食子酸酰胺化合物：
其中X是0或NH，A是环戊基、环己基、四氢呋喃或四氢吡喃，被1个或更多个羟基、轻甲基 或式-X-( CO) -(3，4，5-三羟基苯基)部分任选取代； 例如， 1.1. 组合物1，其中X是0; 1.2. 组合物1，其中X是NH; 1.3. 上述任何组合物，其中在没食子酸酯或没食子酸酰胺化合物相邻碳上的2个式-X-(C0)-(3,4,5-三羟基苯基)部分相对于彼此处于顺式构型； 1.4. 上述任何组合物，其中在没食子酸酯或没食子酸酰胺化合物相邻碳上的2个式-X-(C0)-(3,4,5-三羟基苯基)部分相对于彼此处于反式构型； 1.5. 上述任何组合物，其中没食子酸酯或没食子酸酰胺化合物是式1化合物且A是环 己基或环戊基； 1.6. 上述任何组合物，其中没食子酸酯或没食子酸酰胺化合物选自式la化合物、式lb 化合物及其混合物：
1.7.上述任何组合物，其中式1化合物选自反式-1，2-环己二醇二没食子酸酯(THDG)、 顺式-1，2-环己二醇二没食子酸酯(CHDG)、顺式-1，2-环戊二醇二没食子酸酯(CPDG)、反式-1，2_环己烷二没食子酸酰胺(THDGA)和顺式-1，2_环己烷二没食子酸酰胺(CHDGA)及其混合 物： 〇
[0013] 1.8.上述任何组合物，它进一步包含表面活性剂、抗氧化剂和/或缓冲剂； 1.9. 上述任何组合物，它呈用于局部应用于皮肤的抗微生物皂、软膏剂、清洁剂或霜 剂形式； 1.10. 上述任何组合物，其中式1化合物的"抗菌有效浓度"意指有效诱导人上皮细胞 释放抗菌肽LL-37的浓度； 2.例如，本发明提供上述任何组合物，它是口腔护理组合物(组合物2 )，如， 2.1.组合物2，它进一步包含有效量的氟化物，如其中氟化物是选自氟化亚锡、氟化 钠、氟化钾、单氟磷酸钠、氟硅酸钠、氟硅酸铵、氟化胺（如Ν'-十八烷基三亚甲基二胺_N，N， N 三(2-乙醇)-二氢氟化物）、氟化铵、氟化钛、六氟磷酸盐及其组合的盐； 2.2 .上述任何组合物2以及下列等等，它包含游离或口腔可接受的盐形式的1-精氨 酸； 2.3. 上述任何组合物2以及下列等等，它包含缓冲剂，如磷酸钠缓冲剂(如磷酸二氢钠 和磷酸氢二钠）； 2.4. 上述任何组合物2以及下列等等，它包含湿润剂，如选自甘油、山梨醇、丙二醇、聚 乙二醇、木糖醇及其混合物； 2.5. 上述任何组合物2以及下列等等，它进一步包含研磨剂或微粒； 2.6. 上一组合物，其中研磨剂或微粒选自碳酸氢钠、磷酸钙(如磷酸二钙二水合物）、 硫酸钙、沉淀的碳酸钙、二氧化硅(如水合二氧化硅）、氧化铁、氧化铝、珍珠岩、塑料颗粒如 聚乙烯及其组合； 2.7. 上述任何组合物2以及下列等等，它包含占总组合物重量约15重量%至约70重量％ 的研磨剂； 2.8. 上述任何组合物2以及下列等等，它